铜绿假单胞菌制剂抑制鼻咽癌细胞体外增殖

摘要：目的观察铜绿假单胞菌（PA-MSHA）注射液对人鼻咽癌细胞株5-8F及6-10B的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方
法MTT法检测鼻咽癌细胞体外增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Westem blotting 检测细胞周期及凋亡相关蛋白。结果
MTT结果表明,与未加药组相比,加药组5-8F及6-10B细胞的增殖能力明显降低（P<0.05）,呈剂量和时间依赖性。细胞周期检
测发现药物处理后的肿瘤细胞发生G1/S 期阻滞（P<0.05）。Westerm blotting 检测发现药物处理后的两组细胞周期相关蛋白
cyclinD1、CDK4、CDK6及凋亡促进蛋白Bax表达上调,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调。结论PA-MSHA能够抑制鼻咽癌5-8F
及6-10B细胞株增殖,其机制可能是通过影响细胞周期调节并促进细胞凋亡。
     

长非编码MALAT1基因在人鼻咽癌细胞株的表达及生物学意义

目的探讨MALAT1在鼻咽癌细胞细胞株中的表达及生物学功能。方法通过Real-time PCR检测MALAT1基因在鼻炎
癌细胞株5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HONE-1、6-10B及永生化鼻咽上皮细胞NP69株中的表达;采用RNAi技术和RNA激活
技术,构建MALAT1慢病毒干扰载体和激活载体载体并稳定转染鼻咽癌细胞株CNE-1,采用CCK8、平板克隆、划痕等试验分析
MALAT1基因对CNE-1细胞生物学行为的影响。结果MALAT1在高转移的鼻咽癌细胞株中高表达,在正常鼻咽上皮细胞低
表达;经激活过表达MALAT1 后,CNE-1 细胞的上皮性标志物E-Cadherin 的表达显著下调,间质细胞标志物Vimentin 表达上
调,侵袭转移能力明显增强（P<0.05）。结论MALAT1基因上调能够促进鼻咽癌CNE-1细胞的增殖、侵袭和转移能力。
     

低氘水可选择性抑制鼻咽癌细胞增殖

目的比较不同氘体积浓度对多种鼻咽癌细胞株及正常细胞增殖的作用,初步探讨低氘水抗肿瘤的可能机制。方法MTT
法、平皿克隆实验、transwell小室检测低氘水（DDW）对鼻咽癌细胞及正常细胞的增殖、侵袭转移能力;Western blot检测PCNA
蛋白表达差异,流式细胞仪分析细胞周期。结果随着培养基中氘含量下降,多种鼻咽癌细胞增殖显著被抑制（P<0.05）,克隆生
成和游走侵袭能力显著下降（P<0.01）,Western blot检测结果显示PCNA蛋白表达水平下调,流式细胞仪检测显示,低氘水能诱
导鼻咽癌细胞生长周期阻滞：S期减少,G1期细胞显著增加（P<0.05）。但DDW对正常细胞生长有促进作用。结论DDW具有选
择性抑制鼻咽癌细胞增殖的靶向生物效应,因此其可作为新型无毒副作用抗癌辅助治疗剂,在肿瘤治疗中具有重要应用前景。
     

Tal1促进急性T淋巴白血病Jurkat细胞的增殖

目的探讨Tal1对T-ALL细胞增殖及其机制的影响。方法用Tal1慢病毒感染T-ALL细胞株Jurkat,建立稳定的Tal1敲降
细胞株（Jurkat-siTal1）和Tal1 过表达细胞株（Jurkat-T1）,及siRNA 阴性对照细胞（Jurkat-mock1）和过表达阴性对照细胞
（Jurkat-mock2）。CCK-8检测细胞生长能力;流式细胞术检测细胞周期;Real-time RT-PCR和Western blot检测周期蛋白依赖性
激酶抑制因子2（CDKN2A）、周期蛋白依赖性激酶抑制因子1（CDKN2B）mRNA和蛋白表达。结果成功建立Jurkat稳定转染细
胞株。CCK8结果表明细胞Jurkat-T1与Jurkat-mock2相比,细胞生长更快,而Jurkat-siTal1与Jurkat-mock1相比,细胞生长明显
减缓。流式细胞术检测细胞周期发现,Jurkat-siTal1与Jurkat-mock1相比G0/G1期增加,S期减少;而Jurkat-T1与Jurkat-mock2相
比,G0/G1期减少,S期增加。Real-time RT-PCR和Western blot 结果显示Tal1 抑制Jurkat 细胞内CDKN2A、CDKN2B的mRNA
和蛋白表达。结论Tal1可以促进T淋巴白血病细胞Jurkat增殖;促进Jurkat细胞由G0/G1期向S期转换,其可能通过Tal1抑制
G0/G1和S期负调控蛋白CDKN2A、CDKN2B的表达。
     

miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控RND3 促进肝癌细胞增殖

目的检测MicroRNA-128a（miR-128a）在肝细胞癌中的表达情况并探讨其在肝癌细胞中的生物学功能及机制。方法收
集19例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-128a 在肝细胞癌和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达;应用
miR-128a mimics或inhibitor转染人肝癌细胞,MTT检测转染后细胞增殖活力变化;软件预测miR-128a的潜在靶点RND3,并用
双荧光素酶报告实验证实miR-128a与RND3 3’UTR结合,qRT-PCR和Western blot检测miR-128a潜在靶点RND3的表达变化;
Western blot检测细胞周期蛋白变化。结果在肝细胞癌组织中miR-128a的表达显著高于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-128a
促进肝癌细胞增殖（P<0.05）;在肝癌细胞中miR-128a通过与RND3 3’URT结合下调RND3 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）;抑
制miR-128a的表达可以导致cyclin B1、cyclin D1 和CDK4表达下调。结论miR-128a在肝细胞癌中表达上调并通过靶向调控
RND3促进肝癌细胞增殖。
     

HMGB1对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的影响

目的：观察HMGB1对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响并初步探讨其可能机制。方法：采用不同剂量(0,10,50,100 ng/mL)重组HMGB1(rHMGB1)刺激HepG2细胞24 h,用MTT法检测HepG2细胞增殖,Western印迹和RT PCR法检测cyclin D1,PCNA的表达。结果：不同剂量(10,50,100 ng/mL)rHMGB1组HepG2细胞增殖能力均明显高于对照组（P＜0.05）。HMGB1抗体（20 μg/mL）能中和HMGB1(10ng/mL)对HepG2细胞的促增殖作用（P＜0.05）。Western印迹和RT PCR显示,与对照组比较,HMGB1能明显促进HepG2细胞PCNA,cyclin Dl蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,HMGB1抗体能明显抑制HMGB1上调PCNA,cyclin Dl蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）。结论：HMGB1可能通过上调cyclin Dl和PCNA表达,促进HepG2细胞增殖。HMGB1抗体对肝细胞癌可能有治疗作用。     

祛风通络方对肾小球系膜细胞周期蛋白表达的影响

目的通过不同检测方法观察祛风通络方对肾小球系膜细胞周期调节蛋白表达的影响,进一步探讨祛风通络方抑制肾小
球系膜细胞增殖的作用机制。方法以体外培养肾小球系膜细胞为研究对象,应用血清药理学方法,分别采用激光扫描共聚焦显
微镜及免疫组化法检测各组大鼠肾小球系膜细胞周期蛋白的表达变化。结果与正常组比较,LPS组肾小球系膜细胞周期蛋白
CyclinD1、CDK2、P21表达明显增强（P<0.01）,P27蛋白表达明显减弱（P<0.01）;经过药物干预治疗,肾小球系膜细胞周期蛋白
Cyclin D1、CDK2、P21的表达均有不同程度减弱（P<0.05或P<0.01）,而P27蛋白表达明显增强（P<0.01）,且祛风通络方对
Cyclin D1、P21和P27蛋白表达的调节明显优于贝那普利（P<0.05或P<0.01）。结论祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖的作
用机制可能与其下调细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK2、P21和上调P27蛋白的表达有密切关系。
     

补肾活血方对大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原表达的影响

摘要：目的探讨补肾活血方对大鼠成纤维细胞增殖及胶原表达的影响,为其抗心肌纤维化提供实验依据。方法通过血清药理
学方法制备补肾活血方含药血清,与DMEM配成细胞培养液。提取大鼠心脏成纤维细胞（CFs）并传代培养,将3~4代CFs分为
4组：A组为10%含药血清培养液培养,B组为20%含药血清培养液培养,C组为不含药血清培养液培养,D组为对照组,为常规胎
牛血清培养液培养。培养72 h后CCK-8检测CFs增殖,RT-PCR检测胶原基因表达,Western blotting检测胶原蛋白表达。结果
与C组、D组相比,A组、B组CFs增殖明显降低,B组较A组进一步降低（P<0.05）;Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA在A、B两组表达较C、
D两组明显下调（P<0.05）,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达在A、B两组明显低于C、D两组（P<0.05）。结论补肾活血方可以抑制大鼠
成纤维细胞增殖及胶原表达。
     

