microRNA-10a抑制结肠癌肝转移肿瘤相关成纤维细胞活性的研究

目的探讨microRNA-10a(miR-10a)对肝脏微环境中肿瘤相关成纤维细胞(TAFs)的增殖、迁移以及促炎性因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素1(IL-1)βmRNA表达水平的影响。方法收集同一结肠癌患者癌旁正常肝组织和转移至肝脏的病灶组织,采用组织块法建立原代人肝正常成纤维细胞(NFs)和原代TAFs。通过形态学观察和细胞免疫荧光染色对NFs和TAFs进行鉴定,并通过流式细胞术鉴定二者的纯度。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NFs和TAFs中miR-10a的表达水平,并在低表达miR-10a的细胞中过表达miR-10a。随后采用CCK-8实验、划痕实验和RT-qPCR分别检测miR-10a对该细胞增殖、迁移能力以及IL-6、IL-8、IL-1βmRNA表达水平的影响。结果细胞免疫荧光染色显示人细胞角蛋白18(CK-18)在NFs和TAFs中均不表达;成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)在两细胞中均表达;α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在NFs中弱表达,在TAFs中强表达。流式细胞术显示NFs与TAFs中α-SMA阳性率为95.0%和95.3%。miR-10a在TAFs的表达水平为NFs的0.65倍(P<0.01)。过表达miR-10a后TAFs在第3、4和5天增殖能力显著低于同时期的阴性对照组细胞(P<0.05,P<0.05,P<0.01);TAFs的迁移能力在24 h和48 h分别较阴性对照组降低25%和15%(P<0.01,P<0.05),TAFs中IL-6、IL-8、IL-1β的表达水平分别较阴性对照组降低54%、27%和42%(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论miR-10a在TAFs中呈低表达,miR-10a过表达抑制了TAFs的增殖和迁移,并降低炎性因子IL-6、IL-8、IL-1βmRNA的表达,这可能是TAFs抑制肝脏形成转移灶的重要因素。     

CT血管造影分析体外循环与非体外循环冠状动脉旁路移植后的桥血管通畅率

背景:近年来,非体外循环冠状动脉旁路移植后桥血管通畅率是否与传统的体外循环冠状动脉旁路移植相同存在争议.目的:探讨体外循环与非体外循环冠状动脉旁路移植后桥血管时间通畅率的差异性.方法:选取同一操作者行体外循环冠状动脉旁路移植患者100例,按其临床特征及桥血管病变危险因素匹配抽取非体外循环冠状动脉旁路移植患者137例.采用64排多螺旋CT血管造影分析冠脉搭桥后1个月,1年,2年,3年,4年的桥血管通畅情况.结果与结论:共对641条桥血管进行评价,两组中左侧乳内动脉桥血管时间通畅率均高于大隐静脉桥,两组左侧乳内动脉桥和人隐静脉桥血管时间通畅率比较差异均无显著性意义.说明非体外循环与体外循环冠状动脉旁路移植后患者桥血管时间通畅率相似,对于某些适当的患者来说,非体外循环冠状动脉旁路移植不失为一个良好的选择.     

CAAP1抑制肝癌HepG2细胞凋亡而促进其增殖、迁移和侵袭

目的：探讨CAAP1对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法：构建CAAP1过表达载体 pcDNA3/CAAP1 和敲降载体 pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1,转染肝癌 HepG2 细胞后,qPCR 和 WB 实验分别检测 CAAP1 mRNA和蛋白的表达水平。实验分为过表达对照组（pcDNA3）、过表达组（pcDNA3/CAAP1）、敲降对照组（pSilencer 2.1-U6 neo,pSilencer）和敲降组（pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1,shR-CAAP1）,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,WB 检测 cleaved caspase 3蛋白表达水平,CCK-8实验检测各组细胞的增殖情况,克隆形成实验检测各组细胞的集落形成能力,划痕和Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭能力。检索TCGA数据库,分析CAAP1对肝癌患者OS的影响。结果：成功构建CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体shR-CAAP1,转染后pcDNA3/CAAP1组和shR-CAAP1组细胞中CAAP1mRNA及蛋白表达水平均明显增高或降低（均P<0.05）。与pcDNA3组比较,pcDNA3/CAAP1组细胞凋亡率下降32%、cleaved caspase 3蛋白表达水平显著降低（均P<0.05）;与pSilencer组比较,shR-CAAP1 组细胞凋亡率上升 73%,cleaved caspase 3 蛋白表达水平显著升高（均P<0.05）。pcDNA3/CAAP1组细胞增殖显著增强（P<0.05）,shR-CAAP1组细胞增殖显著降低（P<0.05）。pcDNA3/CAAP1组细胞迁移数增加48%、细胞迁移距离增加59%、细胞侵袭数增加52%（均P<0.05）,shR-CAAP1组细胞迁移数减少53%、细胞迁移距离减少29%、细胞侵袭数减少45%（均P<0.05）。TCGA数据库数据分析显示,肝癌组织中CAAP1的高表达与肝癌患者OS呈负相关（P<0.05）。结论：CAAP1能够抑制肝癌HepG2细胞凋亡从而促进其增殖、迁移和侵袭,其可能与肝癌的发生发展密切相关。     

赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化大鼠Smad2、Smad3表达的影响

目的探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠Smad2、Smad3表达的影响。方法采用胆总管结扎(BDL)的手术方法建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,将大鼠随机分为5组:对照组、模型组、赖氨酸组、低剂量RHL组[35mg/(kg·d)]、高剂量RHL组[70mg/(kg·d)]。应用实时荧光定量PCR的方法检测大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA的相对表达量。Western blot的方法检测Smad2、Smad3蛋白时相对表达量的变化。结果与模型组大鼠比较,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P0.05);与模型组大鼠相比,经RHL治疗后胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏组织中Smad2、Smad3蛋白的相对表达量降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 RHL能够抑制肝纤维化的发展,可能是通过抑制Smad2、Smad3mRNA和蛋白的表达,阻断TGF-β1/Smads信号传导通路实现的。     

Wnt5a对肝星状细胞增殖、迁移和衰老的调控作用

目的 寻找抗纤维化的治疗方案和治疗靶点具有重要意义。文章旨在探讨Wnt蛋白家族成员5a(Wnt5a)对肝星状细胞(HSCs)增殖、克隆形成、迁移能力以及衰老的影响。方法 构建胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型，利用芯片分析差异表达的基因。用不同浓度的TGF-β₁刺激肝星状细胞，将实验分为3组，分别为只加完全培养基的对照组以及用5μg/L和10μg/L TGF-β₁刺激的处理组，通过qRT-PCR、Western blot和免疫荧光检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原α1(COL1A1)和Wnt5a的表达。Wnt5a的siRNA(si-Wnt5a)转染LX-2细胞后，通过qRT-PCR和Western Blot检测LX-2细胞中α-SMA、COL1A1、Wnt5a的mRNA和蛋白表达；通过CCK-8、集落形成、Transwell、划痕、β-半乳糖苷酶染色分别检测LX-2细胞的增殖、集落形成、迁移能力以及细胞的衰老情况。利用生物信息学网站预测与Wnt5a有靶向关系的miRNAs, STRING数据库分析与Wnt5a有相互作用的蛋白，并用Cytosc...     

TGFB1抑制A549细胞增殖的分子机制研究

①目的 构建并鉴定TGFB1真核表达载体pcDNA3.1/TGFB1,探讨TGFB1抑制A549细胞增殖的可能机制.②方法 采用基因重组技术将TGFB1 CDS 插入真核表达载体pcDNA3.1 (+),构建TGFB1真核表达质粒.脂质体介导转染肺癌细胞A549,分为正常对照、空质粒及转染组.MTT和集落形成实验检测各组细胞活性和细胞增殖能力.Real-time- PCR及Western blot方法 检测各组中TGFB1、p53、Bax和Fas的mRNA和蛋白的表达水平.③结果 酶切和测序结果 证实TGFB1真核表达质粒构建成功.MTT和集落形成实验结果 显示pcDNA3.1/TGFB1转染组、细胞活性和细胞增殖能力明显降低(P<0.01).pcDNA3.1/TGFB1转染组与正常对照组、空质粒组比较:TGFB1、p53、Bax和Fas mRNA表达显著增加(P<0.01);TGFB1、p53、Bax和Fas蛋白的表达水平显著增加(P<0.01).④结论 TGFB1可能通过上调p53、Bax和Fas蛋白的表达抑制肺癌细胞A549的增殖.TGFB1有可能成为肿瘤生物治疗的靶点.     

