地榆鞣质抗肝癌细胞SMMC—7721的MTT及FCM分析

探讨中药成分地榆鞣质的抗癌活性，并试图建立一种筛选抗癌药物的方法，方法：运用ＭＴＴ法测定ＳＴＭ及ＳＴＬ对体外培养人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞的杀伤率并通过流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象ＤＮＡ变化。结果；ＳＴＭ与ＳＴＬ均有明显抗癌活性，与阴性对照组相比有显著差异，并具有剂量效应关系，ＳＴＭ，ＳＴＬ与ＭＭＣ联合用药抗癌活性增强，与单独用药组相比差异显著；     

蜈蚣提取物诱导SiHa细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞生长的抑制及其作用机制。方法:观察不同浓度的不同蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞的生长抑制情况:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的蜈蚣提取物和阳性对照药顺铂作用于培养的SiHa细胞48h,采用MTT法测定药物对细胞生长的影响,以流式细胞术观察DNA含量和凋亡的变化情况,DNA片断化分析凋亡特有DNA梯形格局和Western Blot测定bax、Caspase3蛋白水平的表达。结果:SiHa细胞用8、16、32mg/ml的乙醚、乙醇蜈蚣提取物处理48h后,细胞生长显著受抑;DNA周期改变明显,亚G1峰与对照组有显著性差异;DNA-Ladder显著;Western Blot提示相关凋亡蛋白bax、Caspase3表达并显示活性,凋亡率增高明显。结论:中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌SiHa细胞的生长有明显地抑制作用,其机制与改变细胞DNA周期,促进凋亡有关。     

白首乌甙对DEN诱发实验性肝癌大鼠肝细胞DNA含量和生长周期变化的影响

用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠发生实验性肝癌,用流式细胞仪分析自首乌甙对该模型大鼠肝细胞DNA含量和细胞生长周期的影响。实验结果表明治疗组大鼠与模型组比较,肝细胞内2倍体细胞明显增多,多倍体细胞明显减少;大鼠肝细胞处于G_0/G_1期的细胞显著增多,处于S期的细胞显著减少,说明白首乌甙可抑制肿瘤细胞DNA的合成,阻止肿瘤细胞分裂。     

人胚胎组织低分子活性肽协同中药有效成份的抗白血病效应的研究

目的 :研究比较几种胚胎组织中低分子抗癌活性肽协同中药有效成份抑制白血病细胞增殖的作用。方法 :采用噻唑蓝法 (MTT) ,测定四种人胚胎活性肽协同三种中药多糖作用于P388白血病培养细胞的抑癌率。结果 :不同的人胚胎组织低分子活性肽对P388白血病细胞具有不同的抑制作用 ,其中胎脑肽抑癌率为 74 16 % ,胎肝肽为 71 81% ,胎脾肽为 46 96 % ,胎盘肽为 45 49%。人胎肝、胎盘活性肽与中药有效成份的协同作用 ,可显著提高人胎肝、胎盘的抗白血病作用 ,与单纯提取物比较 ,抑制作用显著增强 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,尤其小檗胺与胎盘肽协同抗白血病作用突出 ,差异有非常显著性 (P <0 0 1)。但是胎脾肽与三种中药均无协同作用。结论 :来自不同组织的人胚胎低分子活性肽对P388白血病细胞有不同的抑制作用 ,人胎肝、胎盘肽协同中药有效成份可提高人胚胎活性肽的抗白血病生物活性 ,增强抗癌效应 ,这一研究结果对恶性肿瘤的生物治疗有一定的意义     

益气化瘀方对体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞超微结构的影响

研究益气化瘀方 (主药 :黄芪、丹参、川芎等 )对体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞超微结构的影响。 8～ 10周龄SD大鼠 70只 ,随机均分为生理盐水对照组 ,芬必得组 ,中药低、中、高剂量组 ,每组 14只。定时、定量胃饲相应药物 ,4天后分别处死大鼠取血清 ,相同条件下制备益气化瘀方含药血清和对照血清 ,取体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞进行研究 ,采用透射电镜及流式细胞仪检测软骨细胞超微结构及细胞凋亡率。结果显示 ,中药组能促进细胞DNA合成(S期 ) ,与对照组相比 ,差异有非常显著的意义 (P <0 0 1)。表明益气化瘀方具有促进大鼠颈椎间盘软骨细胞生长、增殖及促进细胞DNA合成的作用。     

