IL-2和IL-12联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究

目的探讨瘤内注射共表达mIL-12和hIL-2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用.方法构建pDC511hIL2-mIL12、pDC511mIL-12、pDC511hIL-2真核表达质粒载体;ELISA方法检测各组质粒在真核细胞的表达;小鼠肝癌H22皮下移植瘤瘤内注射各组质粒DNA后,检测不同时间血清中细胞因子浓度;观察各组小鼠存活时间,肿瘤大小变化;并检测各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)活性.对各治疗组在质粒DNA注射后一月进行瘤体组织学观察.结果酶切鉴定各组质粒载体,均示构建成功,并能在真核细胞内高效表达相应细胞因子.瘤内注射各组质粒载体后,pDChIL2-mIL12组在不同时间表达的hIL2和mIL12分别与pDC511hIL2 组(F=71.11,P<0.01)、pDC511mIL12组 (F=30.70,P<0.05)比较有显著性差异.mIL-12基因和hIL-2基因联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于各单独治疗组和对照组(P<0.05),并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强.双基因联合治疗组,病灶内肿瘤细胞坏死明显,炎性细胞广泛浸润.结论 IL-12、IL-2基因治疗可抑制小鼠肝癌H22皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答,两者联合运用可产生协同效应.为进一步运用高效基因导入技术进行肝癌基因治疗研究提供初步的实验依据.     

pcDNA3.1(+)/ATP7B对TX小鼠成纤维细胞铜代谢的影响

[目的]研究Wilson病野生型基因ATP7B cDNA真核表达载体pcDNA3.1( )/ATP7B对TX小鼠成纤维细胞铜代谢的影响.[方法]构建人Wilson病野生型基因ATP7B cDNA的真核表达载体pcDNA3.1( )/ATP7B.随机选取TX小鼠20只构建TX小鼠的成纤维细胞模型,平行分成3组,一组未加质粒,另两组分别加入等量pcDNA3.1( )和pcDNA3.1( )/ATP7B,观察对细胞模型铜代谢的影响.并进行免疫组化实验以观察表达是否增强.[结果]实验前未加质粒组,加入pcDNA3.1( )组与加入pcDNA3.1( )/ATP7B组细胞内铜含量分别为(78±20),(77±17),(75±13)ng/mg;实验后分别为(76±20),(74±13),(40±10)ng/mg.与未加质粒组和加入pcDNA3.1( )相比,加入pcDNA3.1( )/ATP7B组的细胞内铜含量显著下降(P皆＜0.01),其细胞内ATP7B蛋白的表达明显增强.[结论]Wilson病真核表达载体pcDNA3.1( )/ATP7B在TX小鼠成纤维细胞水平上确有排铜作用.     

Serrate1基因转染对小鼠树突状细胞生物学特性的影响

目的探讨Serrate1基因转染对小鼠树突状细胞生物学特性的影响.方法将Serrate1基因体外转染小鼠DCs,经G418筛选后,Western blot检测DCs Serrate1的表达,流式细胞仪检测转染后DCs表面共刺激分子的表达,混合淋巴细胞反应观察DCs对T淋巴细胞增殖的影响.结果Serrate1基因转染的树突状细胞Serrate1的表达较未转染组明显增高,转染Serrate1基因的DCs表面CD80、CD86等共刺激分子的表达与对照组比较无明显改变(P＞0.05);在混合淋巴细胞反应中,转染DCs对T细胞的增殖有抑制作用,而空载体pcDNA 3.1( )对照组与未转染组的树突状细胞具有强烈的激发T细胞增殖的能力.结论Serrate1基因转染能在不影响DCs表面共刺激分子表达的情况下显著抑制T细胞活化.     

表达EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型的建立

目的：建立表达EB病毒LMP2A小鼠移植瘤模型，为树突状细胞治疗EB病毒相关肿瘤的动物试验奠定基础。方法：将EB病毒LMP2A基因克隆至逆转录质粒pLXSN中，重组质粒用脂质体Clonfectin转入BALB／c小鼠来源的骨髓瘤细胞SP2／0，经G418筛选获得阳性克隆，亚克隆得到EB病毒LMP2A表达株并经PCR、RT—PCR、IFA、流式细胞仪鉴定。腹股沟皮下接种该细胞入BALB／c小鼠得到移植瘤模型，两周后切除肿瘤组织并作苏木精-伊红(H—E)染色切片。结果：构建出含EB病毒LMP2A基因的重组逆转录质粒，获得表达EB病毒LMP2A的SP2／0细胞，该细胞在BALB／c小鼠可生长成肿块。结论：成功地构建表达EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型。     

