miR-381靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的: 探讨微小RNA-381(miR-381)对前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并研究miR-381的靶基因及其功能。方法: 采用qRT-PCR检测miR-381在人前列腺癌细胞系中的表达水平。采用基因转染方法过表达或敲减miR-381在前列腺癌细胞中的表达,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕损伤实验、Transwell迁移实验和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用生物信息学方法预测miR-381靶点,并采用荧光素酶报告基因分析进行验证。结果： miR-381在前列腺癌细胞中低表达。与空白对照组相比,miR-381 mimics组前列腺癌细胞增殖能力明显降低,克隆数显著减少,凋亡明显增加,迁移和侵袭的细胞数减少;miR-381 inhibitor组结果则相反。荧光素酶报告基因分析证实MAP3K2是miR-381中的靶基因。miR-381 mimics下调而miR-381 inhibitor上调前列腺癌细胞中MAP3K2 基因和蛋白表达。 结论： miR-381通过靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,发挥抑癌基因作用。     

阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

目的 探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用.方法 采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSAE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量 PCR验证结果 可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用.将靶基因APP mRNA的野生及突变3'UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点.结果 根据microRNA芯片结果 筛选出在3、6月龄APPSWE/PSI AE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量 PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高.通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的把基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5 Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少.将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3'UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3' UTR的结合位点.结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3'UTR区城.     

miR-202通过降低肝癌细胞ROCK1表达抑制其迁移和侵袭

目的：研究微小RNA-202（miR-202）对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：通过实时定量PCR检测Hep3B、Huh7及HCCLM3人肝癌细胞和LO2人正常肝细胞中miR-202的表达水平。以miR-202表达水平最低的HCCLM3细胞为转染对象,转染miR-202模拟物或空白对照miRNA,以miR-202表达水平最高的Hep3B细胞为转染对象,转染miR-202抑制物或阴性对照miRNA,并利用实时定量PCR验证转染效率。采用Transwell迁移和侵袭实验检测过表达和敲低miR-202对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学网站检索并应用荧光素酶报告基因实验验证miR-202的靶基因。实时定量PCR和Western blot检测miR-202靶基因的表达水平。结果：与正常肝细胞LO2相比,miR-202在肝癌细胞的表达水平显著降低;HCCLM3细胞转染miR-202模拟物后,细胞miR-202的表达水平显著增加;过表达miR-202后,HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力显著降低;Hep3B细胞转染miR-202抑制物后,细胞miR-202的表达水平显著降低;敲低miR-202后,Hep3B细胞的迁移和侵袭能力显著增强;生物信息学检索及荧光素酶报告基因证明ROCK1基因为miR-202的靶基因。过表达miR-202可明显降低肝癌细胞中ROCK1基因的表达,而敲低miR-202可明显增加肝癌细胞中ROCK1基因的表达。结论：miR-202在肝癌细胞中低表达,miR-202通过抑制ROCK1的表达抑制肝癌细胞的迁移和侵袭。     

lncRNA CASC9通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性候选基因9(CASC9)通过调控miR-424-5p/SOX9分子轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法采用RT-qPCR检测CASC9在食管鳞状细胞癌组织、配对癌旁组织、食管鳞状细胞癌细胞系(KYSE450、KYSE150、EC190、EC9706)及正常人食管鳞状上皮细胞株(Het-1A)中的表达;敲降CASC9在KYSE450细胞中的表达水平,检测下调CASC9对细胞增殖、侵袭及其细胞周期的影响;采用Western blotting法检测SOX9蛋白及周期蛋白2(CCND1、CCNA、CDK4、CDK6)的表达;通过CCK-8和Transwell方法检测KYSE450细胞的增殖和侵袭能力,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-424-5p与CASC9或SOX9的靶向关系。结果食管鳞状细胞癌组织与细胞系高表达CASC9(P<0.01),敲降CASC9可抑制KYSE450细胞增殖和侵袭能力、并阻滞细胞周期G1/S期(P<0.01)。双荧光素酶报告基因法证实,CASC9靶向miR-424-5p、并下调其表达,SOX9是miR-424-5p的靶基因;敲降CASC9可上调miR-424-5p、并抑制SOX9的表达(均P<0.01)。结论 lncRNA CASC9可通过下调miR-424-5p,并促进SOX9表达而刺激KYSE450细胞的增殖、侵袭。     

