山豆根对Eca—109细胞株细胞周期的作用

应用流式细胞术（FCM）和Feulgen-DNA法显示分裂指数，分析不同浓度山豆根对Eca-109细胞的作用。流式细胞光度术分析结果表明，实验组细胞DNA指数（DI＝2）显著低于对照组（DI＝2．5），两者相比差异均有极其显著性意义（P＜0．01）。细胞DNA组方图G0／G1期细胞呈增高趋势，S期细胞均减少，G2M期细胞均增高，与对照组比差异均有显著性（P＜0．01，P＜0．05）。Feulgen-DNA染色显示细胞分裂指数与小剂量药物作用时间呈负相关，大剂量药物作用下分裂指数明显下降。这说明山豆根对Eca-109细胞DNA合成有显著的抑制作用。     

不同浓度山豆根对Eca-109细胞株生长的抑制和杀伤作用

目的：探讨山豆根对体培养人食管癌（Eca-109）细胞株的作用。方法：将Eca-109细胞株分为对照且和实验组两组，测定不同浓度山豆根对两组的杀伤效应，酶活性测定及Fulgen-DNA法显示分裂指数。结果：100mg/ml,200mg/ml浓度对细胞的杀伤能力随药物作用时间延长而增中，50mg/ml浓度维持在3％左右。100mg/ml,200mg/ml实验在加药第3天对细胞分裂指数抑制率接近或达到100％，50mg/ml实验作用呈负相关，山豆根使谷氨酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性下降，直至阴性反应，结论：山豆根对Eca-109细胞株生长有抑制和杀伤作用，对脱氢酶有影响作用。     

茶多酚并紫杉醇对食管癌Eca-109细胞增殖与凋亡影响

目的探讨茶多酚(TP)、紫杉醇(Paclitaxel)抑制食管癌Eca-109细胞生长、诱导细胞凋亡的作用及其可能机制。方法取对数生长期的Eca-109细胞,分为TP组、Paclitaxel组、两药联合组,分别加入100μL含不同浓度TP(125、250、500、1 000mg/L)、Paclitaxel(0.2、1.0、5.0、25.0mg/L)及TP+Paclitaxe(500mg/L TP+1mg/L Paclitaxel)的培养液,并设立阴性对照组、空白对照组,置于培养箱中避光培养12、24、48h。应用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率的变化,显微镜观察细胞形态的变化,RT-PCR方法检测细胞凋亡相关调节基因Caspase-3的表达。结果不同浓度、不同作用时间TP组、Paclitaxel组细胞增殖抑制率差异有显著性(F=134.46～423.75,P<0.05)。两药联合组细胞的抑制率明显高于TP组、Paclitaxel组(q=8.63～26.96,P<0.05)。TP组、Paclitaxel组及两药联合组诱导24h的Eca-109细胞G1期细胞比例均高于对照组(F=54.52,q=5.39～17.53,P<0.05);与TP组、Paclitaxel组比较,两药联合组诱导Eca-109细胞凋亡率增高(F=446.82,q=16.27、31.64,P<0.05)。培养12h后,两药联合组Eca-109细胞Caspase-3mRNA表达较TP组、Pa-clitaxel组分别增高17.22%、11.63%(F=108.33,q=30.37、20.52,P<0.05)。结论 TP、Paclitaxel能抑制Eca-109细胞生长、诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞在G1期的比例增高;两药联合其作用更明显,其机制可能与Caspase-3mRNA表达增高有关。     

PI3K抑制剂对食管癌Eca-109细胞株放射增敏作用及机制

目的:研究PI3K抑制剂对食管癌细胞株Eca-109放射增敏作用及机制.方法:以食管癌细胞株Eca-109为实验对象,MTT法观察PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;RT-PCR检测DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs mRNA表达;流式细胞技术检测细胞周期.结果:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时即可降低Eca-109细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.58.药物LY294002组DNA-PKcs mRNA表达受抑,但与对照组比较差异无统计学意义;照射组表达较对照组明显升高(P<0.05);药物LY294002+照射组的表达较照射组下降(P<0.05).药物LY294002组G2期细胞比例与对照组比较差异无统计学意义,照射组较对照组升高(P<0.01),药物LY294002+照射组G2期细胞比例较照射组下降(P<0.05).结论:PI3K抑制剂LY294002对Eca-109细胞有放射增敏作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞DNA双链断裂修复基因DNA-PKcs及减少G2期细胞...     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞周期相改变及药物影响