TNP-470对人肝癌细胞增殖和凋亡的实验研究

目的:研究TNP-470对肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖抑制效应和凋亡诱导作用。方法:采用四氮唑盐还原法(MTT)检测药物对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状条带,流式细胞仪检测细胞凋亡峰和细胞周期变化。结果:MMT法显示TNP-470可显著抑制SMMC-7721细胞体外增殖,DNA电泳显示典型的梯状条带,流式细胞仪检查有明显的凋亡峰出现,细胞周期阻滞在G2/M期,实验用药组细胞凋亡率明显增高,与对照组存在显著性差异(P<0.01)。结论:TNP-470对SMMC-7721体外直接杀伤作用不明显,但可诱导SMMC-7721细胞体外凋亡,诱导凋亡可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

川芎嗪对瘢痕成纤维细胞形态和增殖抑制的影响

目的　探索川芎嗪治疗增生性瘢痕的机理。方法　将含川芎嗪的培养液加入增生性瘢痕成纤维细胞中 ,培养增生性瘢痕成纤维细胞 2 4h ,与未加药者对照比较。结果　 1)含川芎嗪组成纤维细胞形态发生变化 ,由长梭形变为圆形 ,而培养上清中的乳酸脱氢酶 (LDH)活性及MTT(四甲基偶氮唑 )比色法结果 ,用药组与对照组均无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;2 )流式细胞仪检测各时相细胞DNA水平 :用药组G0 +G1期细胞的百分比明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,而G2 +M期百分比则显著低于对照组(P <0 .0 1)。结论　川芎嗪能改变增生性瘢痕成纤维细胞形态和抑制其增殖 ,但并不影响其活力     

流式细胞术快速测定细胞活性

0　引言　细胞周期动力学研究和细胞凋亡的研究是目前生物医学领域的热门课题之一 [1 ] ,流式细胞术 (FCM)检测细胞周期和凋亡是其主要研究手段 [2 ] .FCM对细胞周期的分析方法已很成熟 ,但是我们在分析化学或物理因素对细胞周期的影响时 ,发现在 DNA直方图上出现 DNA含量较低的细胞峰 ,为确定该细胞峰的性质 ,鉴定细胞的活性 ,我们用 FCM法和台盼蓝染色法进行对比实验 ,建立了 FCM同时检测细胞周期和细胞活性的新方法 .1　材料和方法1.1　材料　所用设备包括 :EL ITE ESP型流式细胞仪 (美国Coulter公司 ) ,XD- 10 1型倒置显微…     

去甲斑蝥素对人脐静脉内皮细胞株的细胞毒作用

研究中药抗癌与抑制血管形成之间的关系。应用细胞形态学、细胞生长曲线、MTT检测、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测方法等。结果表明去甲斑蝥素对体外培养的人脐静脉内皮细胞有显著的生长抑制作用 ,药效呈时间依赖性 ,并在一定范围内 (5～ 80 μmol/L)与剂量呈正相关 ,半有效量为 4 0 μmol/L。形态学观察证明给药后 2 4h ,坏死细胞数随给药浓度增多。分离提取细胞DNA ,在琼脂糖凝胶电泳后可见弥散状核酸降解带 ,未见典型的细胞凋亡梯状带。流式细胞仪检测表明 ,随着给药浓度增高 ,四倍体细胞数显著增多 ,不见明显的凋亡细胞峰。表明去甲斑蝥素对人脐静脉内皮细胞有较强的细胞毒作用 ,并能抑制细胞正常分裂。     

