灰毡毛忍冬LmC3H1基因的克隆及表达模式与绿原酸含量相关性分析

目的:以灰毡毛忍冬为材料,克隆对-香豆酸3-羟化酶(LmC3H1)基因,进行生物信息学和表达模式分析,结合绿原酸含量,研究推测灰毡毛忍冬LmC3H1基因的功能。方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术克隆LmC3H1基因的全长c DNA序列,对该序列进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和HPLC分别测定灰毡毛忍冬茎、叶及不同花期花中LmC3H1的相对表达量及绿原酸含量。结果:克隆得LmC3H1(Gen Bank:MN177695)基因,开放阅读框(ORF)长度为1 533 bp,编码510个氨基酸,推测其分子式为C_(2618)H_(4134)N_(718)O_(727)S_(22),相对分子质量为58 005.32,等电点8.92,为亲水性蛋白,定位于叶绿体中,具有跨膜区域LLLIPAVLFLISLVYPLI,含有细胞色素P450的保守结构域CYTOCHROME_P450(422-433 aa);Real-time PCR结果显示,LmC3H1在灰毡毛忍冬茎、叶及不同花期花有不同程度的表达,其中在花发育阶段,白色花蕾期相对表达量最高,花蕾初期及白色开花期次之;白色花蕾期花与茎、叶比,花的相对表达量最高,叶的最低;HPLC结果显示,从绿白色花蕾期到金黄色开花期绿原酸含量呈上升趋势,金黄色开花期含量最高,不同器官中,花中绿原酸最高,茎最低。结论:克隆得到灰毡毛忍冬LmC3H1基因,推测LmC3H1可能参与灰毡毛忍冬花绿原酸的生物合成。该研究为进一步研究该基因的功能及探究灰毡毛忍冬绿原酸生物合成和调节机制提供了依据,同时为遗传改良灰毡毛忍冬品质奠定了基础。     

微信辅助PBL教学法在内分泌科住院医师培训中的应用

PBL教学模式在我国本科教育中被广泛应用,并逐渐引入到住院医师规范化培训带教中来,用以提高医学生自主学习能力及综合素质。但是,PBL在临床带教过程中常受时空及教学资源等限制。微信平台具有操作简单便捷、交流形式多样、传递信息及时、教学资源丰富等特点,可以很好的辅助PBL教学。本文阐明了PBL教学法联合微信平台教育模式的优势及利用微信平台辅助PBL教学的具体实施步骤。微信平台辅助PBL教学法,明显改善了临床教学质量,提高了规培医生的自身学习能力,同时也提升了团队合作和沟通能力,在内分泌科住院医师规范化培训中可发挥有效作用,是一种值得尝试的带教模式。     

CYP2C19 和 MTHFR 基因变异的交互作用 与食管癌易感性的关联研究

〔摘 要〕 目的：探讨细胞色素 P4502C19（CYP2C19）和亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因变异的交互作用与 食管癌易感性的关系。方法：收集 2017 年 5 月至 2018 年 12 月赣州市人民医院经胃镜和病理检查确诊为新发食管癌患者 100 例，同时随机抽取相同年龄组无肿瘤病史及家族史的一般人群 200 例（男女各 100 例）作为对照，采用序列特异性引 物聚合酶链反应（PCR–SSP）法检测患者和正常对照者的 CYP2C19（*1、*2、*3）和 MTHFR（C677T）基因型分布。 结果：两组研究对象的 MTHFR 基因型及等位基因频率分布比较，差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）；食管癌组 EM、IM 占 比均低于正常对照组，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）；PM 占比方面，食管癌组高于正常对照组，差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）；食管癌组的 EM 型 *1/*1 型、IM 型 *1/*2 型基因分布均低于正常对照组，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）； 而在 PM 型中，食管癌组中 *2/*2 型、*2/*3 型基因分布均高于对照组，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05），两组均无 *3/*3 型 基因分布。结论：MTHFR（C677T）突变跟食管癌的发生无关，CYP2C19 基因慢代谢型增加了食管癌发病的危险性， MTHFR（C677T）与 CYP2C19 基因突变无关联性。     

运用行为生态学模式管理手卫生的效果评价

目的运用行为生态学模式管理手卫生。方法自2016年1月-6月,在某三级综合医院持续采取针对手卫生的多方面干预措施,此前、后各三个月分别为干预前期(2015年10月-2015年12月)和干预后期(2016年7月-2016年9月),本研究应用WHO推荐的"医疗机构手卫生自我评价系统",用于测量手卫生的系统性管理水平,通过记录比较干预前期、干预期和干预后期的数据,并参考其提示的系统性管理缺陷的线索,改善手卫生管理工作;分析手卫生的依从性、医院感染率及多药耐药菌检出率等医院感染管理指标的变化规律。结果 "医疗机构手卫生自我评价系统"平均值为379.5分,其中干预前期为367.5分,属于"尚可";干预期和干预后期的得分均属于"优秀";10名观察人员在2015年10月-2016年9月随机观察706名医务人员的手卫生执行情况,依从率为99.1%;手卫生依从率与医院感染率及6种多药耐药菌检出率间无相关性;按照回归方程中决定系数(coefficient of determination)的大小排序,手卫生依从率决定医院感染率的系数最大(0.55),决定耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)检出率的系数为0.35、耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌(CRE)为0.29、其余均0.1。结论教育和培训及多学科合作是改善手卫生管理的重要组成部分,但是陈旧的手卫生设施等客观因素阻碍了手卫生的管理效果。     