miR-34c抑制人子宫内膜癌的机制分析

目的 MicroRNAs (miRNAs)是内源性表达长度约为22个核苷酸的小RNA分子,通过结合到靶mRNA上而抑制基因的表达。近年的研究表明某些miRNAs可以调节肿瘤细胞的增殖与迁移,然而miRNA在子宫内膜癌中的作用有待于进一步探索。本研究旨在探讨miR-34c在人子宫内膜癌中的表达规律、功能和分子机制。 方法 通过荧光定量PCR技术检测20例人子宫内膜癌组织标本中miR-34c的表达。通过阳离子脂质体介导的方法将miR-34c转染入人子宫内膜癌细胞RL95-2中,应用MTS法检测子宫内膜癌细胞的增殖,克隆形成实验检测子宫内膜癌细胞的生长,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测子宫内膜癌细胞的迁移。生物信息学和荧光素酶报告基因实验确认miR-34c作用的靶基因。RNAi技术下调c-Met的表达。通过蛋白印迹检测miR-34c对c-Met蛋白以及细胞内重要信号通路与细胞周期相关蛋白的影响。 结果 miR-34c在子宫内膜癌中表达明显降低。miR-34c能使子宫内膜癌细胞RL95-2细胞周期滞留在G₁期,显著抑制细胞的增殖。细胞移形实验发现miR-34c能够显著抑制RL95-2细胞迁移。生物信息分析表明c-Met是miR-34c作用的靶基因,进一步通过荧光素酶报告基因实验得以证实。蛋白印迹分析发现miR-34c能下调RL95-2细胞中的c-Met蛋白、p-Akt蛋白以及p-ERK1/2蛋白表达情况,同时还能够下调CDK4、CDK6蛋白以及p-Rb蛋白的表达水平。RNAi技术下调c-Met的表达能够明显抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移。 结论 本研究结果证明miR-34c通过作用于靶基因c-Met而抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移,说明miR-34c是子宫内膜癌中的重要抑癌基因。      

miR-21在大肠癌中的表达及其靶基因探讨

目的:探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-21在大肠癌(colorectal cancer,CRC)组织和细胞中的表达,抑制miRNA-21(miR-21)表达对PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路中各蛋白的影响及miR-21可能调控的靶基因?方法:运用实时荧光定量PCR和免疫组化分别测定CRC组织中的miR-21和PTEN水平?通过反义寡核苷酸技术抑制大肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证?通过蛋白质免疫印迹法检测HCT116细胞中PTEN?PI3K?Akt?MMP-9?mTOR表达的改变?利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因实验检测PTEN活性?结果:miR-21在CRC组织中增高(P < 0.05),PTEN在CRC组织中表达减低(P < 0.05)?而且 miR-21与PTEN的表达之间呈负相关(r = -0.396,P < 0.05)?miR-21在HCT116中表达最高,在SW480中表达最低?miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,并且PTEN蛋白的表达明显上调(P < 0.05),PI3K?Akt?MMP-9?mTOR表达下调(P < 0.05)?筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一?结论:PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控CRC过程?miR-21在大肠癌中表达增高,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移?     

MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。     

miR-30-5p在食管癌中的表达及对食管癌细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨miR-30-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法：选取开封市中心医院心胸血管外科和河南省人民医院胸外科2014年6月到2019年6月收集的食管癌和癌旁组织样本各120例,采用荧光定量PCR测定miR-30-5p mRNA表达水平。采用慢病毒建立食管癌细胞系EC109中建立miR-30-5p过表达稳定细胞系（miR-30-5p组）和对照细胞系（miR-control组）。采用EdU染色分析2组细胞的增殖情况;采用Transwell分析2组细胞的迁移情况;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-30-5p的靶基因;在miR-30-5p组和miR-control组过表达靶基因对细胞增殖和迁移的影响。结果：与癌旁组织比较,食管癌组织中miR-30-5p mRNA表达水平明显上调,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-control组比较,miR-30-5p组细胞增殖能力和细胞迁移能力明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示BCL-9是miR-30-5p的靶基因。在miR-control组细胞中过表达BCL-9,可显著提高细胞的增殖和迁移,差异有统计学意义（P<0.05）。而miR-30-5p组细胞过表达BCL-9,细胞增殖和迁移差异无统计学意义（P<0.05）。结论：miR-30-5p在食管癌中呈低表达,可导致靶基因BCL-9表达上调,进而促进食管癌细胞的增殖和迁移。     