Beta-防御素抗裸鼠宫颈癌移植瘤生长作用及其机制研究

目的采用稳定转染pcDNA3.1(+)/mBD2的细胞株复制裸鼠移植瘤模型,通过对荷瘤小鼠肿瘤生长、瘤组织凋亡等指标的观察,揭示mBD2在动物体内抗肿瘤作用机制。方法将稳定转染PcDNA3.1(+)/mBD2、PcDNA3.1(+)的细胞株SiHa/M、SiHa/K及正常SiHa细胞于裸鼠左前腋下皮下接种,复制裸鼠移植瘤模型。观察肿瘤生长状况、荷瘤小鼠存活时间及肿瘤组织病理改变,采用免疫组织化学方法测定肿瘤组织中目的蛋白的表达,并用TUNEL法检测肿瘤组织的细胞凋亡。结果成功复制了裸鼠宫颈癌移植瘤模型。肿瘤生长曲线显示,SiHa/M组裸鼠肿瘤生长慢于SiHa/K组和SiHa组(P<0.05);SiHa/M肿瘤直径小于SiHa组和SiHa/K组,差异均有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组织HE染色结果显示,SiHa/M细胞生长不活跃,局部有出血坏死,病理性核分裂相少;SiHa/K组与SiHa组肿瘤细胞生长活跃,病理性核分裂相多见,瘤细胞侵犯周围脂肪及肌肉组织。免疫组织化学染色结果显示SiHa/M组有mBD2表达;由TUNEL染色结果可以看出,SiHa/M组细胞凋亡较多,而SiHa/K及SiHa组细胞凋亡少,两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mBD2能够抑制移植瘤的生长,其机制可能与mBD2诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

特异性CTL治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤

目的探讨基于树突状细胞（DC）的CTL表位肽疫苗应用于治疗肝癌实体瘤的可能性。方法观察经负载甲胎蛋白（AFP）218-226细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位肽激活的CTL细胞抑制HepG2肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的情况,并与淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK）抑瘤率进行比较。结果经负载AFP218-226CTL表位肽的健康志愿者DC细胞激活的CTL细胞可以明显抑制HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,平均抑瘤率达86.7%,远高于LAK细胞治疗组的抑瘤率52.6%。结论基于DC的HLA-A2限制性表位肽疫苗,对表达AFP的HLA-A2＋肝细胞癌（HCC）有潜在的治疗作用,具有一定的临床应用前景。     

IL-2/IFN-γ融合蛋白基因质粒联合HBV DNA疫苗治疗HBV转基因小鼠效果评价

目的 评价融合蛋白基因质粒(pFP)联合在体电脉冲(EP)介导的HBV DNA疫苗(pS2.S)免疫HBV转基因(Tg)小鼠的治疗效果.方法 HBV Tg小鼠随机分成3组,每组5只,分别为pS2.S pFP、pS2.S PcDNA3.1免疫治疗和PcDNA3.1对照组.联合免疫质粒总剂量40 μg/只,按1:1比例混合接种.初次免疫后第4、8周分别进行第一、二次增强免疫,免疫前后分别检测血清学、组织学及HBV特异性免疫应答.结果 HBVDNA血清定量检测结果,pS2.S pFP组免疫第8周(13 317±2 539)拷贝/ml、第12周(6 462±3 359)拷贝/ml时分别较免疫前(36 159±7 769)拷贝/ml明显减低,差异具有统计学意义(P<0.01);pS2.S pcDNA3.1组第4周(20 618±9 523)拷贝/ml及第8周(23 818±5 319)拷贝/ml时均较其免疫前水平(36 090±4 421)拷贝/ml明显降低(P<0.01),但不能持续到12周(27 691±13 071)拷贝/ml,并明显高于此时pS2.S pFP组水平,差异有统计学意义(P<0.01);观察终点(12周)pS2.S pFP组Tg小鼠个体血清HBV DNA及肝组织HBsAg表达水平降低的同时,伴随其血清ALT水平及HBsAg特异性IFN-γ分泌细胞数目的 升高.结论 Th1类细胞因子IL-2/IFN-γ融合蛋白基因表达质粒能够增强HBV DNA疫苗抑制Tg鼠HBV DNA复制和表达的治疗作用.     