加味四君子汤诱导小鼠肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:从诱导肿瘤细胞凋亡的角度探讨中药复方加味四君子汤抗肿瘤作用的机理。方法:1.运用透射电镜观察肿瘤组织中凋亡细胞的超微结构。2.运用原位末端标记法观察凋亡细胞形态并计数,计算凋亡指数。3.运用流式细胞仪分析加味四君子汤对肿瘤细胞增殖周期的影响。结果:1.透射电镜观察到凋亡细胞超微结构发生了一系列典型变化。2.原位末端标记法镜下可见不同时期的凋亡细胞,加味四君子汤组凋亡指数为12.29%,与生理盐水组比较差异非常显著(P<0.01)。3.流式细胞仪分析发现加味四君子汤组G0-G1期细胞增加,S期和G2-M期细胞减少,中药组处于G0-G1期的细胞占57.88%,与生理盐水组比较差异非常显著(P<0.01)。结论:加味四君子汤抗肿瘤作用机理之一可能是将细胞周期阻滞在G0-G1期,继而导致受阻滞的细胞发生凋亡。     

鸡红细胞标准品制备及其在流式细胞仪DNA周期检测中的应用

目的:制备鸡红细胞标准品并探索其在流式细胞仪DNA周期检测中的应用.方法:采集鸡红细胞制成纯净红细胞,然后用乙醇固定,放于4℃冰箱备用.用PI荧光染料标记鸡红细胞和分别加入鸡红细胞的人结肠癌细胞SW480、人喉癌细胞系Hep2、人肺腺癌细胞A5494,用流式细胞仪检测DNA含量.结果:鸡红细胞替代正常二倍体细胞与肿瘤细胞同时染色,直方图显示两种细胞G0/G1期峰位置相差大,可清晰分辨,得到肺腺癌细胞A549的G0/G1期峰道数和鸡红细胞峰道数比值为4.7120,喉癌细胞系Hep2的G0/G1期峰道数和鸡红细胞峰道数比值为7.0962,结肠癌细胞SW480的G0/G1期峰道数和鸡红细胞峰道数比值为4.5234.结论:利用流式细胞术,以鸡红细胞为内标标记,可以准确计算并识别多种肿瘤细胞DNA倍体,并且可以辅助流式检测的质量控制,此方法简便易行值得推广.     

喉癌前病变DNA含量测定及细胞周期分析的意义

目的　探讨DNA含量和细胞周期分析在喉癌前病变诊断中的价值。方法　用流式细胞仪测定正常喉上皮、角化病、不典型增生、乳头状瘤及喉鳞癌共 62例患者的DNA含量及细胞周期。结果　从正常喉细胞到癌细胞的变化过程中 ,DNA含量、S期细胞比例及增殖活性逐渐增加 (P <0 0 1) ,且出现非整倍体细胞。喉癌细胞非整倍体率达91 7% ,超出了其他各组 (P <0 0 0 5 )。结论　流式细胞DNA定量分析有助于喉癌的早期诊断     

大葱提取液抗人胃癌作用的细胞周期特点

目的观察大葱提取液抗胃癌作用的细胞周期特点。方法将大葱提取液作用于体外培养的人胃癌细胞MGC803后,采用电镜观察MGC803细胞超微结构变化;应用流式细胞仪分析MGC803细胞DNA含量及周期分布,检测其分化与凋亡情况。结果(1)透射电镜下观察:大葱作用后的癌细胞细胞膜完整,出现分化和凋亡的形态学变化。(2)流式细胞仪检测:1.25%大葱提取液作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h,凋亡率分别为0.6%、1.6%、6.1%、13.5%,二倍体比例分别为0%、0.3%、35.8%、93.9%;1.25%、2.5%、5.0%、10.0%大葱提取液作用24h,凋亡率分别为0.6%、4.1%、6.2%、24.9%,二倍体比例分别为0%、10.6%、34.7%、72.2%。低浓度组以诱导分化作用为主,高浓度组同时可诱导细胞凋亡,呈剂量和时间依赖性。实验组细胞随大葱液浓度和作用时间增加,异倍体细胞比例逐渐减少,细胞凋亡率逐渐增加。DNA含量出现二倍体峰和亚二倍体峰~凋亡峰。大葱提取液抑制胃癌细胞可发生在G0/G1期、S期和G2/M期,无周期特异性。结论大葱提取液能明显抑制体外培养的胃癌细胞生长增殖,既可诱导胃癌细胞分化,又可诱导胃癌细胞凋亡,抗癌作用无周期特异性。     