MTH2和MTH3蛋白在快速老化模型鼠SAMP8胸腺中增龄性表达的比较研究

目的 检测抗核酸氧化酶蛋白MTH2和MTH3在快速老化小鼠SAMP8胸腺中的表达,探讨其与SAMP8增龄性变化的相关性.方法 选用1、4、8、12月龄的SAMP8小鼠及同龄的抗快速老化小鼠R1(SAMR1)作为实验对象.采用免疫印迹法检测胸腺中MTH2和MTH3蛋白的表达.结果 免疫印迹结果显示,在SAM鼠胸腺中MTH3蛋白的表达量均显著高于MTH2.定量结果显示,1、4、8、12月龄的SAMP8胸腺中MTH3表达的灰度值(grey level)分别为0.546、0.322、0.207、0.164,显著低于同龄SAMR1(P＜0.05),而MTH2在SAMP8和SAMR1胸腺中的表达却没有显著性差异(P＞0.05).与同组1月龄小鼠相比,MTH3在4、8、12月龄的SAMP8鼠胸腺中的表达量分别下降41％、62％、70％;在SAMR1鼠中分别下降19％、43％、67％,差异有统计学意义(P＜0.05).而MTH2在SAMP8和SAMR1胸腺中的表达也存在相同的增龄性下降的变化趋势(P＜0.05).结论 MTH2和MTH3蛋白在SAMP8和SAMR1小鼠胸腺中的表达量均呈增龄性下降,提示MTH2和MTH3蛋白表达量的减少在SAM鼠胸腺的衰老过程中具有重要意义,其中MTH3蛋白表达量的减少可能与SAMP8小鼠胸腺的快速衰老密切相关.     

miR-181a调控结肠癌细胞生长的作用和机制研究

目的 确定miR-181a对结肠癌细胞生长的作用以及探讨其机制。方法 常规培养结肠癌细胞系TCHu102,利用脂质体转染miR-181a抑制剂/模拟物的方法干预细胞内源性miR-181a的水平。MTT法测定结肠癌细胞的生长活力。生物信息学预测的方法筛选miR-181a的可能靶基因,双荧光素酶报告基因确定miR-181a与靶基因的作用关系。实时定量PCR的方法确定基因表达水平,western blot的方法检测蛋白表达水平。结果 敲低结肠癌细胞TCHu102中miR-181a的水平明显抑制细胞生长活力,为对照组的28.9% (P<0.01)。生物信息学预测发现PRKCD基因可能是miR-181a的靶基因,同时miR-181a能显著抑制含有PRKCD基因3’UTR的荧光素酶活性,在结肠癌细胞中过表达miR-181a后PRKCD的蛋白水平明显降低。结论 miR-181a通过抑制PRKCD的表达调控结肠癌细胞的生长。     

miR-200c-3p靶向CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞增殖

目的 预测和验证miR-200c-3p的靶基因并探讨其对肾母细胞瘤增殖的抑制作用。方法 应用生物信息学软件对miR-200c-3p在肾母细胞瘤中的靶基因进行预测,建立SK-NEP-1及G401的miR-200c-3p过表达及抑制表达的稳定细胞系。实验设未转染组（Blank）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、miR-200c-3p模拟物组（miR-200c-3p mimic）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及miR-200c-3p抑制剂组（miR-200c-3p inhibitor）。采用 RT-PCR及Western blot方法检测CCNE2在SK-NEP-1及G401不同组中的表达水平,荧光素酶报告基因检测miR-200c-3p 和CCNE2的靶向关系,细胞计数盒（CCK-8）和软琼脂克隆形成实验检测miR-200c-3p对SK-NEP-1及G401细胞增殖的抑制作用。结果 生物信息学方法预测CCNE2为miR-200c-3p的靶基因之一。RT-PCR实验结果示肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;荧光素酶报告基因检测证实CCNE2是miR-200c-3p的靶基因（P<0.01）。Western blot示在肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2蛋白的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;CCK-8和软琼脂克隆形成实验证实miR-200c-3p对肾母细胞瘤细胞的增殖能力有明显抑制作用（P<0.01）;而miR-200c-3p抑制剂组结果相反。结论 miR-200c-3p通过靶基因 CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。     

