α1,3GT siRNA打靶杂合子猪肝细胞阴性表达半乳糖转移酶

目的 研究联合应用基因敲除及RNA干扰(siRNA)技术对猪α1，3半乳糖转移酶(α1，3GT)基因修饰后，阳性猪杂合子( ／-)肝细胞的GT基因是否获得有效沉默并影响人天然抗体介导的细胞毒性作用。方法用pPNTloxPneo和PMXSV／U6载体构建猪GT基因敲除并siRNA载体，转染中国实验用小型猪的肝细胞，筛选获取杂合子克隆( ／-)。Northern blot检测GT mRNA表达，四甲基偶氮唑盐方法评估天然抗体细胞毒性。结果 野生型和pPNTloxPGT转染的杂合子猪肝细胞的inRNA表达阳性，而pPNTloxPGTsiRNA载体转染的杂合猪肝细胞阴性表达α1，3GT mRNA;pPNTloxPGT转染细胞( ／-)和野生型( ／ )猪肝细胞对人天然抗体介导的细胞毒性实验敏感，而pPNTloxPGTsiRNA转染细胞( ／-)则对毒性试验敏感性明显下降，只检测到17％细胞毒性。结论 对猪GT联合应用基因敲除及SiRNA能够在阳性猪杂合子肝细胞内有效沉默GT基因，降低猪肝细胞对人天然抗体细胞毒的敏感性。     

非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞用于核移植构建重组胚

目的研究非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体,以体外成熟去核兔卵母细胞作为受体进行核移植构建重组胚胎的可行性及囊胚形成率. 方法首先利用新西兰兔骨髓和脂肪为来源分别培养骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞,然后用他们作为核供体,采用卵细胞胞质内直接注射法构建重组胚胎,7 d后比较囊胚形成率. 结果核移植操作后卵细胞存活率达80.0%,骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体重组胚胎囊胚形成率分别为88/522 (16.9%)和73/464 (15.7%), (P>0.05, Yates corrected). 结论处于非休眠期的成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞移植到去核卵母细胞后能够进行早期胚胎发育,两者囊胚形成率无明显差别.     

生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算

0　引言　目前细胞群体倍增时间的计算方法有两种 ,而我们基于计数法绘制细胞生长曲线所获数据 ,利用 SPSS软件进行理论推导而得的理论倍增时间计算方法计算相对简单实用 ,现介绍如下 .1　材料和方法　指数函数拟合模型 (Exponential)中 ,Y=b0 × 2 b1 ×t要比 Y=b0 × eb1 × t更符合细胞的生物学特性 ,因为细胞增殖为二分裂生长 .Y=b0 × 2 b1 ×t在 SPSS的曲线模拟功能选项中并没有此函数拟合模型 ,故将原始数据的自变量时间变量作一转换 ,即将原自变量乘以 ln2即可 ,理论依据为Y=b0 × 2 b1 × t=b0 × eb1 × tln2 =b0 × eb1 ×…     

新西兰兔骨髓基质细胞构建组织工程膀胱的实验研究

目的：研究骨髓基质细胞(MSCs)在兔组织工程膀胱中的应用．方法：按献改进方法制作膀胱无细胞基质(BAMG)，从兔胫骨中分离出MSCs，体外扩增后接种于BAMG外表面，在低糖DMEM(LG—DMEM)培养12h，与BAMG复合成组织工程膀胱，对同一兔实施膀胱次全切术，用组织工程膀胱替代．20只兔实施了保留三角区的膀胱次全切术．实验随机分为3组．A组6只直接缝闭三角区；B组7只用膀胱形状的BAMG进行重建；C组7只用复合自体MSCs的组织工程膀胱进行替代手术．术前术后分别记录膀胱测压和放射线造影资料．12wk时无痛处死动物，进行大体解剖和组织染色分析．结果：体外扩增时间平均为21d．A，B和C组膀胱容积分别为术前的22％，85％和95％，顺应性分别为术前的11％，104％和107％．大体解剖显示A组仅有很小的储水能力，而B，C组具有正常膀胱形态，组织染色分析A，B组显示上皮层正常，粘膜下纤维组织增生而肌层较薄；C组则显示了与自体膀胱相似的正常的3层组织结构．结论：膀胱次全切除后原位缝合膀胱容积和顺应性均不能恢复，单纯应用BAMG膀胱容积和顺应性能够恢复正常，但逼尿肌层较薄，应用BAMG复合自体ASCs或MSCs的组织工程膀胱替代，术后12wk膀胱容积和顺应性能够恢复正常，膀胱壁组织结构与正常膀胱相似．提示膀胱次全切除后应用BAMG复合自体MSCs的组织工程膀胱替代可以获得良好功能和组织结构．     