黑色素瘤抗原-1诱导特异性抗肝癌免疫应答

目的:探讨黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)对特异性抗肝癌免疫应答反应的影响。方法:分别用转染pcD-NA3.1-MAGE-1(重组子)、pcDNA3.1(空质粒)以及未行转染的人肝癌细胞SMMC-7721冻融抗原致敏树突状细胞(DC),诱导T淋巴细胞增殖分化为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。乳酸脱氢酶释放法检测CTL对SMMC-7721细胞的杀伤活性。48只C57BL小鼠随机分为重组子组、空质粒组和PBS组,每组16只。用pcDNA3.1-MAGE-1预先免疫重组子组小鼠,1次/10d,第3次免疫后第5天ELISA法检测各组8只小鼠脾细胞培养液中IFN-γ和IL-2的含量,第6天各组8只小鼠接种鼠源性肝癌细胞H22,观察其生存时间。结果:未转染、空质粒和重组子组诱导的CTL对靶细胞的杀伤率以及各组小鼠股四头肌MAGE-1mRNA表达的比较差异有统计学意义(F=139.601和538.650,P﹤0.001),重组子组高于未转染和空质粒组。PBS组和空质粒组小鼠脾细胞培养液中IFN-γ和IL-2的含量为0,重组子组小鼠脾细胞培养液中IFN-γ含量为(372.33±10.08)ng/L,IL-2含量为(108.67±12.81)ng/L。3组小鼠荷瘤生存时间比较差异有统计学意义(F=31.837,P<0.001),重组子组小鼠生存时间明显延长。结论:MAGE-1可诱导特异性抗肿瘤免疫应答,从而显著延长荷瘤小鼠的生存时间。     

小鼠骨髓DCs的高效扩增及其表型特征

目的:建立体外大量扩增骨髓树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells,Bm-DCs)的方法,并分析其免疫表型特征。方法:以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)从C57BL/6小鼠骨髓细胞中诱导产生骨髓未成熟树突状细胞(immol/Lature DCs,imDCs),6 d后以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)进一步刺激产生成熟树突状细胞(mature DCs,mDCs)。以流式细胞技术检测imDCs、mDCs的CD11c、MHCⅡ、CD86、B220的表达。同时检测imDCs、mDCs刺激近交系BALB/c小鼠CD4+T淋巴细胞增殖的功能。结果:(1)每只小鼠的双侧股骨可以得到(4.0～6.0)×106个DCs;(2)CD11c、MHCⅡ、CD86、B220的表达率在imDCs和mDCs分别为(71.67±1.53)%、(25.67±2.08)%、(7.67±1.53)%、(9.00±1.00)%;(81.67±1.53)%、(55.67±3.06)%、(45.33±2.08)%、(8.00±1.00)%,其中imDCs、mDCs的CD11c、MHCⅡ、CD86的表达差异具有统计学意义(P<0.01);两组DCs的B220均为低表达;(3)成熟DCs具有很强的刺激近交系小鼠T淋巴细胞增殖的能力。结论:联合应用GM-CSF、IL-4可从小鼠骨髓中诱导扩增大量DCs;诱导产生的DCs的免疫表型特征为CD11chiMHC-Ⅱ+B220-,总体与常规DCs(conventional DCs,cDCs)相似。     

健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响

目的研究健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响。方法将裸小鼠皮下移植瘤模型随机分为中药组及生理盐水组,比较第31天2组实验鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3的蛋白表达情况。结果中药组的抑瘤率为23.68%,P-Stat3蛋白表达相对定量值为(0.33±0.52),与生理盐水组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论健脾为基础的中药方可抑制人胃癌细胞MKN-45裸小鼠皮下移植瘤的生长,并能抑制P-Stat3的蛋白表达。     

BALB/c小鼠腹腔接种HBV表面S抗原疫苗引起的CTL反应

目的研究BALB/c小鼠免疫接种HBV表面S抗原疫苗(HBV small surface vaccine, S-HBsAg)能否引起特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应。方法分别给BALB/c小鼠腹腔内接种0~6 μg S-HBsAg,两周后加强一次,4周后分离小鼠脾细胞,体外用S-HBsAg特异性CTL表位多肽刺激;用特异性多肽、51Cr标记的P815细胞作为靶细胞;4 h51Cr释放实验检测CTL反应。结果分别接种0、0.65、1.25、2.5、5μg S-HBsAg的小鼠,其脾淋巴细胞CTL特异性释放率分别为31.21%±9.23%、42.36%±19.32%、91.21%±22.97%、69.25%±24.13%、51.49%±21.661%;只接受一次免疫接种的小鼠,其脾淋巴细胞CTL特异性释放率分别为27.34%±14.25%、32.27%±15.35%、56.28%±24.35%、44.34%±18.65%、40.76%±56%。结论BALB/c(H-2d)小鼠腹腔内接种S-HBsAg引起剂量依赖性特异性CTL反应,加强免疫能够提高CTL反应。     