【目的】研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus SLE)外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells PBMCs)的细胞周期相改变和药物的影响,探讨其在SLE发病中的作用。【方法】用流式细胞分析技术,检测SLE患者(活动期和静止期)PBMCs的细胞时相构成比例,观察药物对其的影响,并和正常人进行比较;分析SLE患者细胞周期时相构成比例和血清抗dsDNA抗体的相关性.【结果】①基础状况下,SLE患者PBM-Cs的细胞周期时相构成比例(％)和正常人之间无明显差别(均P>0.05)。②植物凝集素(phytohemagglutinin,PHA)使活动期SLE患者PBMCs的G_0/G_1期比例减低(P<0.01)和S期比例增高(P<0.01)、缓解期SLE患者PBMCs S期比例增高(P<0.01)、正常人PBMCs各时相均无明显改变。③用地塞米松(dexamethasone,Dex)后,活动期SLE患者PBMCs各期时相比例无改变,缓解期SLE患者PBMCs G_0/G_1期比例增高(P<0.001)和S期比例减低(P<0.001),正常人PBMCs的G_0/G_1期比例增高(P<0.05)。④活动期SLE患者血清抗dsDNA抗体和G_0/G_1期比例呈负相关(r=-0.787,P=0.001)、和S期比例呈正相关(r=0.855,P=0.0001)。【结论】SLE患者PBMCs具有较强的潜在增殖活性,其时相构成比例和血清抗dsDNA抗体相关,可能和其发病及病程有关。     

人骨巨细胞瘤细胞DNA含量的研究

将体外培养的人骨巨细胞瘤第四代和第五代瘤细胞,进行~3H—TdR放射自显影术和Feulgen反应,先计算出银粒标记细胞(S,G_2)的增殖比率,再用显微分光光度法测定未被标记的细胞(G_0和G_1期)的DNA含量。结果,第四代单核瘤细胞DNA含量为亚四倍体值((?)=87.36,DI=1.83),第五代单核瘤细胞DNA含量为超四倍体值((?)=118.13,DI=2.47).两代瘤细胞DNA含量经统计学处理,有显著差异(P<0.01),证实了骨巨细胞瘤细胞长期传代培养可以恶化。     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞的抗增殖研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌细胞Eca-109和TE-1的增殖及其细胞周期的影响.方法采用体外细胞培养,通过MTT比色分析法观察不同浓度COPADG对Eca-109及TE-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;透射电镜下观察细胞的形态学变化.结果COPADG能有效的抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,且存在时间及剂量依赖性(P＜0.01);不同浓度的COPADG作用48 h之后,流式细胞仪检测均显示G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),而S期细胞比例减少(P＜0.01),在Eca-109细胞中出现了典型的凋亡峰;电镜下可观察到凋亡的典型形态学变化.结论COPADG能有效抑制人食管癌细胞Eca-109及TE-1的增殖,改变其细胞周期分布,导致明显的G0/G1期阻滞,并在一定浓度下诱导肿瘤细胞凋亡.     

NS-398联合顺铂对Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察环氧化物酶-2选择性抑制剂NS-398联合顺铂对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用细胞增殖抑制实验(CCK-8法)检测不同-质量浓度的顺铂(1.25、2.50、5.00和10.00 ms/L)单用及联合小剂量(1.00和10.00 μmol/L)NS-398作用于人食管癌Eca-109细胞24 h后细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及早期凋亡情况.结果:顺铂、N-398单用及2者联合对Eca-109细胞均有抑制增殖作用(F顺铂=1391.300,FNS-398=642.898,F交互=15.254,P均<0.001),可阻止细胞周期的进程(G0/G1期:F顺铂=1308.300,FNS-398=133.138,F交互=26.692,P均<0.001;S期:F顺铂=1470.300,FNS-398=149.638,F交互=30.000,P均<0.001),诱导细胞凋亡(F顺铂=39.493,P<0.001,FNS-398=0.000,P=0.987;F交互=4.325,P=0.006).顺铂联合NS-398对Eca-109细胞的作用明显强于顺铂单用,且随着NS-398剂量的增高而增高(P<0.01).结论:NS-398能够增强顺铂对食管癌细胞的生长抑制和诱导凋亡效应.     