三七总皂苷对K562细胞增殖、凋亡及周期的影响及机制

目的研究三七总皂苷（PNS）对K562 细胞增殖、凋亡、周期的影响及其相关分子机制。方法采用MTT法检测PNS对
K562细胞增殖的影响;AO/EB双荧光染色法及Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞凋亡及死亡状况;流式细胞术检测K562
细胞的周期变化;RT-PCR检测mTOR信号通路主要分子mRNA的表达变化;Western blot 检测cleaved caspase-3 蛋白、cyclin
D1蛋白及mTOR信号通路主要蛋白及磷酸化蛋白的表达量变化。结果100~800 μg/mL的PNS 作用于K562细胞后能够抑制
细胞增殖。PNS能够上调cleaved caspase-3蛋白表达,促使K562细胞发生凋亡。并且下调cyclin D1蛋白表达,促使K562细胞
阻滞在G0/G1期。同时,PNS 能够抑制K562 细胞mTOR mRNA 表达,降低mTOR 蛋白和磷酸化蛋白p-mTOR（Ser2448）、
p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）的表达,从而抑制mTOR信号通路活性。结论PNS 对体外培养K562细胞有抑
制增殖,促进凋亡,使其发生周期阻滞的作用。其机制可能与PNS抑制mTOR信号通路活性、上调cleaved caspase-3蛋白表达
及抑制cyclin D1蛋白表达有关。
     

shRNAmir慢病毒载体沉默环氧合酶-2对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响

摘要：目的探讨COX-2基因沉默对鼻咽癌C666-1细胞放射敏感性的影响。方法以稳定沉默COX-2基因表达的鼻咽癌
Anti-COX-2 C666-1细胞和对照细胞Anti-GL-2 C666-1为研究对象,采用克隆形成实验及曲线拟合计算不同剂量辐射后
各放射生物学参数和放射增敏比;采用流式细胞仪检测辐射后细胞周期的变化;采用体内荷瘤裸鼠动物模型检测放疗后
皮下移植瘤的生长曲线,并计算抑瘤率。结果Anti-COX-2 C666-1细胞SF2、D0、Dq值较对照组均明显偏低,α/β显著增
高,放射增敏比为1.4014;COX-2 沉默后降低了辐射诱导的G2/M 期阻滞,并增加辐射后荷瘤裸鼠的抑瘤率。结论
COX-2基因稳定沉默后可改变鼻咽癌C666-1的放射生物学参数,并降低辐射引起的G2/M期阻滞,增大抑瘤率,能够起到
放疗增敏的作用。
     

沉默Sam68对鼻咽癌5-8F细胞增殖的影响及其机制

目的探讨Sam68基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖能力的影响及可能的分子机制。方法通过靶向沉默鼻咽癌5-8F细胞内源
性Sam68基因,研究细胞增殖能力的变化情况,并采用qRT-PCR和Western blotting实验方法检测Sam68、细胞周期相关蛋白及
其上游分子的表达情况。结果转染Sam68靶向siRNA的5-8F细胞中,Sam68蛋白和mRNA表达水平均明显降低。MTT、细胞
周期实验证实干扰Sam68后5-8F细胞的增殖能力受到抑制;Western blotting检测结果显示细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达明
显下调,p27 表达上调,同时p-FOXO3a、p-Akt 和p-GSK-3β的表达明显下调,而总FOXO3a、Akt 和GSK-3β的表达则无明显变
化。结论Sam68可能通过激活Akt/FOXO3a信号通路对细胞增殖的相关分子进行调控,进而影响鼻咽癌细胞的增殖能力。
     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

RNA干扰IgG表达对人前列腺癌细胞株PC3放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰沉默IgG 表达对人前列腺癌PC3 细胞株放射敏感性的影响。方法将IgG FC 段受体RNA质粒
（FCGR1AshRNA）和阴性对照质粒（NCshRNA）转染人前列腺癌PC3细胞,Q-PCR和Western-blot检测IgG表达。以60Co γ射线
0、2、4、6、8、10 Gy分别照射空白对照组、NCshRNA组、FCGR1AshRNA组细胞;照射48 h后,MTS法检测细胞增殖状态;照射
12、24、48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率。重点探讨6Gy射线照射后不同时间的敏感性、增值率、抑制率与凋亡率。结果质
粒转染前列腺癌PC3细胞后,FCGR1AshRNA与NCshRNA组和空白对照组相比,IgG表达水平明显下降,细胞增殖受抑制（P<
0.05）。不同放射剂量下48 h后及6Gy射线照射后的不同时间段,FCGR1AshRNA组的增值率减低,凋亡率升高（P<0.05）。结
论RNA干扰抑制IgG表达能提高PC3细胞对放射线的敏感性,IgG基因可能是联合放疗治疗前列腺癌的理想靶点。
     