Effects of Dendritic Cells Transfected with Full Length Wild Type P53 and Modified by Gastric Cancer Lysate on Immune Response

Dendriticcells (DCs)arethemostpotentanti gen presentingcellsandareactivelyusedincancerimmunotherapy .Thewild typep5 3,asanantigen ,caninducespecificcytotoxicTlymphocytes (CTLs)inthehostbody .Itisaneffectivemethodtoimmu nizebodywith p5 3in p5 3 overexpress…     

胆管癌肿瘤裂解物修饰和P53基因导入对树突状细胞免疫效应的影响

目的 :研究胆管癌裂解物对转染全长野生型P5 3的树突状细胞 (DC)免疫功能的影响。方法 :用腺病毒作为介质 ,将全长野生型P5 3转染入DC ,然后用胆管癌裂解物修饰已转染全长野生型P5 3的DC(LywtP5 3DC) ,检测这种DC表面分子B7 1、B7 2、MHC Ⅰ、MHC Ⅱ表达的高低 ,诱导特异的细胞毒性T淋巴细胞 (CTLs)的能力 ,对小鼠的免疫保护和对动物模型治疗作用。结果 :经流式细胞仪检测胆管癌裂解物刺激的野生型P5 3DC表面高表达B7 1(86 .70 %± 0 .0 7% )、B7 2 (18.77%± 0 .0 8% )、MHC Ⅰ (87.2 0 %± 0 .0 5 % )、MHC Ⅱ (5 6 .70 %± 0 .0 7% ) ,单纯DC低表达 ;LywtP5 3DC能够特异性地杀伤胆管癌细胞 ,杀伤率为 81%。LywtP5 3DC治疗组和其它组在肿瘤生长的直径大小之间有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,在LywtP5 3DC治疗组中 ,肿瘤生长明显减慢。结论 :全长野生型P5 3基因转染 +胆管癌裂解物联合修饰的DC能诱导细胞毒性T淋巴细胞的特异性 ,显著地提高DC的抗原提呈功能 ,体外能诱导高效而特异的抗胆管癌免疫效应。     

气道内注射负载卵白蛋白多肽的树突状细胞可诱导肺内炎症

目的探讨树突状细胞(DCs)作为免疫治疗载体气道内注射的可行性。方法取BALB/c小鼠骨髓单个核细胞,以重组小鼠粒-巨细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)+重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导培养DCs。经磁珠纯化后得到的DCs用卵白蛋白323-339氨基酸区(OVA323-339多肽)冲击24 h。DC-OVA组小鼠按每鼠2×106细胞数进行小鼠气道内接种。DC组小鼠以DCs直接进行气道内接种作为阴性对照。接种后次日起以1%OVA雾化,连续5 d。经典哮喘模型组小鼠采用经典OVA腹腔注射致敏及激发方法复制哮喘模型作为阳性对照。末次雾化后24 h处死小鼠,分析肺脏病理学表现、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞成分。结果 DC-OVA组小鼠肺内呈现小支气管及血管周围大量炎细胞浸润,杯状细胞增多,BALF中细胞数明显增多,血清中OVA-特异性IgE水平与经典复制哮喘模型组OVA-特异性IgE水平相似[(48.22±4.76)U/mL比(52.75±4.03)U/mL,P0.05]。采用该方法复制的模型与采用经典方法复制的哮喘模型表现相似。DC组肺组织无明显的炎症,血清中的OVA-特异性IgE水平低于检测的敏感度。结论体外抗原负载后的DCs气道内注射具有活力并能有效递呈抗原,DCs可能作为免疫治疗的载体。     