二甲基亚砜对人类食管癌细胞株作用机理的研究

探讨了2%二甲基亚砜(DMSO)对Eca-109细胞株作用的机理。实验结果表明:二甲基亚砜抑制了Eca-109细胞的增殖,使Eca-109细胞~3H-TdR掺入减少,对照组和实验组~3H-TdR掺入数分别为5250.3±87.2、2990.3±17.27,导致Eca-109细胞集落形成能力下降,对照组和实验组集落数分别为34.56±12.13、11.88±4.80。流式细胞术显示:对照组Eca-109细胞G0/G1,S和G2+M各期的百分比为:42.67±7.57,55.00±7.21,2.30±1.15;实验组细胞各期的百分比为71.00±9.85,20.67±15.04,8.00±5.29;(P<0.01)。实验结果提示:二甲基亚观能阻止Eca-109细胞从G0/G1期进入S期,从而可抑制细胞的生长。     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞周期及凋亡的影响

目的观察8-Br-cAMP和槲皮素(quercetin)对Eca-109细胞周期及凋亡的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.3组在同等条件下继续培养48 h.采用流式细胞仪检测细胞的周期,采用TUNEL法检测细胞凋亡百分率,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA降解情况.结果2实验组细胞中G2-M期细胞比例较对照组显著上升(P<0.01).细胞凋亡百分率2实验组显著高于对照组(P<0.01);Br组和Q组相比,差异无统计学意义(P>0.05).DNA琼脂糖凝胶电泳中Br组和Q组皆呈DNA"梯样型"带,对照组未呈现DNA降解.结论8-Br-cAMP和槲皮素皆可阻滞Eca-109细胞于G2-M期,并进一步诱导Eca-109细胞凋亡.     

塞来昔布对人食管癌细胞株Eca-109 增殖和凋亡的影响

目的 体外研究选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人食管癌细胞株Fca-109增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪(FCM)、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察细胞形态等技术,研究塞来昔布对Eca-109细胞增殖的抑制和促进凋亡的影响.结果 MTT比色法显示塞来昔布对人食管癌Eca-109细胞有较强的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;FCM显示有凋亡峰出现,凋亡率在(15.89±0.87)%～(73.57±1.63)%;塞来昔布使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定效应关系;荧光显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学特征细胞体积缩小、细胞核固缩,凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.结论 塞来昔布体外能够显著抑制Eca-109增殖,诱导凋亡,可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关.     

Coronin3促进食管癌Eca-109细胞的迁移和侵袭

目的 探讨Coronin3基因促进食管癌Eca-109细胞株迁移和侵袭的可能机制。方法 用慢病毒稳转的方式构建过表达和敲减Coronin3的Eca-109食管癌细胞株,通过划痕和Transwell实验分别检测Coronin3基因对Eca-109食管癌细胞的迁移和侵袭的影响。Western blot法实验检测Coronin3对CDH11及E-cadherin、N-cadherin等EMT标志分子蛋白表达的影响。实时荧光定量PCR实验检测Coronin3对CDH11及E-cadherin、N-cadherin等EMT标志分子mRNA表达的影响。结果 笔者成功构建了Coronin3过表达和敲减的Eca-109细胞株。Coronin3过表达能够促进细胞迁移和侵袭。与之相反,Coronin3敲减能够显著抑制细胞迁移和侵袭。Coronin3过表达能够提高CDH11的蛋白和mRNA水平,提高α-SMA、N-cadherin的蛋白和mRNA水平,降低E-cadherin的蛋白和mRNA水平。与之相反,Coronin3敲减能显著降低CDH11的蛋白和mRNA水平,降低α-SMA、N-cadherin的蛋白和mRNA水平,提高E-cadherin的蛋白和mRNA水平。结论 Coronin3可以通过促进上皮-间质转换（EMT）来调控食管癌的转移和侵袭,为治疗食管癌提供了潜在的新靶标。     

大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109生长的抑制作用

目的研究大蒜素对人食管癌细胞株Eca-109增殖抑制作用。方法传代培养人食管癌细胞，MTT法及流式细胞仪检测测定Eca-109细胞增殖抑制率。结果大蒜素对细胞的生长均有明显的抑制作用，且呈浓度、时间依赖性。结论一定浓度的大蒜素能抑制食管癌细胞的生长。     

曲古霉素A和枸杞多糖联合应用对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响

目的 探讨曲古霉素A(TSA)和枸杞多糖(LBP)联合应用对食管癌Eca- 109细胞凋亡的影响.方法 分别用二甲基亚砜DMSO,对照组）、1.0μmol/L TSA、1.0μmol/L TSA+ 10 mg/L枸杞多糖处理Eca-109细胞48h,用Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测3组细胞的凋...     