人肝癌原位移植转移模型特性实验研究

目的　建立人肝癌细胞系HCC-9724(简称H)淋巴结转移模型,研究肿瘤转移机理。方法　采用裸鼠肝脏原位移植法,接种肿瘤细胞,取其淋巴结转移灶反复肝内接种,连续传三代后,观察其转移特性,采用SABC法测定淋巴结中nm23和Ⅳ型胶原酶表达。结果　裸鼠原位接种50d,肝内长出约1.7cm×6.0cm大小的肿瘤,呈分叶状,质地较软,周围血供丰富,瘤组织与邻近脏器粘连,有明显的浸润和转移,经裸鼠三次筛选后肿瘤潜伏期短(15d),瘤体大,形成广泛的肠系膜淋巴结转移,淋巴结中Ⅳ型胶原酶表达呈强阳性;而nm23呈弱阳性。结论　采用裸鼠肝原位移植法,反复筛选,获得了人肝癌淋巴结高转移模型。     

人肝癌细胞系HCC-9724的建立及其生物学特性

目的 建立一株肝癌细胞系ＨＣＣ－９７２４,为肝癌研究提供实验模型。方法 无菌切除肝癌手术标本,６只裸鼠右后肢皮下包埋,体内连续传３代后,取移植瘤体外培养,绘制细胞生长曲线,光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染铎体核形分析,用免疫荧光法测定荷瘤鼠中ＡＦＰ的表达,结果 移植模型原代获得率为３３．３％,潜伏期为５２ｄ,自第３代后肿瘤获得率为１００．０％,潜伏期为１６ｄ,该模型移植瘤具有生长,稳定,     

成骨细胞特异性Pten基因敲除小鼠发生骨质硬化症

目的:研究Pten基因及其介导的PI3K/AKT信号通路在骨代谢平衡过程中的作用并建立相应的骨代谢疾病小鼠动物模型.方法:在利用Cre-LoxP系统获得成骨细胞特异性Pten基因敲除小鼠的基础上,利用X线摄影术、骨密度分析及组织学染色方法分析Pten基因敲除小鼠较野生型小鼠的骨量变化情况,进一步提取2种基因型小鼠骨组织RNA,通过实时定量PCR分析成骨细胞的标志基因如胶原Ⅰ、碱性磷酸酶、骨钙素等标志分子的表达情况.结果:获得了成骨细胞特异性Pten基因敲除小鼠,Pten基因敲除后小鼠的体型较野生型小鼠没有明显改变,但X线片、骨密度及组织学分析均表明Pten敲除小鼠骨量明显增加,发生了与人类骨质硬化症相类似的表型:此外,实时定量PCR的分析结果显示,成骨细胞的标志基因如胶原Ⅰ、碱性磷酸酶、骨钙素等标志分子的表达都有明显的升高.结论:成功地建立了Pten基因敲除骨质硬化症小鼠动物模型.     

帕金森病和L-DOPA诱导的运动障碍动物模型

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种较常见的老年性疾病，表现为运动神经紊乱。为了深入研究PD的发病原因及治疗手段，人们根据疾病的病理特点复制了不同的动物模型。本文综述了国内外采用大鼠和非灵长类动物复制PD模型的常用方法及L-DOPA诱导的运动障碍。但不同的动物模型具有不同的特点，应根据实验的要求选择适当的模型。     

人肝癌细胞在免疫重建前后SCID小鼠中的生长特点

目的 探讨SCID小鼠免疫重建及免疫对人肝癌细胞成瘤的影响。方法 体外培养人肝癌细胞系，接种到SCID小鼠和用BALB／c,CBA/N小鼠外周血淋巴细胞重建的SCID（B－PBL－SCID和C－PBL－SCID）小鼠皮下；监测成瘤状态，测定鼠脾细胞毒杀伤力和免疫重建的免疫球蛋白量，作血清与靶细胞凝集实验。结果 免疫重建体现了所用小鼠免疫对肿瘤的排斥特点，免疫重建成功；SCID和C－PBL－SCID小鼠100％成瘤（两瘤体相比P＜0．01），B－PBL－SCID出现瘤体后逐渐消失；B－PBL－SCID和C－PBL－SCID脾细胞对靶细胞有一定的杀伤力，B－PBL－SCID的血清能与靶细胞产生凝集反应。结论 SCID是建立肿瘤模型和肿瘤免疫研究的良好动物；肝癌细胞在小鼠体内的成瘤率与T，B细胞免疫有关。     

2080例药物中毒门诊病例分析

本文对 2 0 80例门诊药物中毒病例进行流行病学分析 ,了解就诊病例药物中毒性别、年龄、文化程度、职业分布、季节性的构成比 ,并提出预防措施