K-ras突变多肽负载树突状细胞诱导抗胰腺癌特异性免疫

目的 探讨K-ras(12-Val)突变多肽负载树突状细胞(DC),诱导胰腺癌特异性免疫的可行性.方法 采用未成熟Dc体外负载K-ras多肽(YKLVVVGAV)后诱导成熟,抗K-ras(12-Val)单抗检测突变抗原位点表达后与T淋巴细胞混合扩增特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),MTT法测定CTL对胰腺癌细胞和正常细胞的免疫杀伤活性.建市裸鼠胰腺癌移植瘤模型,分别予K-ras特异性CTL肿瘤瘤内及尾静脉注射,观察不同治疗途径对肿瘤生长的抑制效果.结果 负载K-ras(12-Val)多肽的DC成熟后表达突变抗原位点并有效地刺激自体[CD8+:(44.8±2.1)%]和同种异体T细胞活化;诱导的特异性CTL对胰腺癌细胞杀伤率按效靶比(10:1、20:1、50:1)分别为(21.2±1.9)%、(32.4±2.1)%、(45.7±5.3)%,杀伤效率均显著高于非特异性激活的T细胞治疗组(均P<0.05),对正常组织无损伤(均P>0.05).裸鼠K-ras特异性CTL治疗后8 d,瘤内治疗组肿瘤体积(68±13)mm3即明显低于对照组(87±14)mm3及IL-2非特异性治疗组(79±19)mm3(均P<0.05),K-ras特异性CTL治疗可以显著提高裸鼠的生存率(P<0.05).免疫组化染色证实K-ras特异性CTL具有体内迁移到肿瘤病灶的能力.结论 利用K-ras(12-Val)突变多肽体外负载树突状细胞,能诱导有效的抗胰腺癌特异性免疫反应.     

MAGE-3抗原肽脉冲树突状细胞对小鼠胃癌移植瘤的免疫防护作用

目的观察MAGE3抗原肽脉冲的树突状细胞(DC/MAGE3)作为肿瘤疫苗抑制小鼠胃癌移植瘤生长的作用。方法检测了MAGE3抗原肽诱导出的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠前胃癌细胞株MFC细胞的杀伤活性。在免疫保护实验中先用DC/MAGE3(1×106个细胞/只)于小鼠皮下注射免疫两次,然后接种MFC细胞(5×105个细胞/只);在免疫治疗实验中先接种MFC细胞(5×105个细胞/只),然后在皮下注射DC/MAGE3(1×106个细胞/只)两次,并以感冒病毒核蛋白抗原肽脉冲的DC(DC/Nup)及空白DC作为对照,观察小鼠肿瘤的生长情况及其存活期并进行统计学处理。结果(1)MAGE3抗原肽诱导出的CTL细胞对MFC细胞有较高的杀伤活性;(2)在免疫保护实验和免疫治疗实验中DC/MAGE3可以明显地延缓肿瘤的生长,延长小鼠的生存时间(P<0.05)。结论MAGE3抗原肽脉冲的DC可通过加强抗原递呈激活肿瘤特异性CTL而具有明显的抗肿瘤活性。     

小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影响

目的 探讨不同免疫力小鼠的免疫细胞对人类肝癌细胞系9724生长的影响及异种特异性细胞毒杀伤能力。方法 将培养后的人类肝癌细胞系接种到不同免疫力小鼠（免疫正常的BALB／c,B缺陷的CBA／N,T缺陷的BALB/c nude及T,B缺陷的C.B－17 SICD小鼠）右后臀皮下,观察其生长;取实验和相应的正常鼠脾细胞进行细胞毒杀伤试验。结果 BALB/c和CAB／N小鼠不成瘤;BALB/c nude和C.B－17 SCID小鼠100％成瘤;SCID免疫重建组用BALB/c外周淋巴细胞重建SCID（BALB/c－PBL－SCID）的不成瘤,用CAB／N外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）成瘤,接种过瘤的BALB/c和CBA／N小鼠脾细胞对癌细胞有较强的细胞毒杀作用,对照组和nude,SCID小鼠无杀伤作用;SCID免疫重建有较小的杀伤作用。结论 T细胞在异种瘤移植排斥中起主要的免疫杀伤作用,这种排斥是异种特异笥的;肿瘤免疫需要综合性免疫作用。     

人肝癌细胞系9724在不同免疫缺陷小鼠中的增殖特点

目的 探讨人类肝癌细胞9724在不同免疫缺陷小鼠的生长及模型特点。方法 体外培养人类肝癌细胞9724；按种到不同免疫力小鼠（B缺陷的CBA／N，T缺陷的BALB／c裸鼠，T，B缺陷的C.B-17 SICD小鼠及免疫重建的SCID小鼠。免疫正常的BALB／c作为对照组）皮下、肝内、腹腔，观察其生长特性。结果 BALB／c小鼠和用BALB／c外周淋巴细胞免疫重建的SCID（BALB／c-PBL-SCID)不成瘤；CBA/N小鼠随接种数量和途径不同而有不同的表现；BALB／c裸鼠，SCID小鼠和CBA／N小鼠外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）100％成瘤。结论 SCID小鼠是建立肝癌模型的最佳小鼠，也是进行肿瘤免疫研究最佳模型动物；T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用。     

肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞对卵巢上皮癌疗效的体外研究

目的 探讨肿瘤细胞裂解物致敏树突状细胞(DC)疫苗对卵巢癌治疗的可行性.方法 采取随机对照研究方法 ,将大鼠分成实验组与对照组,每组20只,每组随机抽取10只大鼠进行DC体外培养,其余大鼠随后取脾脏淋巴细胞进行杀伤率试验,实验组于培养的第3天加入大鼠卵巢癌细胞系NuTu-19的冻融抗原,培养14 d后将两组DC分别与各组剩余大鼠脾脏分离的T淋巴细胞共同培养,观察形态学.结果 实验组DC在体外试验中可以有效地刺激T淋巴细胞的增殖,诱导生成杀伤性T淋巴细胞(CTL),在效靶比(SC:RC)为1:3、1:10、1:30和1:100时:淋巴细胞刺激指数(SI)实验组均高于对照组(P<0.01);在相同效靶比(SC:RC=3:1,10:1,30:1)时:对肿瘤细胞的杀伤率实验组分别为(40.9±1.2)%、(69.8±1.8)%及(89.0±0.4)%,对照组分别为(30.9±1.9)%、(34.4±2.1)%及(51.0±1.5)%,两者比较差异具有统计学意义(P<0.01).结论 肿瘤细胞裂解物致敏后的DC疫苗能够激活T淋巴细胞,对肿瘤细胞产生体外免疫杀伤作用.     

微波治疗后坏死肿瘤组织致敏的树突状细胞介导肿瘤免疫治疗

目的 探讨微波凝固治疗（MCT）后坏死肿瘤组织能否致敏树突状细胞（DC）,致敏DC是否具有特异性抗肿瘤作用。方法 对BALB／c小鼠皮下肿瘤结节进行MCT治疗后,取出坏死的组织碎块研磨过滤,滤液与体外培养的小鼠骨髓来源的DC共同孵育获得致敏DC。观察DC的形态并检测其表型。3↑H-TdR掺人法测定DC刺激T细胞反应性增殖和^51Cr释放测定法检测DC诱导特异性CTL的细胞毒作用,以及体内对小鼠皮下肿瘤的抑制情况。最后再检测致敏DC治疗后的荷瘤鼠脾细胞悬液提取的T细胞在体内外的杀伤特异性。结果 与MCT治疗后坏死CT-26肿瘤组织滤液共同培养的DC具有典型的致敏DC形态特征和表型。致敏DC和未致敏DC诱导T细胞增殖强度在不同DC／T比下分别为：DC／T比1510时,80±10 vs 10±5;DC／T比1：20时,58±7 vs 9±4,两两比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。致敏DC和未致敏DC诱导的CTL在不同E／T比下对CT-26肿瘤细胞杀伤率分别为：E／T比10时,13．6±2．5 vs 1．1±0．4;E／T比20时,27．5±4．4 vs 1．4±0．4;E／T比50时,51．2±8．1 vs 1．4±0．5,两两比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。二者诱导的CTL在不同E／T比下对MIP／NIM淋巴瘤细胞杀伤率分别为：E／T比10时,2．61±0．64 vs 0．87 ±0．15;E／T比20时,5．22±0．65VS2．18±0．41;E／T比50时,6．09 ± 0．83 vs 3．91±0．51,两两比较差异均无统计学意义（均P〉0．01）。体内实验,皮下移植瘤大小在致敏DC组、未致敏DC组和生理盐水对照组间随小鼠存活时间延长越来越明显,至40d时3组肿瘤平均重量分别为4．5g±1．1g,6．9g±1．6g,9．0g±1．5g,组间差异有统计学意义（均P〈0．01）。致敏DC治疗后的荷瘤鼠脾细胞悬液内T细胞在体内外也均显示了对CT-26肿瘤的杀伤作用。结论 作为一种全细胞抗原,MCT治疗后的肿瘤坏死组织能够致敏DC,致敏DC在体内外均具有明显的特异性抗小鼠CT-26肿瘤作用。