双歧杆菌培养上清对人食管癌109细胞的抑制作用

目的：探讨双歧杆菌培养上清对人食管瘤109细胞（Eca－109）的影响。方法：采用体外细胞培养、镜检及细胞排染试验,观察双歧杆菌培养上清对Eca－109细胞的形态学及细胞活度变化。结果：高浓度双歧杆菌培养上清可抑制Eca－109细胞贴壁生长,并使其活度明显下降,与生理盐水组相比有显著差异（P＜0．05）。结论：双歧杆菌培养上清对人食管癌109细胞有抑制生长作用。     

Slug对食管癌细胞Eca-109侵袭能力的影响及其分子机制探讨

目的研究Slug与食管癌侵袭转移间的关系并探讨其分子机制。方法构建正义全长Slug真核表达载体pcDNA3.1-Slug并转染食管癌细胞系Eca-109;光镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫细胞化学、Westernblot分别检测细胞中上皮标志物E-钙粘素(E-cadherin)与间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达变化,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果转染pcDNA3.1-Slug真核表达载体后,Eca-109细胞形态变得细长;免疫细胞化学和Western blot结果显示E-cadherin表达明显下调,Vimentin表达则上调;Transwell小室显示转染pcDNA3.1-Slug载体的Eca-109细胞穿透matrigel胶的细胞数明显增多。结论转录因子Slug能促进食管癌上皮细胞间质化转变(epithelial-mesenchymaltransition,EMT),并提高其侵袭转移能力。     

阿司匹林对人食管癌细胞株Eca-109生长及凋亡的影响

目的 通过体外实验观察阿司匹林（ASA）是否有诱导人食管癌Eca-109细胞发生凋亡及增殖抑制的作用.方法 通过噻唑蓝（MTT）实验测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪（FCM）检测凋亡率;通过电镜、Hoechst 33258染色从形态上观察细胞凋亡.结果 （1）阿司匹林能抑制人食管癌Eca-109细胞的生长,并在一定剂量和时间范围内呈现剂量、时间依赖关系.（2）流式细胞仪（FCM）观察细胞的凋亡率随阿司匹林浓度的增大而增加.（3）电镜下凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩致密,并沿核膜边集.（4）Hoechst 33258染色后可见典型的细胞凋亡形态学变化.结论 阿司匹林对人食管癌Eca-109细胞具有增殖抑制作用,能诱导细胞凋亡,凋亡率随阿司匹林浓度的增大而增加.     

沉默id1基因表达对食道癌细胞Eca-109生物学行为的影响

目的 探讨靶向沉默分化抑制因子1基因(id1)的短发夹RNA(shRNA)表达质粒载体对食道癌细胞生物学行为的影响.方法 设计针对id1基因的shRNA序列,合成序列并克隆入pGFU6/neo质粒中.重组质粒转染食道癌细胞,RT-PCR检测id1基因mRNA的表达,Western blot检测Id1、p16及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达.台盼蓝染色、克隆形成实验检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞增殖以及各周期分布.结果 重组质粒经酶切鉴定和测序,证实表达干扰质粒构建成功.转染重组质粒的食道癌细胞id1 mRNA和蛋白的表达明显下降 (P<0.05),食道癌细胞增殖受到抑制,G0/G1期细胞比例增加,而S期的细胞比例明显下降(P<0.05).结论 构建的id1 shRNA表达质粒能有效下调id1基因的表达和抑制食道癌细胞增殖.     

RNA干扰抑制人食管鳞癌细胞PLK1基因的表达

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术,研究Polo样激酶l（PLK1）基因特异的siRNA对人食管鳞癌细胞Eca-109 PLKl基因表达的影响.方法将PLKI基因特异性siRNA转染入人食管鳞癌细胞Eta-109,采用RT、-PCR和Western-blot技术检测siRNA处理前后Eca-109细胞PLK1基因表达变化,并构建PI.K1基因特异性siRNA质粒表达载体.结果转染R后T-PCR和Western-blot结果均显示Eca-109细胞PLK1基因的表达明显下降,PLKI基因特异性siRNA质粒表达载体构建成功.结论 PLKl特异性siRNA对Eca-109细胞PLK1基因的表达有抑制作用.     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc，wtp53，iNOS基因和EGFR表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc、wtp53、iNOS基因和EGFR表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分为2组①实验组加8-Br-cAMP至终浓度为2×10-5mol/L,培养24 h;②对照组不加8-Br-cAMP,培养24 h.对2组的细胞涂片和硝酸纤维素膜(NCM)标本进行c-myc、wtp53、iNOS基因和EGFR表达检测,并对扫描数值进行统计学处理.结果原位杂交及免疫组化反应信号皆定位于Eca-109细胞的胞质,扫描数值显示①c-myc mRNA实验组为3.38±0.99,对照组为5.18±1.39;②wtp53 mRNA实验组为2.74±0.83,对照组为0.38±0.27;③iNOSmRNA实验组为4.52±0.74,对照组为2.63±0.13;④EGFR-IR实验组为2.37±1.05,对照组为4.38±0.48.以上实验组与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05).结论c-myc、wtp53和NO均可参与8-Br-cAMP诱导癌细胞的分化效应.