地塞米松对慢性哮喘小鼠肺组织中白细胞介素21、磷酸化信号转导及转录激活因子3的干预作用

目的研究慢性哮喘小鼠肺组织白细胞介素21（IL-21）、磷酸化信号转导及转录激活因子3（p-STAT3）表达变化,探讨地塞
米松对小鼠肺组织IL-21、p-STAT3表达的影响。方法SPF级BALB/C雌性小鼠33只,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗
组,每组11只。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘小鼠模型;肺泡灌洗液进行细胞计数和分类;HE染色观察气道炎症程度;
免疫组化法观察IL-21和p-STAT3在小鼠肺组织的表达;免疫蛋白印迹法分析小鼠肺组织中IL-21、p-STAT3蛋白的表达。结果
哮喘组肺泡灌洗液中的细胞总数和嗜酸性粒细胞计数较对照组和地塞米松组明显增加( P<0.01);哮喘组小鼠肺组织IL-21蛋
白、p-STAT3蛋白的表达高于对照组（P<0.05）,地塞米松组IL-21蛋白、p-STAT3蛋白的表达低于哮喘组（P<0.05）。结论地塞米
松抑制了慢性哮喘小鼠模型IL-21、p-STAT3的表达,IL-21/STAT3细胞信号通路可能为地塞米松治疗哮喘的作用机制之一。
     

封闭内源性miR-23a对人胃腺癌细胞系MGC803增殖及侵袭的影响

目的设计并合成miR-23a ASO (ASO-23a),封闭内源性miR-23a的功能后,检测人胃腺癌细胞系MGC803增殖及侵袭能
力的改变。方法首先设计并合成ASO-23a,经脂质体方法转染MGC803 细胞,实时定量PCR 检测转染细胞MGC803 中
miR-23a的表达水平;经MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL实验及transwell实验,观察细胞内源性
miR-23a功能被封闭后对MGC803细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果实时定量PCR结果表明ASO-23a能够有效封闭细
胞中内源性miR-23a;MTT、平板克隆形成及软琼脂克隆形成实验结果显示,封闭内源性miR-23a后可抑制MGC803细胞活性;
TUNEL实验结果显示,ASO-23a可以促进MGC803细胞凋亡的发生;Transwell实验结果显示,ASO-23a可以抑制MGC803细
胞的侵袭能力。结论设计并合成的ASO-23a在人胃腺癌细胞系MGC803中有效封闭内源性miR-23a,能够抑制细胞活性及侵
袭能力,并能促进细胞凋亡的发生。
     

沉默信息调节因子3对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化
肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影
响,EdU标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞
集落形成能力的影响;qRT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,EdU标记实
验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;
SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%（P<0.001）,使肝癌细胞DNA合成下
降了约57%（P<0.05）;过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约
51%~61%（P<0.01）,使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%（P<0.01）。结论SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。
     

Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性

目的探讨下调microRNA-221（miR-221）表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人
结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221（anti-miR-221）后,应用实时荧光定量PCR（Real-time Q-PCR）检测Caco2
细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经
照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显
下调（P<0.05）,同时PTEN蛋白表达增高（P<0.05）;流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组
死亡细胞比例均明显增多（P均<0.01）,转染anti-miR-221可明显提高Caco2细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部
分但不完全阻断。结论Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。
     

登革Ⅱ型病毒前膜蛋白基因反向重复序列具有干扰病毒复制的作用

目的构建含有登革Ⅱ型病毒（DENV-2）前膜蛋白（prM）基因反向重复序列（irRNA）的重组质粒,评价其抑制病毒复制的
效果。方法DENV-2接种乳鼠,提取总RNA,在正义和反义引物两端分别加上XhoⅠ和EcoRⅠ的识别位点,将经RT-PCR 扩增
的prM全长基因片段插入pcDNA3.1(+)中,形成含有prM反向序列的重组质粒pcDNA-asprM;于另一对正义和反义引物两端引
入酶切位点NheⅠ和BglⅡ,经RT-PCR 扩增prM 全长基因片段插入pMD18-T-vector 中,形成含有正向序列的重组质粒
pMD18-T-prM。限制性内切酶NheⅠ和KpnⅠ分别酶切重组质粒pMD18-T-prM和重组质粒pcDNA-asprM,得到片段prM和线
性化载体pcDNA-asprM,连接构建成含有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。筛选的阳性重组质粒pcDNA-irRNA
用脂质体法转染至BHK-21细胞中,半定量PCR和实时荧光定量PCR分析评估该质粒抑制登革病毒复制的效果。结果成功构
建具有prM反向重复序列的重组质粒pcDNA-irRNA。经转染pcDNA-irRNA的实验组与未转染质粒阳性对照组相比,半定量
PCR结果显示DENV-2攻击96 h后NS3的mRNA表达水平下降28%;实时定量PCR分析显示,DENV-2攻击72 h后实验组病毒
拷贝数比阳性对照组少1.44倍,攻击96 h后实验组的NS1表达量明显低于阳性对照组（P<0.05）。结论DENV-2 prM反向重复
序列具有干扰病毒复制的效果,为登革病毒基因疫苗的研究提供理论依据。