祛风通络方对肾小球系膜细胞间隙连接蛋白36及基因表达的影响

目的 研究间隙连接蛋白36(Cx36)及其基因在肾小球系膜细胞（MCs）的表达,观察祛风通络方的干预作用,从而进一步探讨祛风通络方抑制肾小球MCs增殖的作用机制。方法 应用血清药理学方法,制备贝那普利药物血清和祛风通络药物血清,体外培养肾小球MCs,并将其分为正常对照、脂多糖(LPS)、贝那普利治疗和祛风通络方治疗组。分别采用激光扫描共聚焦显微镜、Western blot、免疫组化及实时定量PCR检测各组肾小球系膜细胞Cx36蛋白及基因的表达变化。结果 与对照组比较,脂多糖组肾小球MCs Cx36表达明显增强（P<0.01）;与脂多糖组比较,两治疗组Cx36表达均减弱（P<0.01或P<0.05）。各组肾小球MCs Cx36基因表达与蛋白表达相似。结论 Cx36及基因在脂多糖诱导的肾小球MCs中有明显表达,祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖的作用可能与其调节Cx36及基因表达有关。     

HMGB1对人鼻咽癌细胞株C666-1体外增殖的影响

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人鼻咽癌细胞株C666-1增殖的影响并探讨其可能的机制。方法用siRNA干扰
鼻咽癌细胞株C666-1 HMGB1基因,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测cyclin D1,CDK6及相
关通路蛋白表达。用带GFP的HMGB1质粒转染鼻咽癌细胞株C666-1,EDU和CCK-8检测细胞增殖。结果干扰HMGB1的表
达后,细胞增殖明显减慢（P<0.001）;细胞周期分析显示处于G1期细胞比例增多（P<0.001）,S期细胞比例明显下降（P<0.001）;
Western blot结果显示cyclin D1、CDK6的表达下调,STAT3,P-STAT3的表达也下调。过表达HMGB1后,EDU显示处于S期细
胞比例增多（P<0.05）;CCK-8显示细胞增殖明显增快（P<0.001）。结论HMGB1促进人鼻咽癌细胞株C666-1的增殖,可能通过
STAT3信号通路上调cyclin D1、CDK6促进鼻咽癌细胞株C666-1由G1期进入S期从而调控其增殖。
     

TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导下肾小球系膜细胞增殖中的作用及作用其机制。方法将细胞分为正常对照
组（N,5.5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（H,25 mmom/L 葡萄糖）、高糖+不同浓度的非诺贝特组（FN,10、50、100 μmol/L）。采用
CCK-8法检测细胞增殖率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测细胞周期改变,免疫细胞化学染色观
察TRB3表达,Western Blot检测细胞中TRB3、P-AKT蛋白的表达。结果高糖能够诱导肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）;非诺贝
特能够抑制肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）,且具有浓度依赖性。非诺贝特干预后细胞出现凋亡形态学改变;非诺贝特可以使
系膜细胞发生G1/S期阻滞;正常组、高糖组胞浆有少量TRB3蛋白表达,但高糖不能促进TRB3表达增多,随着非诺贝特浓度的
增加TRB3表达量增多,P-AKT表达逐渐降低。结论非诺贝特可以促进TRB3的表达;TRB3可能通过抑制AKt的磷酸化使肾
小球系膜细胞发生G1/S期阻滞从而抑制其增殖。
     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6 mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

祛风通络方对大鼠系膜细胞增殖及转化生长因子β1和白细胞介素6mRNA表达的影响

目的：观察祛风通络方对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cell，MC）增殖及其分泌的转化生长因子β1（transforming growth factor—betal，TGF—β1）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组、模型组、蒙诺（福辛普利钠）组和祛风通络方组。并采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测大鼠MC增殖情况，逆转录聚合酶链反应法检测TGF—β1和IL-6mRNA的表达。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖升高（P〈0．05）；与模型组比较，祛风通络方组大鼠肾小球系膜细胞增殖受到抑制（P〈0．05），且祛风通络方作用优于蒙诺（P〈0．05）。模型组系膜细胞TGF-β1mRNA表达高于正常对照组（P〈0．01）；祛风通络方组和蒙诺组系膜细胞TGF—β1mRNA表达低于模型组（P〈0．01）；祛风通络方组与蒙诺组比较，TGF—β1mRNA的表达降低（P〈0．01）。LPS刺激后可提高大鼠系膜细胞内IL-6mRNA的表达，与正常对照组比较，模型组IL-6mRNA表达上升，差异有统计学意义（P〈0．01）；祛风通络方组、蒙诺组与模型组比较，IL-6mRNA表达下降（P〈0．01）；祛风通络方降低IL-6mRNA表达的作用亦优于阳性对照药蒙诺（P〈0．01）。结论：祛风通络方对大鼠MC增殖及其TGF—β1和IL-6mRNA表达均有明显的抑制作用。     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

