线粒体DNA3316、3394等4个突变位点与2型糖尿病的关系研究

目的:探讨DNA tRNA Leu(UUR)基因及ND-1基因3316 G/A、3394 T/C等4个突变位点与2型糖尿病的关系。方法:对236例海南地区2型糖尿病患者和252例健康对照者进行空腹血糖测定并采用聚合酶链式反应—限制性核酸内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)的分析方法进行mtDNA的3243、3316、3394、和3593共4个位点进行突变筛选,并采用DNA测序方法确证。结果:实验组空腹血糖(9.37±3.01)mmol/L与健康对照组(4.96±0.76)mmol/L差异有统计学意义(P<0.05);实验组检出3316(G→A)突变8例,3394(T→C)突变3例;健康对照组未发现上述突变;突变检测结果与测序一致。两组间3316(G→A)突变率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:线粒体DNAtRNALeu(UUR)基因及ND-1基因3316、3394位点的基因突变,尤其是3316位点(G→A)突变可能与某些核基因或环境因素协同促进了2型糖尿病的发生。     

弱精子症精子线粒体DNAA3243G，G3316A和T3394C突变的检测

目的：检测弱精子症精子线拉体tRNA^1eu3243位点、线粒体NDI3316位点和3394位点碱基突变频率,分析三个位点突变与弱精子症的相关性。方法：按WHO标准随机收集了69例弱精子症患者精子标本和60例正常人正常活动力精子标本,以聚合酶链反应、ApaⅠ和HaeⅢ限制性内切酶长度多态性分析和测序检测mtDNAA3243G、G3 316A和T3 394C三个位点的突变,比较两组突变频率的差异。分析G3316A和T3394C突变的氨基酸变异情况并结合生物信息学工具分析错义突变氨基酸进化保守性。结果：弱精子症精子mtDNAG3316A突变率（4．35％）、T3394C突变率（2．90％）和总突变率（7．25％）与正常对照纽（分别为5．00％、1．67名和6．67％）比较,差异无显著性。氨基酸变异分析发现,G3316A（Ala-〉Thr）、T3394C（Tyr-〉His）均为错义突变,其中T3394C突变位点所编码的氨基酸在人、牛、小鼠、爪蟾4种生物中进化具有高度保守性。结论：G3316A和T3394C突变可能不是影响人类精子活动力的主要因素。     

97例线粒体肌病/脑肌病患者的线粒体DNA突变分析

目的 探讨我国不同临床类型的线粒体脑肌病的线粒体DNA(mtDNA)突变特点以及基因型和表型之间的相关性.方法 对经临床和病理诊断为线粒体肌病/线粒体脑肌病的97例患者,提取其肌肉和/(或)白细胞mtDNA,用Southern杂交检测mtDNA的大片段缺失、以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测常见类型的点突变(包括A3243G、A8344G、T8993G、　T8993C、T3271C突变)、并对部分患者进行mtDNA伞长测序寻找有无其他的突变位点.结果 97例患者中有81例患者存在mtDNA突变,突变类型包括单一的大片段缺失21例,多发的大片段缺失4例,A3243G突变43例,A8344G突变6例,T8993G、T8993C、T3271C突变各1例.KSS/CPEO与单发的mtDNA大片段缺失相关、MELAS与A3243G点突变、MERRF与A8344G点突变、母系遗传的Leigh　病与8993位点的突变相关.另外在4例线粒体肌病患者中发现细胞色素b编码基因A15316G　(T194A)、G15221A(D159N),ATPase6编码基因G9196A(D224N)和16SrRNA C2835T突变各1例.结论 国人不同类型线粒体肭肌病的mtDNA突变类型与国外外的报道道基本一致.虽然线粒体脑肌病的临床表刑和基因型之间有一定的相关件,但不同的基因型和临床表型之间也存在一定的交叉,反映了线粒体病的异质性特点.     

线粒体DNA3160-3755区域基因突变与2型糖尿病的关系

目的研究线粒体DNA3160-3755区域基因在延边地区2型糖尿病（T2DM）患者中的突变情况,探讨该区域线粒体基因突变与2型糖尿病的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymorphismchainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP）技术和直接测序法对延边地区人群108例正常健康体检者、328例T2DM患者（其中2例合并耳聋）,进行线粒体DNA3160-3755区域基因突变筛查。结果线粒体DNA3316G-A在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为3．7％和3．8％。两组间差异无统计学意义（P〉0．05）;3394T→C在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为7．3％和1．9％,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）;在糖尿病组及正常对照组中均未检测到线粒体DNA3243A→G、3593T→C和3714A→G突变。结论线粒体DNA3316G→A突变与延边地区T2DM的发生无关;线粒体DNA3,394T→C突变与延边地区T2DM的发生有关;线粒体DNA3423A→G,3593T→C,3714A→G突变在延边地区T2DM中的发生率为0,提示上述位点基因突变率极低。     

