乙型肝炎病毒X蛋白上调白细胞介素-18基因的表达

目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)与白细胞介素-18(IL-18)基因表达的关系,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用.方法:聚合酶链反应(PCR)扩增人IL-18基因启动子DNA,命名为IL-18P.以T-A克隆法,将IL-18P基因片段连入载体pGEM-T.将获得的质粒pGEM-T-IL-18P,与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnⅠ和BglⅡ双酶切后构建IL-18启动子报告基因表达载体pCAT3-IL-18P,以重组表达质粒pCAT3-IL-18P和HBxAg表达载体pcDNA-HBxAg瞬时转染HepG2细胞,以转染pCAT3 basic的HepG2细胞为阴性对照,48小时后收获细胞.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以了解乙型肝炎病毒X蛋白对IL-18基因表达的影响.结果:构建的报告基因表达载体pCAT3-IL-18P经过序列分析和酶切鉴定正确.真核表达载体pcDNA3.1(阴性)-X和pCAT3-IL-18P共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3空载体的6.2倍,是pCAT3-IL-18P的1.17倍.结论:乙型肝炎病毒X蛋白可上调IL-18启动子的转录活性,促进IL-18基因表达.     

急性胰腺炎高凝状态的研究

胰腺组织对血流量的变化极为敏感，大量的实验研究已经证实胰腺组织血液循环障碍可诱发急性胰腺炎（ＡＰ），并能促使水肿型胰腺炎（ＡＥＰ）发展成出血坏死型胰腺炎（ＡＨＮＰ）［１］。其中血小板的活化参与了这一病理过程。为了解血小板的功能状态与ＡＰ发生、发展及其...     

原发性肝细胞癌组织Smad4、p21蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌组织Smad4和p21蛋白表达及其相关性.方法 采用免疫组化法检测60例原发性肝细胞癌组织及20例癌旁组织中Smad4、p21蛋白的表达,同时结合临床资料进行分析.结果 癌及癌旁组织中Smad4蛋白阳性表达率分别为36.7%、80.0%,p21蛋白阳性表达率分别为41.7%、70.0%,两种组织Smad4和p21蛋白表达差异均有统计学意义(P＜0.01,＜0.05).癌组织中Smad4蛋白表达与组织分级、肿瘤转移有关(P＜0.05).Smad4与p21蛋白的表达呈正相关(r=0.69,P＜0,01).结论 Smad4及p21蛋白在原发性肝细胞癌组织中表达均显著下降,并与肝癌生物学行为关系密切.     

靶向封闭CapG基因对胰腺癌细胞运动侵袭能力的影响

目的观察靶向封闭CapG基因对胰腺癌细胞株BxPC3运动侵袭能力的影响。方法设计并体外合成靶向CapG的小干扰RNA,将其转染到BxPC3细胞中,蛋白质印迹法检测转染前后细胞中CapG蛋白的表达,采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果CapGsiRNA能有效降低BxPC3细胞中CapG的表达,CapG在蛋白质水平的表达抑制率达80％左右。抑制BxPC3细胞中CapG的表达后,BxPC3细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜的细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论封闭CapG表达能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在体外的运动侵袭能力。     

原发性肝细胞癌组织中环氧化酶-2及E-钙黏蛋白的表达

目的：检测原发性肝细胞癌(HCC)组织中环氧化酶-2(COX-2)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。方法：采用免疫组化法检测64例HCC组织及12例正常肝组织中COX-2及E-cadherin的表达,并分析二者在HCC组织中的关联性及与临床病理特征的关系。结果：HCC组织中COX-2的表达高于正常肝组织(7...     