祛风通络方抑制NF-κB活化对脂多糖诱导的体外培养大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达的影响

目的 研究祛风通络方对脂多糖刺激大鼠肾小球系膜细胞表达炎性细胞因子TGF-β1、IL-6的影响及其作用机制.方法 采用体外培养大鼠系膜细胞和血清药理学方法,分为空白组,病理组,治疗组和阳性对照组.采用生物素核酸一蛋白结合凝胶迁移电泳分析法检测NF-KB的表达;RT-PCR检测TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达.结果 祛风通络方能够抑制脂多糖刺激肾小球系膜细胞中NF-KB活化,且在祛风通络方的作用下,TGF-β1mRNA和IL-6mRNA表达均呈不同程度减弱.结论 提示祛风通络方可能通过抑制NF-B活化,下调TGF-131mRNA和IL-6mRNA的表达达到减轻系膜细胞增殖,防止肾小球硬化的作用.这可能是祛风通络方治疗系膜增生性肾炎的机制之一.     

细胞周期正性调控因子的异常表达与甲状腺癌发生发展的关系

目的探讨细胞周期正性调控因子的异常表达与人甲状腺癌发生、发展的关系,并评价其在判断甲状腺肿瘤细胞增殖
活性和病人预后方面的应用价值。方法采用免疫组织化学SP法检测50 例甲状腺癌、30 例甲状腺腺瘤、30 例结节性甲状腺
肿及20 例正常甲状腺组织中MCM7、CDK2 及Ki-67 蛋白的表达。结果癌组中MCM7、CDK2 及Ki-67 蛋白的阳性表达率均
显著高于在腺瘤组、结甲组及正常组中的表达（均为P<0.01）,分别为100.00%(50/50)、80.00%(40/50)、84.00%（42/50）。癌组中
三者的蛋白表达两两比较,均呈正相关（均为P<0.01）。结论甲状腺癌中MCM7、CDK2 及Ki-67 蛋白的高表达可能与癌的
发生相关,三者联合应用或许可作为临床早期诊断和评价预后的生物学指标。在评价甲状腺肿瘤细胞增殖活性方面,MCM7优
于Ki-67。
     

1,25-二羟维生素D3对胃癌细胞增殖和TNF-α表达的影响

摘要：目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对胃癌SGC-7901 细胞增殖和细胞周期的影响,以及对细胞因子TNF-α
mRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度1,25(OH)2D3处理胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞
仪检测细胞生长周期;RT-PCR和Western blotting分别检测TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果1,25(OH)2D3对胃癌
SGC-7901细胞增殖有抑制作用（P<0.05）,并呈时间剂量依赖性。经1,25(OH)2D3处理72 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的动
力学改变（F=9.81,P<0.05）。TNF-α mRNA及蛋白的表达水平均呈剂量依赖性减少（P<0.05）。结论1,25(OH)2D3可抑制胃癌
细胞增殖,且与其抑制TNF-α的表达可能有相关性。
     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾小球滤过膜的影响

目的探讨祛风通络方对阿霉素肾病(AN)大鼠蛋白尿及肾小球滤过膜的影响。方法 56只雄性清洁级SD健康大鼠随机分为空白对照组(A组)和AN模型组,采用一次性尾静脉注射阿霉素(ADR)的方法,建立大鼠AN模型,空白对照组一次性尾静脉注射等量生理盐水,造模成功后再将模型组分为病理组(B组)、祛风通络方组(C组)、强的松组(D组)和贝那普利组(E组)。邻苯三酚红/钼酸盐法测定24 h尿蛋白量;取肾皮质经聚乙烯亚胺(PEI)染色检测大鼠肾小球滤过膜上AS的表达;免疫荧光技术检测Nephrin蛋白表达。结果①模型组大鼠于实验第21天时尿蛋白排泄较正常对照组明显增高(P<0.01),提示造模成功;药物干预后,各药物组大鼠尿蛋白排泄均显著下降,与病理组比较(P<0.01);②祛风通络方组比模型组大鼠肾小球滤过膜上阴离子位点、Nephrin蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论祛风通络方能显著降低阿霉素肾病大鼠24 h尿蛋白定量,改善症状,上调肾小球滤过膜上AS及Nephrin蛋白表达。     