槟榔碱对骨髓细胞内DNA的影响

目的通过体内骨髓细胞实验,探讨槟榔碱对DNA的损伤作用机制。方法采用AO探针标记,激光共聚焦技术检测槟榔碱对骨髓细胞内DNA和RNA的影响;采用流式细胞仪测定槟榔碱对骨髓细胞周期的影响。结果给予槟榔碱20、10、5mg/kg剂量的染毒组,骨髓细胞内RNA/DNA的荧光像素比值明显高于空白对照组,差异非常显著(P<0.01);骨髓细胞周期与空白对照组相比,G0/G1期细胞比率有非常显著增加(P<0.01),S期细胞比率有非常显著降低(P<0.01),G2/M期细胞比率有非常显著降低(P<0.01)。结论槟榔碱对小鼠骨髓细胞的DNA有一定的损伤作用,具有一定的遗传毒性。     

山豆根对Eca—109细胞株细胞周期的作用

应用流式细胞术（FCM）和Feulgen-DNA法显示分裂指数，分析不同浓度山豆根对Eca-109细胞的作用。流式细胞光度术分析结果表明，实验组细胞DNA指数（DI＝2）显著低于对照组（DI＝2．5），两者相比差异均有极其显著性意义（P＜0．01）。细胞DNA组方图G0／G1期细胞呈增高趋势，S期细胞均减少，G2M期细胞均增高，与对照组比差异均有显著性（P＜0．01，P＜0．05）。Feulgen-DNA染色显示细胞分裂指数与小剂量药物作用时间呈负相关，大剂量药物作用下分裂指数明显下降。这说明山豆根对Eca-109细胞DNA合成有显著的抑制作用。     

山豆根对Eca-109细胞株细胞周期的作用

应用流式细胞术(FCM)和Feulgen-DNA法显示分裂指数,分析不同浓度山豆根对Eca-109细胞的作用。流式细胞光度术分析结果表明,实验组细胞DNA指数(DI=2)显著低于对照组(DI=2.5),两者相比差异均有极其显著性意义(P<0.01)。细胞DNA组方图G_0/G_1期细胞呈增高趋势,S期细胞均减少,G_2M期细胞均增高,与对照组比差异均有显著性(P<0.01,P<0.05)。Feulgen-DNA染色显示细胞分裂指数与小剂量药物作用时间呈负相关,大剂量药物作用下分裂指数明显下降。这说明山豆根对Eca-109细胞DNA合成有显著的抑制作用。     

涤痰化瘀药对高血压大鼠及左室心肌细胞周期及心室重构的影响

目的 研究涤痰化瘀药对高血压模型大鼠心肌细胞周期及左室重构的影响.方法 设正常对照组(n=8)、假手术组(n=8)、模型组(n=10)和中药高剂量组(n=11)、低剂量组(n=11),采用二肾二夹法建立高血压大鼠模型,用大鼠血压计测尾动脉收缩压,模型成功后用药60d,测大鼠左室质量(LVM)、左室质量指数(LVI),流式细胞仪测定心肌细胞周期.结果 模型组血压和LVI显著高于正常对照组和假手术组(p<0.05,P<0.01),经涤痰化瘀药治疗后,中药低剂量组和高剂量组的血压和LVM有明显下降趋势,LVI与模型组比较有显著差异(P<0.05).模型组G0/G1期细胞显著减少,S期细胞显著增多;中药低剂量组和高剂量组G0/G1期细胞显著高于模型组(P<0.05),S期细胞显著低于模型组(P<0.05),与正常组和假手术组无显著差异(P>0.05),中药低剂量组与高剂量组之间无显著差异(P>0.05).各组G2/M期细胞无显著差异(P>0.05).结论 涤痰化瘀药可逆转高血压左室重构,使高血压左室心肌细胞停滞于G0/G1周期相,阻止细胞进入S期.其逆转高血压大鼠左室肥厚(LVH)及改善高血压预后的作用与负调控心肌细胞周期、抑制细胞分裂和增殖有关.     

