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凝胶色谱法半制备级纯化单克隆抗体 总被引:1,自引:0,他引:1
作者采用SePllacylS-200凝胶色谱柱,在快速蛋白液相色谱系统(FPLC)建立了肝癌相关抗原单克隆抗体半制各级纯化方法。该法是将McAb腹水经40%饱和硫酸铵盐析粗分离后,再用凝胶色谱纯化,一次上样量相当于5~10ml腹水,可得纯化McAb30~60mg,得率为6~6.5mg/ml腹水,回收率为63%,一次色谱纯化周期2h,整个分离纬化可在3h内完成。经SDS—PAGE和DEAE离子交换色谱法检测McAb纯度大于80%,ABC染色法测定McAb活性为,1:40000(1.56×10-10mol/L),是一般实验室纯化IgG类McAb的实用方法。 相似文献
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4.
尿素-SDS-PAGE快速测定多肽的相对分子质量 总被引:4,自引:1,他引:3
随着电泳技术的不断改进和完善,该技术已成为现代分子生物学实验不可缺少的基本实验技术之一。然而进行小分子多肽的电泳分析时,由于其相对分子质量(Mr)小,易受电泳条件(电泳缓冲系统、凝胶浓度、电泳时间、染色和脱色等)的影响,极易引起条带扩散、不易着色,使分辨率降低,因而直接影响多肽Mr的测定。现有多肽Mr的电泳测定法[1,2]操作复杂,且结果也不理想。因此,我们经反复实验,建立了对Mr为2 500-17 000多肽的尿素-SDS-PAGE快速测定法。1材料和方法1.1材料 ECP-3000电泳仪为北京… 相似文献
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测定血清中酪氨酸(Tyrosinc,Tyr)和苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe)的含量,对先天性氨基酸代谢缺陷和肝性脑病等疾病的诊断、治疗及研究有一定临床意义。目前国内用氨基酸分析仪测定 相似文献
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目的 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道 ,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原 A (Cag A)建立检测血清中抗 Cag A抗体的方法 ,以探讨本地区 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性 .方法 构建表达幽门螺杆菌 Cag A抗原的表达载体 ,工程菌经 IPTG诱导 ,表达的 Cag A包含体经 Ni柱纯化 ,变性、复性、透析并经活性鉴定后 ,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被 EL ISA板 ,建立检测正常人及胃癌患者血清抗 Cag A抗体的 DIGFA(斑点金免疫渗滤试验 ,简称滴金法 )和 EL ISA法 .结果 重组克隆 p RSETcag A的工程菌可表达 Mr36 0 0 0的目的蛋白 ,表达形式为包含体 ;Cag A包含体经纯化后 SDS- PAGE显示纯度达 98%以上 ,活性经 EL ISA证实 ;正常人 6 4例及胃癌患者血清 5 0例中 ,cag A+ Hp的感染率分别为 2 9.7%和6 2 .0 % ,胃癌患者 cag A+ Hp的感染率明显高于正常人 (P<0 .0 1) .结论 我们建立的检测血清抗 Cag A抗体的 DIGFA和EL ISA均具有良好的可重复性 ;胃癌患者 cag A+ Hp的感染比例明显高于正常人 ,Cag A阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关 ,Cag A可作为制备防治 cag A+ Hp感染的疫苗的后备抗原 . Cag A可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原 ,检测患者血清幽门螺杆菌 Cag A抗体 ,有可能为胃癌的发 相似文献
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液相色谱二步法纯化人中性粒细胞防御素 总被引:3,自引:1,他引:2
目的:建立人中性粒细胞(PMN)防御素(HNP)的制备级纯化方法,以便更深入研究防御素的生物学活性。方法:采用Superdex30凝胶色谱法对PMN提取物进行分离,再用C18反相液相色谱法进一步纯化,得到HNP纯品并对其进行鉴定。结果:纯化的HNP Mr为3400,纯度为91.6%,具有抗微生物活性。结论:应用两步色谱法纯化HNP,是从人的PMN中纯化HNP的较为理想的方法。 相似文献
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