X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响

目的:探讨X射线对小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4表达的影响.方法:采用细胞间接荧光标记法、FACScan流式细胞仪检测不同剂量X射线全身照射后小鼠脾细胞内P16、cyclin D1和CDK4三种蛋白表达的时程变化和量效关系.结果:2.0 Gy X射线照后24 h小鼠脾细胞P16表达明显高于假照组;CDK4表达水平在照后8 h明显降低,持续至照后72 h仍低于正常水平.周期蛋白cyclin D1表达轻度下调.不同剂量照射后P16蛋白表达呈剂量依赖性增加,1.0～4.0 Gy组与假照射组相比显著增多(P＜0.05,P＜0.01);cyclin D1蛋白表达随剂量升高有降低趋势;CDK4亦呈剂量依赖性降低,0.5～6.0 Gy组与假照组比较差异具有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论:P16/cyclin D1/CDK4/pRb通路在电离辐射诱导脾细胞G1期阻滞中可能起十分重要作用.     

口腔癌及癌前病变中FHIT与cyclinD1／CDK4表达的相关性研究

OBJECTIVE: To detect the expressions of fragile histidine triad (FHIT) and cyclin D1/CDK4 in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and oral precancerous lesions and investigate the relationship between the expressions and the histopathological changes. METHODS: Immunohistochemical staining by SP methods was utilized to detect the expression of FHIT and cyclin D1/CDK4 in 64 cases of OSCC, 39 oral precancerous lesions and 12 normal oral mucosa specimens. RESULTS: The rate of the negative or low FHIT expression in OSCC was 17% (11/64), which was remarkably lower than that in normal oral membrane and oral precancerous lesions (P<0.01). Significantly higher levels of cyclin D1/CDK4 expressed in OSCC than in normal oral membrane and precancerous lesions (P<0.01). There was no significant correlation between FHIT and cyclin D1/CDK4, and positive correlation between cyclin D1 and CDK4 was observed. CONCLUSION: FHIT, cyclin D1 and CDK4 may play a role in the pathogenesis of OSCC, and FHIT can down-regulate the expression of cyclin D1.     

CyclinD1、CDK4、P16在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨CyclinD1、CDK4和P16在骨肿瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组化和原位杂交方法检测105例骨肿瘤组织中的CyclinD1、CDK4和P16的表达,并对其中85例骨肉瘤主要临床资料、病理分级及临床相关参数进行比较,用χ2检验进行统计学处理。结果骨肉瘤中CyclinD1、CDK4蛋白及mRNA阳性表达明均显高于骨软骨瘤(P<0.01);骨肉瘤临床分期中Ⅱb期、Ⅲ期均高于Ⅰ期、Ⅱa期(P<0.01);随着病理分级恶性程度增高而显著增加(P<0.01);且在软组织浸润和转移组中明显高于非浸润和非转移组(P<0.01)。P16蛋白及mRNA阳性表达骨软骨瘤明显高于骨肉瘤(P<0.01);骨肉瘤的临床分期中Ⅱb期、Ⅲ期均低于Ⅰ期、Ⅱa期(P<0.01);随着病理分级恶性程度增高而显著降低(P<0.01);软组织浸润和转移明显低于非浸润和非转移组(P<0.01)。结论 CyclinD1、CDK4、P16的蛋白及mRNA在骨肉瘤中不同程度异常表达与肿瘤的临床分期、病理分级和浸润、转移有一定关系。提示CyclinD1、CDK4和P16蛋白及其mRNA高表达在骨肉瘤的发生、发展和浸润转移过程中发挥重要作用。     

同种异体移植物炎症因子-1在结直肠癌细胞增殖、迁移及凋亡中的作用

目的探讨同种异体移植物炎症因子-1（AIF-1）在结直肠癌（CRC）进展中的作用以及可能的作用机制。方法采用免疫组 织化学染色和Western blot的方法检测70例CRC患者癌组织及癌旁正常组织中AIF-1的表达水平,并分析AIF-1的表达与临床 病理特征的相关性。然后将AIF-1过表达质粒（AIF-1）和阴性对照质粒（NC）转染至CRC细胞株SW480,探讨AIF-1在体外细 胞中的功能。EdU增殖实验和流式细胞术用来评估细胞增殖和细胞周期;Transwell迁移实验和Annexin V-APC/7-AAD凋亡检 测试剂盒用来分析细胞迁移和凋亡;SB203580用来阻断p38 MAPK通路。最后用western blot的方法检测CDK4,Cyclin D1, P21,P27,MMP2,MMP9,Bax,Bcl-2,Bcl-xl,p38和p-p38的表达水平。结果AIF-1在结直肠癌组织中的表达明显低于癌旁正常 组织,其表达水平与淋巴结转移（P=0.008）,TNM分期（P=0.003）和肿瘤大小（P=0.023）密切相关。体外增殖和周期实验结果显 示,过表达AIF-1 于SW480 细胞后能降低EdU细胞阳性率以及阻滞细胞的G1 期（P<0.05）;且Western blot 结果显示过表达 AIF-1于SW480细胞后能抑制CDK4、Cyclin D1的蛋白表达,增强P21、P27的蛋白表达。Transwell迁移结果显示过表达AIF-1 能抑制SW480细胞的迁移（P<0.001）,伴随着MMP2和MMP9的蛋白水平的下调。此外,AIF-1过表达能诱导SW480细胞凋亡 （P<0.01）,增强Bax和p-p38的蛋白水平,减弱Bcl-2和Bcl-xl的蛋白水平,而利用SB203580可以明显改善AIF-1过表达引起的 凋亡。结论AIF-1通过抑制细胞增殖和细胞迁移以及诱导细胞凋亡在结直肠癌中发挥肿瘤抑制作用,且AIF-1通过激活p38 MAPK途径促进细胞凋亡。     