冠状动脉旁路移植术后乳内动脉桥血管病变相关因素分析

目的筛选、分析导致冠状动脉旁路移植术（CABG）后的患者左乳内动脉桥血管闭塞的危险因素。方法选取2002年1月—2006年8月在中国人民解放军总医院心血管外科高长青主刀完成的CABG术后患者共228例。通过64-MSCTA的方法判断CABG术后左乳内动脉桥血管通畅情况,收集患者术前、术中信息和术后资料,对可能导致左乳内动脉桥血管病变的危险因素进行单因素分析后,将筛选后的结果通过Logistic多因素回归分析,找出危险因素。结果术前冠脉造影前降支狭窄百分比、术前冠脉造影弥漫性病变;术前血糖;术前甘油三酯;术中检查靶血管直径;LIMA桥血流;同期室壁瘤手术为单因素危险因素,Logistic多因素回归分析,显示LIMA桥病变的危险因素是靶血管的狭窄程度和LIMA桥血流量。结论 LIMA桥通畅率和靶血管狭窄程度、桥血流相关。     

赖氨大黄酸和紫杉醇对肺癌细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用

目的:研究赖氨大黄酸（RHL）、紫杉醇单独和两者联合对人肺癌H460细胞增殖和凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:选取处于对数生长期肺癌细胞株H460,随机分为对照组(不加药物)、紫杉醇组(1 μmol•L^-1紫杉醇)、RHL组(100 μmol•L^-1 RHL)和紫杉醇联合RHL组,并设空白组。采用MTT法和流式细胞术分别检测各组处理后48 h的细胞增殖率和凋亡率;采用Western blotting 方法检测凋亡相关蛋白和MEK/ERK蛋白的表达水平。结果:细胞培养48 h后,联合用药组细胞增殖率显著低于对照组、紫杉醇组和RHL组 (P<0.05),联合用药组细胞凋亡率显著高于对照组、紫杉醇组和RHL组(P<0.05),联合用药组caspase-3和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的切割片段蛋白表达强度明显高于对照组、紫杉醇组和RHL组,联合用药组Bcl-2和NF-κB蛋白表达强度明显低于对照组、紫杉醇组和RHL组,同时RHL组紫杉醇上调的MEK和ERK蛋白磷酸化强度降低。结论:紫杉醇和RHL均可抑制肺癌H460细胞增殖,诱导细胞凋亡;RHL通过降低ERK活性、上调caspase-3和PARP的切割片段蛋白表达,增强紫杉醇抑制肺癌细胞增殖和凋亡诱导作用。     

EB病毒感染对人胃上皮细胞GES-1增殖的影响

目的:探讨EB病毒感染人胃上皮细胞GES-1后对GES-1增殖的影响。方法:用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,同时以正常人胃上皮细胞GES-1为对照。经G418筛选出EBV感染阳性克隆,进行细胞形态学检测,并采用免疫组织化学染色法测定EBNA1的表达以鉴定EBV感染细胞克隆。对上述细胞用细胞计数法及MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术对细胞周期进行分析。结果:感染EBV的GES-1细胞大部分为EBNA1表达阳性,通过G418筛选,获得了稳定的EBV感染细胞克隆。EBV感染组细胞体积变大,核浆比增加。细胞计数法及MTT法绘制细胞生长曲线显示细胞增殖速度明显加快。流式细胞分析结果显示EBV感染组细胞S期延长。结论:EBV感染后使GES-1细胞稳定且高表达EBNA1,并且能够促进GES-1细胞的增殖。     

唐山市孕妇TORCH感染状况的初步调查

本文检测了唐山市 5 48例妊娠期妇女的弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒的特异性IgM抗体 ,阳性率分别为 0 .5 3、0 .1 8、1 .41和 0 .35 %。 3例弓形虫、1例风疹及8例巨细胞病毒阳性均处于夏季 ,2例单纯疱疹病毒阳性处于秋季。本文结果提示唐山市孕妇TORCH感染状况不容忽视 ,并可能呈现一定的季节性