Hec1基因表达沉默对胃癌细胞凋亡及分裂周期的影响

目的 研究癌症高表达(Hec1)基因表达沉默对胃癌细胞AGS分裂周期及细胞凋亡的影响.方法 应用siRNA使Hec1基因表达下调,通过实时定量PCR检测Hec1 mRNA表达抑制率;流式细胞仪检测细胞周期变化,经AnnexinV/PI双染色检测细胞凋亡率.结果 胃癌细胞AGS转染Hec1 siRNA 48 h后,Hec1基因表达抑制率达到90%;流式细胞仪检测发现,细胞G2/M期比例显著高于各对照组(P＜0.05),细胞分裂被阻滞,出现明显凋亡;形态学检测发现,Hec1 siRNA 转染48 h后处于分裂中期细胞高于各对照组,转染72 h后细胞呈明显凋亡形态学改变.AnnexinV/PI双染色法显示Hec1基因沉默后细胞凋亡率高于对照(P＜0.05).结论 抑制Hec1基因表达,可以明显阻滞细胞分裂并停留在有丝分裂中期,同时诱导细胞凋亡.     

维生素C与维生素K3联合作用于人膀胱癌T24细胞系的研究

目的 探讨维生素C与维生素K3联合用药能否诱导人膀胱癌细胞株T24发生凋亡及机制.方法 (1)用噻唑蓝(MTT)法筛选出维生素C作用于T24细胞72h后的最佳作用浓度.(2)用该最佳浓度下的VC联合不同浓度的VK3(1,2.5,5,10μM),筛选出作用72h后的最佳联合用药浓度.(3)分组并培养各组细胞:空白对照组,最佳浓度的维生素C作用组,最佳浓度的联合用药组.(4)用碘化丙啶(PI)流式细胞术观察上述三组的细胞凋亡情况,通过流式软件FACS分析细胞周期变化.结果 (1)以MTT法筛选出单用维生素C作用72h后的最佳药物浓度为1000μM,(2)以MTT法筛选出浓度为该浓度维生素C与不同浓度的VK3联用时,VK3的最佳药物浓度为10μM.(3)流式细胞仪检测各组细胞凋亡率结果 表明:10μMVK3+1000μMVC联用组与1000μMVC组相比,可显著提高细胞凋亡率(p＜0.05).(4)流式细胞仪检测各组细胞周期示:VC+K3可诱导细胞凋亡的作用集中于S期(P＜0.05).结论 维生素K3与维生素C联合用药可增强诱导人膀胱癌T24细胞凋亡的作用,其机制可能与维生素C阻滞T24细胞周期于S期有关.     

乳香提取物诱导Jurkat细胞凋亡的实验研究

目的 :检测不同浓度、不同时间作用下乳香提取物 (BCBE)对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞的促凋亡作用。方法 :用琼脂糖凝胶电泳技术、透射电子显微镜 (TEM)和流式细胞仪 (FCM)分别检测Jurkat细胞的DNA梯状带 ,形态学改变及凋亡峰与药物作用的细胞周期。结果 :在一定作用时间和剂量下BCBE能诱导Jurkat细胞凋亡 ,电泳出现典型的限制性降解片段梯带 ;TEM发现胞浆浓缩 ,并有大量空泡染色质聚集 ,有凋亡小体形成 ;FCM发现sub G1 凋亡峰 ,并有时间依赖性 ,G1 期细胞增多 ,S期细胞减少。结论 :BCBE能诱导Jurkat细胞凋亡 ,其作用在一定范围内呈现药物浓度与时间的依赖性