帕金森病患者线粒体DNA突变位点G1719A、G4580A、C7028T分析

目的研究有关线粒体DNA（mtDNA）点突变与我国人群散发性帕金森病（Parkinson disease,PD）的关系。方法采用经典的酚／氯仿抽提法对88例PD患者（研究组）和60例健康体检者（对照组）的全血基因组DNA进行抽提,针对与PD发病有关的mtDNA突变位点G1719A、G4580A、C7028T设计特异的引物,经过PCR鉴定和基因测序,在NCBI基因库上进行BLAST比对分析,发现突变位点。结果PD患者有10例在C7028T位点发现突变,8例在G1719A位点发现突变,3例在G4580A位点发现突变,对照组未发现突变位点。结论散发性PD患者存在线粒体基因的点突变,线粒体基因的点突变可能参与PD的发病过程。     

线粒体12SrRNA、ND1基因突变与糖尿病

目的探讨线粒体基因(mtDNA)12SrRNA1382、1442位点及NDI3394、3423位点突变与中国上海地区非肥胖2型糖尿病的关系。方法采用PCR-SSCP及PCR产物直接测序等技术检测mtDNA12SrRNA、NDI片段的突变情况。结果286例非肥胖2型糖尿病患者在12SrRNA1382位点有6例存在A→C的点突变，1442位点8例存在G→A的点突变；242例非糖尿病对照组中，2例存在1382位点A→C，1例存在1442位点G→A的点突变。286例非肥胖2型糖尿病和242例非糖尿病对照组中，未发现NDI3394位点突变，而3423位点的突变率为100％。结论12SrRNA1382、1442位点突变可能增加糖尿病的易感性。mtDNANDI3423位点突变率为100％，可能与人种有关；3394位点不存在突变说明糖尿病的发生在线粒体遗传上存在一定的异质性。     

线粒体DNA 3243、3316点突变与中国云南2型糖尿病的关系(摘要)

目的:研究中国云南2型糖尿病人群中线粒体tR-NALeu(UUR)基因nt 3243A/G突变和ND-1基因nt3316G/A突变的发生频率及其与2型糖尿病的相关性.寻求准确、快速、简易的临床糖尿病基因诊断技术.对象及方法:随机选择225例中国云南2型糖尿病患者和195例无糖尿病家族史的健康对照者作为研究对象.通过聚合酶链反应及限制性片断长度多态性分析(PCR-RFLP)检测t RNALeu(UUR)基因3243A/G突变和ND-1基因3316G/A突变,并经DNA直接测序确证.结果:225例2型糖尿病患者及195例对照者中无1人携带线粒体3243A/G突变;225例2型糖尿病患者中检出线粒体3…     

Relationship between mutations of mitochondrial DNA ND1 gene and type 2 diabetes

Background Recent studies have indicated that many mutations in mitochondrial (mt)DNA NDI gene region are related to diabetes mellitus. In this study we explored the relationship between various mtDNA ND1 gene mutations and type 2 diabetes mellitus (DM) among Chinese. Methods Using PCR restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis and gene sequencing, 4 spots of mtDNA (nt3243, nt3316, nt3394, nt3426) were screened in 478 diabetics and 430 non-diabetic subjects.Results In diabetic group, there were 13 carriers (2.72%)of 3316 G→A mutation,12 (2.51%) of 3394 T→C mutation and 2 (0.42%) of 3426A→G mutation. In controls, only 3394 T→C mutation was observed in 2 subjects (0.47%). There was significant difference in the frequency of 3316 and 3394 mutation between two groups (P&lt;0.05, respectively). More subjects with mitochondrial DNA ND1 gene mutations had DM family history and greater tendency of maternal inheritance when compared to those patients without mutation in diabetic group（P&lt;0.01）. A 3426 mutation diabetic pedigree was studied, and we found 12 maternal members in the family had the same mutation. Conclusion mtDNA ND1 gene mutations at nt3316 (G→A), nt3394 (T→C) and 3426 (A→G) might contribute to the pathogenesis of DM with other genetic factors and environment factors.     