还贝止咳方对肺炎链球菌致大鼠肺热的治疗作用

目的 观察还贝止咳方对肺炎链球菌致肺热模型大鼠的胸腺、脾脏指数,炎性细胞及炎性因子的影响。方法 SD幼年大鼠随机分为对照组、模型组、头孢呋辛酯片组、小儿肺热咳喘颗粒组及还贝止咳方的低、中、高剂量组,采用鼻腔滴入肺炎链球菌的方法建立大鼠肺热模型,造模前后监测大鼠体温,评价大鼠肺热模型;采用流式细胞仪及全血分析仪检测大鼠全血中的炎性细胞;采用酶联免疫技术检测大鼠肺灌洗液（BALF）中的白细胞介素（IL-4、IL-1β、IL-6、IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血清免疫球蛋白E（IgE）水平;完整剥离大鼠脾脏和胸腺,检测脾脏指数和胸腺指数。结果 与对照组比较,模型组大鼠的体温明显升高（P<0.01）,说明造模成功。与模型组比较,还贝止咳方低、中、高剂量组大鼠体温均显著降低（P<0.05、0.01）,全血中的白细胞、嗜酸性粒细胞数目、Th/Ts比值均显著降低（P<0.05、0.01）,CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺细胞比例显著上升（P<0.05、0.01）;BALF中的IL-10、IL-1β、IL-6、IL-4、TNF-α的水平明显降低（P<0.05、0.01）;且对IL-1β及TNF-α的下调作用优于阳性对照药;脾脏指数明显升高（P<0.05、0.01）。结论 还贝止咳方对细菌性大鼠肺炎模型具有一定的治疗作用,主要通过调节大鼠的免疫功能,减轻炎性反应发挥作用。     

四制香附炮制前后UPLC指纹图谱比较及指标成分含量测定

目的 研究四制香附的质量评价方法。方法 建立香附和四制香附的超高效液相色谱法（UPLC）指纹图谱并通过化学计量学方法比较炮制前后指纹图谱中总体化学成分的变化,流动相甲醇（A）-水（B）梯度洗脱（0~10 min,5%~40%A;10~30 min,40%~70%A;30~40 min,70%A）,流速0.3 mL·min^-1,进样量3 μL,柱温35 ℃,检测波长280 nm。采用UPLC比较香附四制前后主要指标成分香附烯酮和α-香附酮的含量变化,流动相甲醇-水（75∶25）,检测波长242 nm。结果 四制对香附指纹图谱中化学成分的总体特征产生了显著影响。香附和四制香附的指纹图谱中共标示了28个特征峰,其中峰1,2,4为四制香附的特有峰,峰5为香附的特有峰,经指认峰2为5-羟甲基糠醛,峰24为香附烯酮,峰27为α-香附酮。香附四制后产生的5-羟甲基糠醛来源于四制辅料中的米醋、黄酒及香附中多糖类成分的美拉德反应。定量分析结果显示,四制前后香附烯酮含量差异无统计学意义,但α-香附酮含量明显降低。结论 香附四制过程中存在结构转化产生新成分且伴随着指标成分含量变化,可作为区别香附和四制香附的专属特征标识和差异性特征标识。该研究从定性和定量2个方面快速有效地评价了香附和四制香附,建立的方法准确性强、稳定性好,为完善香附和四制香附的质量评价体系提供了实验依据。     

基于Ca2+-CaMKⅡ信号通路的济川煎治疗阳虚便秘的作用及分子机制

目的 基于Ca²⁺-CaMKⅡ通路观察济川煎对阳虚便秘大鼠的治疗作用及分子机制。方法 采用白醋+活性炭冰水联合复方地芬诺酯片复制阳虚便秘大鼠模型。将模型成功大鼠随机分为5组,即模型组、莫沙必利组(1.88 mg·kg^-1)、济川煎高(8.26 g·kg^-1)、中(4.31 g·kg^-1)、低(2.16 g·kg^-1)剂量组,灌胃给药每日1次,连续7 d。末次给药,记录大鼠状态并评分,进行排便功能测定;分离模型大鼠结肠平滑肌细胞并鉴定,FCM检测结肠平滑肌细胞内Ca²⁺浓度变化;采用ELISA法检测大鼠血清中cAMP、cGMP含量及其比值;采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠结肠平滑肌细胞CaM、CaMKⅡ亚型的表达情况。结果 济川煎可明显缓解模型大鼠腹胀,摄食、饮水量、排便减少及体质量降低的症状(P<0.05),评分明显升高(P<0.01);能明显缩短首粒排便时间(P<0.01),增加排便粒数(P<0.05);济川煎...