miR-140在内耳毛细胞中的表达及其对突触蛋白Dynamin-1的调控作用

目的 研究miR-140在正常小鼠内耳毛细胞的表达分布及其对编码突触蛋白Dynamin-1的Dnm1基因的靶向调控作用.方法 取正常成年C57BL/6小鼠耳蜗基底膜,免疫荧光染色和原位杂交法观察Dynamin-1与miR-140的表达定位情况.构建荧光素酶报告基因载体转染293T细胞,通过荧光素酶活性变化明确Dnm1是否是miR-140的靶基因.携带miR-140前体及空载的腺相关病毒(adenoassociatedvirus,AAV) 通过圆窗膜注射传递到耳蜗中, 14 d后RT-PCR检测miR-140及Dnm1的mRNA表达水平,Western blot检测Dynamin-1蛋白的表达水平.结果 miR-140表达于内外毛细胞细胞质,Dynamin-1主要表达于内毛细胞细胞质;荧光素酶活性检测结果 显示,miR-140抑制Dnm1的3'UTR荧光素酶报告基因活性(P＜ 0.05) .RT-PCR及Western blot检测结果 显示: 转染AAV-miR-140后miR-140的相对表达量明显升高,Dnm1的mRNA及其蛋白表达水平显著降低(P＜ 0.05) .结论 Dnm1是miR-140的靶基因,且miR-140可以抑制内耳毛细胞中Dynamin-1的表达,表明miR-140可能通过抑制Dynamin-1蛋白负向调控内毛细胞突触囊泡内吞过程,进而影响听觉信号的传递.     

miR-9在宫颈癌组织中的表达及其靶基因的预测和生物信息学分析

目的：探讨宫颈癌组织中miR-9表达,并对靶基因进行预测及生物信息学分析,为深入研究miR-9的调控机制及生物学功能提供理论依据。方法应用miRNAs芯片检测宫颈癌组织及正常宫颈组织中miRNAs表达,利用生物学软件对其中上调较明显的miR-9进行靶基因预测,同时利用基因芯片技术筛选转染miR-9后宫颈癌Hela细胞中差异表达的基因,将两者预测靶基因的交集作为miR-9的靶基因进行GO富集分析和生物通路富集分析。结果与正常宫颈组织比较,宫颈癌组织中有15个miRNAs表达为上调,10个miRNAs表达为下调,其中上调较明显的是miR-21和miR-9,下调较明显的是miR-376a和miR-218。芯片所示的miR-9调控的下调基因与软件预测的靶基因交集中共有148个基因,miR-9的预测靶基因富集在细胞内的生物学调控、合成和代谢等生物学过程以及转录调控和蛋白结合等分子功能上,其信号通路富集于调节肌动蛋白细胞骨架、脂质代谢和细胞黏附通路。结论 miR-9在宫颈癌组织中高表达,miR-9预测的靶基因富集于多个生物学功能和生物学过程及与肿瘤相关的信号通路。     

miR-19a对溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨miR-19a对溃疡性结肠炎的作用机制。方法通过生物信息学分析预测miR-19a可能的靶基因,通过免疫组化及Western blotting技术检测靶基因在溃疡性结肠炎小鼠中表达的变化,并进一步通过绿色荧光蛋白报告载体实验对靶基因进行鉴定。结果生物信息学分析预测miR-19a可能的靶基因是TNF-α,免疫组化及Western blotting显示溃疡性结肠炎小鼠肠道组织TNF-α表达增加,miR-19a可抑制TNF-α-3’UTR-WT报告基因活性,而变异型TNF-α-3’UTR-mut报告基因活性不能被抑制。结论 miR-19a的靶基因为TNF-α,其结合位点为TNF-α3’UTR,miR-19a可能在肠道通过直接调控TNF-α而发挥作用。     

miR-593通过调控PLK1基因的表达抑制结肠癌细胞的增殖

目的探讨miR-593在结肠癌细胞增殖中的作用及分子机制。方法利用生物信息学分析筛选miR-593可能结合的靶基 因为PLK1;利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-593 和PLK1 基因的结合;通过qRT-PCR、Western blotting 验证PLK1 为 miR-593直接作用的靶基因;通过CCK-8实验证明miR-593通过调控PLK1基因的表达抑制结肠癌细胞的增殖。结果运用三 种生物信息学软件对PLK1可能结合的miRNA进行了预测与分析,发现miR-593可能结合PLK1基因;双荧光素酶报告基因实 验证明miR-593 与PLK1 基因发生了结合;Western blotting 结果表明,PLK1 在miR-593 mimic 转染组表达量显著下降,而在 miR-593 inhibitor 组明显升高,相对于对照组均具有统计学差异（P<0.05）;qRT-PCR结果表明,PLK1 RNA水平在各组中表 达水平差异无统计学意义（P>0.05）;细胞增殖实验表明,miR-593与PLK1对结肠癌细胞增殖的影响为相反关系,且共转染miR-593 mimic与PLK1过表达质粒组对细胞增殖的影响介于单独转染miR-593 mimic组与PLK1过表达质粒组之间。结论miR-593通 过调控PLK1基因的表达抑制了结肠癌细胞的增殖,并发挥抑癌miRNA的作用。     