浙江汉族人群线粒体DNA ND1基因G3316A突变与2型糖尿病

目的：研究与日本人2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）相关的线粒体DNA（mitochondria DNA,mtDNA）ND1基因G3316A突变在浙江汉族T2DM人群中的发生率及其临床意义。方法：采用PCR产物直接测序法对浙江籍汉族人群中无血缘关系的315名T2DM患者及158名正常对照的外周血mtDNA进行检测,并用DNASTAR和Antheprot 5.0软件分析突变位点。结果：在T2DM患者中检测到6例（占1.90%）G3316A突变,对照组中发现3例（占1.90%）突变,突变发生率在两组间差异无显著性（P＆gt;0.05）。携带G3316A位点突变的T2DM组与无该突变的T2DM组之间的临床特点（发病年龄、体重指数和血糖水平等）比较差异亦无显著性。蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和不规则卷曲的构成比没有发生改变。结论：线粒体DNA ND1基因G3316A突变可能与浙江汉族人群T2DM的发生无关,仅为人群中的基因多态性。     

同型半胱氨酸代谢酶MTHFR、CBS、MS基因多态性与脑梗死患者颈动脉狭窄的相关性

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)代谢酶亚甲基四氢叶酸还原酶( MTHFR)基因C677T、胱硫醚β-合成酶(CBS)基因844ins68、T27796C和甲硫氨酸合成酶(MS)基因A2756G基因多态性与脑梗死患者颈动脉狭窄的相关性.方法 脑梗死组135例,对照组65例,采用聚合酶链反应一限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测基因表型.结果 ①脑梗死组MTHFR C677T突变(TT)基因型及T等位基因频率显著高于对照组(均P＜0.05);脑梗死伴中重度颈动脉狭窄组MTHFR C677T突变(TT)基因型及T等住基因频率高于脑梗死伴轻度颈动脉狭窄组和脑梗死无颈动脉狭窄组(均P＜0.05).②脑梗死组CBS T27796C突变(CC)基因型及C等住基因频率显著高于对照组(均P＜0.05);脑梗死伴中重度颈动脉狭窄组T27796C突变(CC)基因型及C等位基因频率高于脑梗死伴轻度颈动脉狭窄组和脑梗死无颈动脉狭窄组(均P ＜0.05).CBS844ins68位点多态性,未发现突变.③脑梗死组MS A2756G突变(AG)基因型及G等位基因频率与对照组比较无显著性差异(均P ＞0.05).脑梗死伴中重度狭窄组MS A2756G突变(AG)基因型及G等位基因频率与脑梗死伴轻度颈动脉狭窄组和脑梗死无颈动脉狭窄组比较均无显著性差异(均P ＞0.05).结论 MTHFR基因C677T位点、CBS基因T27796C位点突变与脑梗死颈动脉狭窄及其程度相关,MS基因A2756G位点突变与脑梗死颈动脉狭窄及其程度无关.     

Detection of A3243G point mutation in mitochondrial DNA from 10 cases of MELAS

目的：对10例MELAS型线粒体脑肌病患者进行线粒体DNA A3243G点突变的检测。方法：用PCR-限制性内切酶分析法（restriction analysis）,检测10例MELAS患者及其8名母系亲属的肌肉和/或外周血细胞中有无mtDNA的A3243G点突变,并进行突变型mtDNA的定量。结果：在10例患者的肌肉和/血细胞中,均检测到A3243点突变。突变型mtDNA的比例在血细胞（7例）中为10.8％-47.8％,在肌肉（5例）中为39.4％-67.7％。有2例患者同时进行了肌肉和血细胞标本的检测,突变型mtDNA的比例肌肉组织均高于血细胞。在血细胞中,年轻患者的突变型比例通常较高。在1个家系中可证实为母系遗传 。但在3例先证者的母亲及2例先证者抽胞均未检测到此突变。结论：10例MELAS综合征患者均携有mtDNA A3243G点突变。在6个家庭中,只有1个家庭可证实为母系遗传,另外5个家庭中此突变可能为散发性,提示在中国人MELAS的发病机制中,mtDNAA3243G点突变为新生突变的居多。     

