口腔常见厌氧性细菌感染检测基因芯片的研制

目的研制一种用于检测口腔常见无芽胞厌氧性细菌感染的基因芯片。方法选择口腔感染中常见的无芽胞厌氧性细菌作为菌种,将16S rDNA作为靶基因。借助生物信息学方法,设计通用引物和特异性探针,选择与反义引物互补的核酸序列作为阳性质控探针;大肠杆菌16S rDNA基因序列为阴性质控探针,制备微阵列。进行厌氧性细菌DNA的提取、扩增、杂交、结果分析以及微阵列质量检测。结果制备的用于检测口腔常见无芽胞厌氧菌感染的基因芯片特异性、灵敏度、重现性和稳定性均符合实验要求。结论利用生物信息学方法设计的引物和探针合理,制备的芯片可用于口腔常见无芽胞厌氧性细菌感染的诊断。     

Blast-病毒物种鉴定的新方法

采集自愿献血员中56份HCV-Ab阳性血样，常规分离血清。应用RT-nPCR对HGV-NS3区进行核酸扩增，PCR扩增产物与PMD18-T载体连接，转染DH5d工程菌株，挑选白色菌落，经内套PCR验证克隆阳性者，以碱裂解法提取质粒DNA，应用荧光染料Bignye标记、Sanger双脱氧末端终止法进行重组DNA的核酸序列测定。将测得的核酸序列，经国际互联网络输入到NCBI的GenBank数据库的局部序列相似形查询(Blast)的查询框中，借助于GenBank数据库中的资料和计算机分析程序中的BlastN软件，与数据库中所有已知的核酸序列进行序列同源性比对搜索分析。     

髓磷脂碱蛋白抗体对神经细胞损伤作用的初步研究

自1969年Walker提出癫痫的免疫病理机制以来,有关癲痫的免疫学研究越来越受到重视,人们发现抗脑抗体对脑组织的特异性作用可引起癲痫样放电;将抗脑抗体注入动物脑内,可引起反复性的癲痫样发作。髓磷脂碱蛋白(MBP)是神经髓鞘的重要成份,也是一种自身免疫原性较强的物质。本文报告了MBP抗体对体外培养的神经细胞的作用,为探索癫痫的发病机理秈临床治疗提供线索。一、材料和方法 (一)神经细胞培养:取3～4月龄水囊引产胎儿,产后及时以无菌手续取出脑组织,去除脑膜和血管,Hank液洗三次,0.25％胰蛋白酶37℃消化30分钟,吸除胰蛋白酶后;加含20％乳牛血清的Eagle液,吹打分散细胞,计数后稀释至10~6个/ml接种细胞管,37℃培养约7     

葡糖基转移酶抗体的防龋研究

为了从病因学的角度对龋齿进行有效防治.方法 通过测定使用从免疫乳中提取的葡糖基转移酶抗体后,对唾液中游离型该酶的活性影响,及儿童近期新龋发生率的观察和比较. 结果 该抗体可显著降低口腔唾液中游离型萄糖基转移酶的活性,并取得明显近期防龋作用.结论 该方法是一种安全可靠的防龋新途径.     

脑脊液髓鞘碱性蛋白抗体检测对格林-巴利综合征的临床价值

目的探讨格林-巴利综合征（GBS）中枢神经髓鞘的免疫性损伤。方法GBS患者20例，神经系统其它疾病组（OND）20例，非神经系统疾病手术者33例。以酶联免疫吸附法检测73份脑脊液（CSF）中髓鞘碱性蛋白IgG（MBP－IgG）。结果GBS患者、OND患者和非神经系统疾病手术者CSF中MBP－IgG阳性率分别为55％、30％和9.1％。GBS患者CSF中MBP-IgG阳性率与发病天数有关。结论部分GBS有中枢神经髓鞘的免疫性损害，证实GBS是自身免疫性脱髓鞘病。     

星状病毒70mer探针寡核苷酸芯片制备及杂交条件的优化

目的探讨有利于制备多种病毒长探针平行检测芯片的最佳制备及杂交条件。方法通过引物直接标记方法,对70mer探针寡核苷酸芯片的点样浓度、点样后固定方案、杂交温度、杂交时间进行优化。结果70mer寡核苷酸探针点样浓度在10μmol／L时就可获得较高的的荧光强度,探针点样干燥后在3600mJ条件下紫外交联固定效果最好,在65℃条件下杂交8h能获得最优杂交结果,所用杂交液是5×SSC（0．5％SDS、50％甲酰胺、1％鲑鱼精DNA）。结论本实验优化了70mer探针寡核苷酸芯片制备及杂交条件;此为进一步研制多种海洋环境人致病性病毒检测芯片奠定了基础。     