十七种哺乳动物二级抗体的制备和辣根过氧化物酶标记

目的制备兔抗17种哺乳动物的二级抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,为哺乳血清学检测系统的建立提供工具。方法利用饱和硫酸铵沉淀法粗纯抗体后,再利用protein A或protein G亲和层析的方法进一步纯化哺乳动物的IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗哺乳动物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗哺乳动物的二级抗体进行辣根过氧化物酶标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blot方法考察标记抗体的特异性。结果纯化了恒河猴、东北虎、布氏田鼠、黑线姬鼠、斑羚、原驼、果子狸、食蟹猴、梅花鹿、长爪沙鼠、马鹿、骆驼、大仓鼠、豚鹿、熊猴、大耳羊和雪貂等17种哺乳动物的血清IgG,分别免疫大耳白兔制备了这17种哺乳动物的兔抗血清,免疫双扩散法测定兔抗这17种哺乳动物的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗恒河猴IgG、兔抗东北虎IgG、兔抗布氏田鼠IgG、兔抗黑线姬鼠IgG、兔抗斑羚IgG、兔抗原驼IgG、兔抗果子狸IgG、兔抗食蟹猴IgG、兔抗梅花鹿IgG、兔抗长爪沙鼠IgG、兔抗马鹿IgG、兔抗骆驼IgG、兔抗大仓鼠IgG、兔抗豚鹿IgG、兔抗熊猴IgG、兔抗大耳羊IgG和兔抗雪貂IgG等17种哺乳动物的二级抗体进行了辣根过氧化物酶标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～60000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性。结论成功制备了HRP标记的兔抗17种哺乳动物的二级抗体,为哺乳动物血清学检测体系的建立提供了工具。     

埃博拉出血热及埃博拉病毒的研究进展

埃博拉病毒可以引起一种人畜共患烈性传染病,即埃博拉出血热,此病于1976年始发于埃博拉河流域,并且于该区域严重流行,故而得名。人类一旦感染埃博拉病毒,死亡率可高达88%,从而引起医学界的广泛关注,世界卫生组织已将埃博拉病毒列为对人类危害最为严重的病毒之一。深入地了解埃博拉出血热及埃博拉病毒,及其致病机理,对于埃博拉出血热的预防和控制具有非常重要的意义。     

APP695K595N/M596L突变转基因小鼠的建立和病理表型动态分析

目的建立APP695K595N/M596L(Swedish突变)转基因小鼠和评价痴呆表型的发生和发展过程。方法将APP695K595N/M596L突变基因插入到小鼠朊蛋白(mouse prion protein)启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695K595N/M596L突变转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因表型,Western blotting检测APP突变基因表达。Thioflavin-S染色检测不同年龄转基因小鼠大脑病理改变。Morris水迷宫动态观察小鼠行为学改变。结果建立了人APP695K595N/M596L转基因小鼠,Thioflavin-S染色显示转基因小鼠9月龄时在脑海马区可检测到老年斑形成,并且在11、12月龄时明显增多。Morris水迷宫结果发现与同月龄野生型小鼠相比,该转基因小鼠5月龄开始出现学习记忆能力缺陷,7、9、11月行为学结果证实转基因小鼠的学习记忆能力缺陷随年龄增加而日趋严重(P<0.05)。结论建立了人APP695K595N/M596L转基因小鼠,并能再现人类阿尔茨海默症的行为学及神经病理学特征,为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。     

转化生长因子β1和基质金属蛋白酶抑制因子-1在肝纤维化诊断中的作用及关系

目的通过检测慢性乙型肝炎患者血清TGFβ1和TIMP-1在肝纤维化不同阶段的表达情况,探讨TGFβ1和TIMP-1在肝纤维化诊断中的作用及相互关系。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测40例慢性乙型肝炎患者和12名健康体检者血清TGFβ1、TIMP-1水平,RIA检测血清HA,LN、Ⅲ型前胶原氨基端肽（P．ⅢNP）水平,40例患者全部进行肝活组织检查,分析TGFβ1、TIMP-1与肝组织纤维化程度分期和炎症活动度分级的关系以及五项指标之间的相关性。结果血清TGFβ1、TIMP1在肝纤维化早期即明显升高,敏感性优于HA、LN、PⅢNP;且随肝纤维化程度的加重TGFβ1、TIMP-1逐渐升高（P＜0．05）;TGFβ1变化趋势与TIMP-1、HA、LN、PⅢNP均呈正相关（P＜0．01）,与TIMP-1相关性最强。结论TGFβ1、TIMP-1密切参与肝纤维化的形成过程,TIMP-1可能受TGFβ1调节,二者可作为早期肝纤维化的诊断指标。