HLA-G与HIV病毒感染的研究进展

影响和干预人类白细胞抗原(HLA)在宿主细胞表面表达是病毒逃避机体抗病毒免疫的重要途径之一。人类白细胞抗原G(HLA-G)是机体内一个重要的免疫耐受分子,多种病毒感染后均可诱导HLA-G分子的表达,促进病毒的免疫逃逸。在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染过程中,HIV可通过多种机制诱导HLA-G分子在单核细胞、T淋巴细胞表面的异常表达及分泌大量可溶性HLA-G(sHLA-G)。HIV诱导表达的HLA-G分子与其受体结合,通过直接抑制NK细胞、T淋巴细胞等免疫细胞的生物学活性或间接诱导HLA-G+Treg发挥免疫抑制功能,使HIV病毒有效逃避宿主的免疫监视及攻击。本文就HLA-G结构、受体、基因多态性与HIV易感性、HIV感染与HLA-G分子异常表达,和HLA-G对免疫细胞的影响等作一综述。     

HLA-G与NK细胞

自然杀伤细胞(natural killer,NK)是天然免疫系统的主要效应细胞,是机体抵抗肿瘤和病毒感染的第一道防线。人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)属于非经典的HLAⅠ类分子,是机体内一个重要的免疫耐受分子。HLA-G抗原对NK细胞的免疫调节功能一方面是依赖于一系列杀伤细胞免疫球蛋白样受体,另一方面是通过调节NK细胞多种趋化因子受体表达。本文就HLA-G对NK细胞调节功能的研究进展作一综述。     

HLA-G多态性研究进展

HL A- G是非经典的 HL A- I类分子 ,限制性地表达在母胎界面的组织细胞上 ,对它在妊娠过程中所发挥的作用已引起广泛的兴趣 ,在肿瘤细胞的免疫逃逸方面的功能也日益受到重视 ,虽有各种假说 ,但具体的作用机制仍不清楚。 HL A- G多态性研究是探讨其作用机制的一条重要途径 ,近年来许多学者在这方面做了大量的工作 ,力求通过 HL A- G基因水平的研究进一步阐明 HL A - G的功能及作用机理。本文就 HL A - G基因结构、基因多态性及其与疾病相关性等方面作简要阐述     

临床肿瘤治疗药物相关基因的研究进展

肿瘤化学药物治疗已经在临床上得以广泛应用，但患者对各类治疗药物的敏感性和不良反应存在明显个体差异，药物相关基因指导下的临床肿瘤药物的个体化治疗是肿瘤治疗最重要的发展方向之一。本文主要介绍了5个与临床抗肿瘤药物疗效及毒性相关的基因：二氢嘧啶脱氢酶(DPD)基因突变与5-氟尿嘧啶(5-Fu)的毒性反应；表皮生长因子受体(EGFR)突变与非小细胞肺癌(NSCLC)中吉非替尼、特罗凯的疗效；核苷酸切除修复酶1(ERCC1)基因多态性与铂类化合物疗效；UDP葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)的遗传变异与羟基喜树碱的毒性反应；胸腺酸合成酶(TS)基因多态性与5-Fu的敏感性，探讨如何预测肿瘤治疗药物的敏感性及不良反应，以指导临床个体化用药。     

抑癌基因ING2真核表达质粒的建立及其对肺癌细胞生长的影响

目的 构建抑癌基因生长抑制因子2(ING2)真核表达载体,研究p33ING2对人肺腺癌细胞A549及人小细胞肺癌细胞NCI-H446体外生长的影响.方法 构建ING2基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-ING2,采用脂质体法分别转染A549和NCI-H446细胞,以未转染组和转染pcDNA3.1(+)空质粒组作为对照,应用RT-PCR、细胞免疫组化和Western blot法分析目的基因及其蛋白表达,CCK8试剂盒分析其对细胞生长的影响,Annexin V-FITC和PI双染流式细胞术观察细胞凋亡的情况.结果 成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1(+)- ING2,转染后细胞株高水平表达ING2 mRNA及p33ING2蛋白.CCK8法检测结果显示:转染pcDNA3.1(+)-ING2的A549细胞和NCI-H446细胞增殖受到抑制,抑制率与pcDNA3.1(+)空质粒转染组比较,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞术凋亡检测结果显示:转染pcDNA3.1(+)-ING2的A549细胞和NCI-H446细胞组凋亡率均高于未转染组和pcDNA3.1(+)空质粒转染组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 ING2蛋白表达能抑制人肺腺癌细胞A549和人小细胞肺癌细胞NCI-H446增殖及增加细胞凋亡率.     