同时检测优生4项IgM抗体免疫层析试纸条的制备优化

目的:建立一种新型胶体金免疫层析试纸条,用于同时检测优生4项IgM抗体。方法:选择与制备、检测胶体金免疫层析条有关的6个因素进行优化,根据优化结果,制备出同时检测优生4项IgM抗体的免疫层析试纸条。结果:同时检测层析条与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测阴性和阳性血清标本结果对比,发现巨细胞病毒IgM抗体(CMV-IgM)、风疹病毒IgM抗体(RV-IgM)、弓形虫IgM抗体(TOX-IgM)、单纯疱疹病毒IgM抗体(HSV-II-IgM)的总符合率分别为97.9%、100%、100%、100%。结论:4项IgM抗体同时检测层析条具有特异、稳定、操作简便、结果显示直观的优点,有广泛的应用价值。     

液相核酸芯片鉴定角膜常见致病真菌的初步实验研究

目的 探讨建立快速鉴定角膜常见致病真菌的液相核酸芯片检测系统及其应用于真菌性角膜炎临床快速诊断的可行性.方法 实验研究.设计针对5种角膜常见致病真菌(茄病镰刀菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、烟曲霉菌及黄曲霉菌)rRNA基因内转录间隔(ITS)区的种特异性探针,5'端氨基C12修饰后与不同荧光色的微球结合,建立液相核酸芯片检测系统.将目的 真菌的5株标准菌株和42株角膜分离保存菌株的基因组DNA以一对真菌通用引物扩增并标记后用于杂交检测.实验中设立单一菌种检测与多菌种混合检测的比较,以及芯片检测与琼脂糖凝胶电泳检测的比较,采用配对设计资料的t检验和Spearman等级相关分析对检测结果 进行统计学分析,进而评估该检测系统的特异性、灵敏度和重复性.结果 所建立的液相核酸芯片体系可在聚合酶链反应(PCR)后3 h内准确将5株标准菌株鉴定至菌种的水平;42株角膜分离保存菌株单次检测阳性率达95.2%;阳性信号与背景比值位于5.6～13.3之间;单一菌种检测和5种菌种平行检测的中位荧光强度(MFI)差异无统计学意义(t=0.2524,P=0.8132);MFI的变化与PCR产物的量呈正相关(rs=1.0000,P<0.01);最低检测浓度为0.94 ng PCR产物,比琼脂糖凝胶电泳低40倍;4次重复检测的变异系数在1.8%～13.7%之间.结论 所建立的液相芯片检测系统具有较高的特异性、灵敏度及重复性,可同时完成对5种角膜常见致病真菌的菌种检测,为液相芯片技术在临床真菌快速诊断中的应用奠定了实验基础.(中华眼科杂志,2009,45:110-114)     

格林巴利综合征患者脑脊液髓鞘碱性蛋白抗体测定及其抗原制备

目的探讨格林巴利综合征(GBS)是否存在中枢神经系统脱髓鞘现象.方法应用酸提法从胎儿大脑白质中提取髓磷脂碱性蛋白(MBP),经Sephdex-G150柱层析纯化和SDS-PAGE圆盘电泳分析,以纯化的MBP为抗原,用EUSA法测了44例GBS患者、38例其他神经疾病(OND)患者和33例正常人.结果经酸提后的碱蛋白,共有3个洗脱峰;SDS-PAGE证实第三峰中含1.7kD和2.1kD两条区带;GSF-MBP-EgG检测,GBS组阳性率为38.6%(17/44),OND组阳性率为34%(13/38),对照组阳性率为9%(3/33).结论MBP作为髓鞘的主要蛋白在GBS的自身免疫性脱髓鞘的过程中起重要作用.     

蛋氨酸合成酶及胱硫醚β合成酶基因多态性与冠状动脉粥样硬化发生的关系

目的:探讨蛋氨酸合成酶(MS)和胱硫醚β合成酶(CBS)的基因多态性对同型半胱氨酸代谢的影响及与动脉粥样硬化的关系。方法:共入选研究对象153例(对照组40例,冠心病组113例)。采用高效液相色谱法测定血清同型半胱氨酸浓度。采用聚合酶链式反应扩增及限制性内切酶技术检测CBS基因1011A→G突变型和MS基因D919G突变型。结果:在40例对照组中,MS基因纯合子突变型(GG)为0,杂合子突变型(AG)占7.5%(3/40),总突变率占7.5%;在113例冠心病组中,纯合子突变型(GG)占2.7%(3/113),杂合子突变型(AG)占21.2%(24/113),总突变率为23.9%。χ2检验表明,突变型和非突变型在两组间有显著性差异(χ2=5.16,P<0.025)。G等位基因对冠心病的比值比(OR值)为4.39(95%的可信限为1.31~14.73,P<0.05)。突变部分血清同型半胱氨酸水平显著高于非突变部分[(16.83±3.08)mmol/Lvs(9.86±3.18)mmol/L]。CBS基因仅扩增出等位基因A,没有扩增出突变型G等位基因。结论:MS基因D919G突变型可导致血清同型半胱氨酸水平升高,并促进动脉粥样硬化的发生。