miR-372调控血管生成因子AGGF1的表达并抑制血管生成

目的:研究miR-372(miR-372)对新血管生成因子AGGF1基因的表达调控?方法:通过生物信息学预测找到可能靶向调控AGGF1基因的候选miRNA;通过荧光素酶报告基因实验?荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测等实验证实miR-372对AGGF1基因表达的靶向调控;通过体外血管内皮细胞成管实验检测miR-372对血管生成的影响?结果:生物信息学预测显示miR-372靶向AGGF1;荧光素酶报告基因实验证实miR-372可通过结合AGGF1基因3′-非翻译区(3′-untranslational region,3′-UTR)而抑制其表达;qPCR和Western blot实验分别表明miR-372在mRNA水平和蛋白水平下调AGGF1表达;体外血管生成实验表明miR-372所介导的AGGF1表达下调可明显抑制血管生成?结论:miR-372可通过靶向结合AGGF1基因的3′-UTR下调其表达,并抑制内皮细胞血管生成能力?     

miR-1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬的影响

目的 探讨miR-1对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法H9c2细胞随机分为4组。正常组使用普通培养基培养,未转染;诱导组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,未转染;miR-1 NC组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 NC;miR-1 inhibitor组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 inhibitor。在加入葡萄糖诱导前48 h,使用Lipofectamine 3000转染试剂盒进行转染。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测H9c2细胞和高糖诱导的H9c2细胞中miR-1表达水平;CCK-8法检测各组H9c2细胞增殖活性;蛋白免疫印记法（Western blot）检测各组H9c2细胞中Beclin1、p65、PI3K蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及AKT、mTOR蛋白磷酸化水平;生物信息学预测和双萤光素酶验证miR-1和PI3K的靶向关系。结果与正常组相比,诱导组的H9c2细胞中,miR-1表达水平显著升高（P<0.05）,PI3K蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与正常组相比,诱导组H9c2细胞Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,自噬小体增多,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05）;与诱导组和miR-1 NC组相比,miR-1 inhibitor组H9c2细胞miR-1水平、Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低,自噬小体减少,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）;miR-1和PI3K间存在靶向关系。结论在高糖诱导的H9c2细胞中,miR-1表达水平升高,抑制miR-1,可通过靶向激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬。     

耳蜗毛细胞miR-30b对Dynamin基因靶向调控的研究

目的 观察正常成年小鼠耳蜗毛细胞中miR-30b的表达,研究其对靶基因（Dynamin1,DNM1）的调控是否会影响内毛细胞中突触囊泡内吞关键蛋白Dynamin的表达。方法 取正常成年C57小鼠耳蜗基底膜行原位杂交,观察耳蜗毛细胞中miR-30b的表达分布;构建荧光素酶报告基因载体,转染293T 细胞,通过荧光素酶活性变化明确DNM1是否为miR-30b的靶基因;通过耳蜗圆窗显微注射过表达miR-30b的腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）,14 d后通过real time-PCR检测miR-30b和DNM1的mRNA表达,免疫印迹实验（Western blot）检测Dynamin蛋白表达。结果 miR-30b在小鼠耳蜗内、外毛细胞胞质和胞核均有表达;miR-30b可抑制DNM1载体的荧光表达（PDNM1载体的荧光表达无抑制作用;转染AAV-miR-30b后miR-30b的相对表达量增高,DNM1和Dynamin蛋白表达降低。结论 miR-30b在小鼠耳蜗内、外毛细胞均有表达;miR-30可以靶向下调DNM1基因从而抑制Dynamin蛋白表达。     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

miR-141-3p靶向MYT1L促进结肠癌细胞的恶性进展

目的：探究微小RNA-141-3p(miR-141-3p)通过靶向作用髓磷脂转录因子1(MYT1L)蛋白对结肠癌细胞迁移、增殖、凋亡的影响。方法：在结肠癌HCT8细胞中转染miR-141-3p模拟物(miR-141-3p mimic),qRT-PCR检测miR-141-3p的mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测侵袭和迁移,Western blot检测MYT1L的蛋白表达水平。生物信息学软件预测MYT1L可能是miR-141-3p的靶基因后用荧光素酶报告基因鉴定。结果：miR-141-3p在结肠癌组织细胞中显著上调且对患者预后有显著影响,在转染了miR-141-3p的HCT8细胞中,细胞的增殖、迁移能力均显著提高,而细胞凋亡显著下降。双荧光素酶报告基因的结果显示miR-141-3p与MYT1L基因可以靶向结合。共转染MYT1L过表达载体和miR-141-3p mimic的细胞中,相对于只转染了MYT1L过表达载体的细胞来说,细胞表型恶化程度显著升高。结论：miR-141-3p通过靶向调控MYT1L的表达促进结肠癌细胞表型的恶化。