龙葵素通过诱导细胞周期G1/S阻滞抑制裸鼠前列腺癌细胞Du145移植瘤生长

目的探讨龙葵素对前列腺癌细胞Du145 裸鼠移植瘤生长的影响及分子机制。方法采用高度恶性的转移前列腺癌 细胞株Du145 作为动物体内实验的模型,裸鼠皮下接种Du145 细胞建立裸鼠皮下瘤模型。1 周后将接种的裸鼠随机分为2 组：龙葵素实验组和生理盐水空白对照组,每3 d 分别向实体瘤中间部位注射0.2 mL龙葵素（50 μg/mL）和生理盐水,观察裸 鼠体内肿瘤生长,3 周后颈椎脱臼处死裸鼠,剥离肿瘤组织,测量肿瘤的重量并根据肿瘤重量计算抑瘤率。实时荧光定量 PCR和Western blotting 技术检测各组裸鼠瘤体细胞周期相关基因mRNA和蛋白表达。Tunel 原位检测各组裸鼠瘤体组织凋 亡情况。结果龙葵素治疗组裸鼠肿瘤成瘤率明显下降,裸鼠瘤体生长速度明显低于对照组（P<0.01）。龙葵素能抑制瘤体 细胞CyclinD1、CyclinE1、CDK2、CDK4 和CDK6 基因mRNA和蛋白的表达,显著升高p21 基因mRNA和蛋白的表达,龙葵素 干预后裸鼠瘤体组织凋亡显著增加（P<0.01）。结论龙葵素可通过调控细胞周期G1/S 关卡促进组织细胞凋亡抑制前列腺 癌细胞裸鼠移植瘤生长。     

1α,25-（OH）2D3对大鼠成骨细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的研究1a,25-（OH）2D3对SD大鼠成骨细胞增殖及相关蛋白的表达的影响。方法采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期,RT-PCR和Westernblotting分别检测细胞G。期调节蛋白细胞周期素D1（cyclinD1）、细胞周期素依赖性激酶4（CDK4）、p21mRNA和蛋白的表达。结果与0nmol·L-1组比较,各1d,25-（OH）2D3干预组细胞周期发生改变,G0／G1期细胞数递减,而S＋G2/M期细胞比例升高,PI增加,差异显著（P〈0．05）;且1a,25-（OH）2D3可诱导细胞cyclinDl、CDK4mRNA及蛋白表达和下调p21（P〈0．05）。结论置1d,25-（OH）2D3可上调cyclinD1、CDK4表达和抑制负性调节因子p21,调节相关蛋白表达以促进成骨细胞增殖。     

细胞增殖调控基因在反流性食管炎及其并发症中的表达变化

胃镜检查或手术中取得正常对照组(25例)、反流性食管炎(RE,35例)、Barrett食管(BE,20例)及食管腺癌(EA,9例)患者的食管组织标本,采用免疫组化法检测cyclin D_1、CDK_1和CDK_4基因表达。结果发现EA组的cyclin D_1和CDK_4表达较正常对照组显著增强(P<0.01,P<0.05),SE组的cyclin D_1表达亦较对照组增强(P<0.05),EA组的cyclin D_1表达较RE组增强(P<0.05),而其他组间的cyclin D_1或CDK_4表达以及各组间CDK_1表达均无显著性差异。提示BE、EA患者食管组织中cyclin D_1、CDK_4基因的表达明显改变,反流可能为导致此系列疾病的机制之一,而CDK_1的作用不显著。检测cyclin D_1和CDK_4的表达可能对RE和BE患者的预后监测具有较大意义。