特异性寡核苷酸探针反向杂交在mtDNA点突变检测中的应用研究

目的：建立一种快捷、有效的mtDNA点突变检测体系。方法：线粒体病患者15例，根据临床表现分为3组，线粒体脑肌病伴高乳酸血症、卒中样发作（MELAS）组7例，单纯型线粒体肌病组4例，慢性进行性眼外肌麻痹（CPEO）组4例。用苯酚／氯仿法提取外周全血DNA，采用PCR／ASO反向杂交技术。用PCR扩增mtDNA的突变“热区”——tRNA^Leu（UUR）基因，在下游引物的5’端标记上地高辛，与点在尼龙膜上的5对寡核苷酸（AS0）探针：A3243／A3243G（野生型／突变型）、T3271／T3271C、G3460／G3460A、T3291／T3291C、C3256／C3256T进行反向杂交，根据杂交显色信号，确定有无突变。同时利用PCR／RFLP方法加以验证。结果：MELAS组中有A3243G点突变3例，但没有其他4个位点的突变。单纯型线粒体肌病组和CPEO组均未发现以上5个位点的突变。PCR/ASO反向杂交法与PCR／RFLP法结果一致。结论：PCR/ASO反向杂交技术，适用于已知mtDNA点突变的检测，具有敏感、节时、节省费用的特点。尤其适用于大批量标本的筛选。     

Prevalence and clinical characteristics of mitochondrial tRNA leu(UUR) mt 3243 A→G and ND-1 gene mt 3316 G→A mutations in Chinese patients with type 2 diabetes

Objective To assess the prevalence of mitochondrial tRNA leu((UUR)) gene mt 3243 A→G mutation and ND-1 gene mt 3316 G→A mutation in Chinese type 2 diabetes. Methods 716 randomly selected, unrelated patients with type 2 diabetes were screened for the mutation with a PCR-RFLP technique.Results Three individuals with mitochondrial tRNA leu((UUR)) gene mt 3243 A→G mutat ion were identified, representing approximately 0.4% of the type 2 patients scr eened.Further screening of first-degree relatives of these 3 patients identi fied another 4 affected carriers.In comparison with type 2 diabetic patients without the mutation, these 7 carriers of the mt3243 mutation had: 1) an earlier diagnosis age of diabetes (38.0±10.1 year vs 53.4±10.0 year, P&lt;0.001 ); 2) lower Body Mass Index (BMI) (19.5±2.0 kg/m(2) vs 24.9±10.9 kg/m(2) , P&lt;0.0001); and 3) lower post-challenge insulin levels (Area under the cu rve of insulin levels during the Oral Glucose Tolerance Test (OGTT), 2946±1647 .2 μIU·ml［-1］ vs 7469±6647.7 μIU·ml［-1］, P&lt;0.01).ND- 1 gene mt 3316 G→A mutation was found in 16 patients with type 2 diabetes (2.2 %) and 5 out 181 controls (2.7%) with normal glucose tolerance.Therefore, th e frequency of the mutation was not different in patients and controls.Moreov er, clinical characteristics such as age of onset of diabetes, BMI, and insulin levels were not different between diabetic patients with the mt 3316 mutation an d those without it.Conclusions In this large cohort of Chinese Type 2 diabetes, the prevalence of mitochondrial tRNA leu((UUR)) gene mt 3243 A→G mutation was 0.4%, and the ND-1 gene mt 3316 G→A mutation is a polymorphism unrelated to diabetes.     

河南汉族精神分裂症患者mtDNA5351位点突变与GRIK2基因两位点多态性检测

目的:检测精神分裂症(SZ)患者线粒体(mtDNA)A5351G突变和谷氨酸卡纳氨酸盐受体2(GRIK2)基因rsA2227283G、rsT6922753C多态性.方法:选取河南汉族人群SZ患者312例(患者组),以体检健康的正常人340例为对照,应用PCR和限制性片段长度多态性(RFLP)技术验证基因型,分析等位基因...     

线粒体DNA A3243G点突变的临床异质性表现

目的探讨线粒体DNA A3243G点突变的临床表现特点.方法以25例临床怀疑为线粒体病,经血或肌肉线粒体DNA检查证实有A3243G点突变的线粒体脑肌病患者为研究对象,分析其临床表现、脑影像学特点、血乳酸水平和肌肉病理检查结果.结果基因检测证实25例患者均存在比例不同的线粒体DNA A3243G点突变,但临床表型有很大不同,其中19例为线粒体脑肌病伴乳酸血症和卒中样发作(MELAS),2例为无法分类的线粒体脑病,2例为松软儿,1例为Kearns-Sayer综合征(KSS),1例为线粒体胃肠肌病.大部分患者脑影像学检查可见病灶,肌肉活检可见蓬毛样红纤维改变,所有患者均有血乳酸水平增高.结论线粒体DNA A3243G点突变的临床表现和脑影像学均呈高度的异质性.对表现为多系统受累的患者,如果同时合并高乳酸血症,就应考虑线粒体病的可能,应进行线粒体DNA突变的检查以明确诊断.