HLA-G与移植免疫

非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-Ⅰb)HLA-G参与抗原递呈,通过相应受体调节NK细胞及T淋巴细胞功能,是一个 重要的免疫调节分子。HLA-G分子的免疫调节作用已从母胎免疫耐受扩展到肿瘤免疫、抗感染免疫和器官移植免疫等领域, 近年来在移植免疫方面取得了重要进展。     

非经典MHC I类分子与免疫调节

从线虫到人类,在病原体识别、信号转导途径及效应机制等方面均高度相似,这些防御机制有着共同的进化起源.至今研究过的脊椎动物中,都存在结构与功能相似的主要组织相容性复合体(MHC),即一组紧密连锁的高度多态性基因组成的染色体区域,其产物表达在不同细胞表面.     

人类白细胞抗原与人类巨细胞病毒

人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV)通过多种途径逃避宿主的免疫监视和防御功能，其主要机制为：合成多种时相蛋白，影响和破坏人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA)分子在宿主2细胞表面的表达，从而干扰抗原递呈及影响NK细胞的杀伤活性。本文就有关最新研究进展作一综述。     

人KIR2DL1-Ig融合蛋白在COS-7细胞的表达

目的：获得人KIR2DL1分子(killer lg—like receptor 2DL1)胞外区与人IgG Fc段的融合蛋白。方法：从人外周血单个核细胞中提取总RNA，通过RT—PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA，经Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后，定向插入真核细胞表达载体CD51negl中。构建的重组真核表达载体CD51negl—KIR2DL1。经酶切分析和测序鉴定后，通过DEAE—dextran／ehloroquine法转染COS—7细胞：瞬时表达后，取培养上清液经亲和层析、ELISA、SDS—PAGE及Western印迹，鉴定融合蛋白的表达及其免疫学活性。结果：序列测定证实，该重组表达载体含有正确的KIR2DL1胞外区基因序列。重组真核表达载体CD5lnegl—KIR2DL1转染COS—7细胞后，ELISA法检测细胞培养上清中有融合蛋白的表达。SDS—PAGE结果显示，该融合蛋白的相对分子质量(Mc)约为73000。Western印迹结果证实，该蛋白能被特异性单克隆抗体(mAb)EB6所识别。结论：KIR2DL1—Ig融合蛋白表达载体成功构建并在COS—7细胞中获得功能性表达，为KIR2DL1的功能及其配体MHC的研究奠定了基础。     

人类白细胞抗原-G突变体cDNA克隆及在K562细胞上的表达

目的：克隆人类白细胞抗原-G(Human leukocyte antligen-G，HLA-G)突变体cDNA，并使其在HLA-I类阴性的K562细胞上获得稳定表达，为研究配-受体之间的识别机制奠定基础。方法：用RT-PCR方法从人子宫蜕膜组织扩增出HLA-GcDNA，得到全长HLA-GPCR产物后，用桥式PCR方法进行定点点突变，将突变的目的基因亚克隆于逆转录，将突变的目的基因亚克隆于逆转录mG-pLNCX表达载体，采用感染的方法将重组质粒转入K562细胞，最后经G418筛选及有限稀释，利用单克隆抗体W6/32进行FACS及mRNA检测，观察HLA-G突变体在靶细胞表面的表达。结果：HLA-G突变体分子在经mG-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达。结论：成功构建了mG-pLNCX表达载体，并使HLA-G突变体分子在HLA-I类阴性的靶细胞K562细胞上获得稳定表达。