抑癌基因 Runx3表达下调与胃癌的关系

目的研究抑癌基因 Runx3在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法采用 RT-PCR 技术检测40例胃癌组织中 Runx3基因 mRNA 的表达;用免疫组化 SP 法检测 Runx3蛋白的表达.结果(1)Runx3在胃癌组织中阳性表达率为35.0%,明显低于癌旁正常胃黏膜组织的97.5%,两者间的差异有统计学意义(P<0.05);(2)胃癌组织中 Runx3 mRNA 的表达量明显低于其配对的癌旁正常胃黏膜组织(P<0.01);(3) Runx3 mRNA 的表达与胃癌的肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期有关(均 P<0.05);而与患者的年龄、性别、远处转移、浸润深度无关(均 P >0.05).结论 Runx3基因功能的下调与胃癌的预后密切相关.     

IGF-1R在胃癌组织中的表达及其与浸润转移和预后的关系

目的 探讨胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）在胃癌组织中的表达及其与胃癌浸润、转移的关系.方法 应用免疫组化SP法检测436例胃癌组织石蜡标本及92例癌旁非肿瘤胃黏膜组织标本中IGF-1R表达.结果 IGF-1R在胃癌组织表达明显高于癌旁非肿瘤胃黏膜组织,436例胃癌组织中有385例 IGF-1R蛋白表达阳性,216例高表达,IGF-1R蛋白的阳性表达与患者的年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、Lauren分型、浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关.I、II和 III期胃癌患者中IGF-1R高表达者5年生存率明显低于IGF-1R低表达者,IV期胃癌患者的5年生存率与IGF-1R表达无关,IGF-1R表达、浸润深度、淋巴结和远处转移和TNM分期为胃癌患者独立的预后因素.结论 胃癌组织IGF-1R表达与淋巴结和远处转移及预后显著相关,IGF-1R可能成为一个预测肿瘤进展、浸润和转移的分子标记物.     

KISS1在胃癌的表达及临床意义

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KISS1mRNA在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测52例胃癌、52例癌旁组织及12例正常胃组织中KISS1mRNA的表达,半定量分析RT-PCR产物电泳条带密度。结果 在52例胃癌及其相应癌旁组织中KISS1mRNA表达水平分别为（0.425±0.046）和（0.825±0.028）;12例正常胃组织表达水平分别为（0.856±0.044）;胃癌组织KISS1mRNA的表达水平明显低于癌旁组织、和正常胃组织（P〈0.01）。KISS1mRNA的表达水平与患者肿瘤病理类型及临床分期无关（P〉0.05）,而淋巴结有转移者其表达水平低于无淋巴结转移（P〈0.05）。结论 KISS1mRNA在胃癌组织中表达水平下降;其表达与胃癌淋巴结转移有关,可能成为胃癌转移和预后的指标之一。     

Tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用

目的: 建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(T cells immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule 4,Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RT-PCR)的检测方法,探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异.方法: 构建包含Tim4基因片段的标准质粒,通过RT-PCR,实时RT-PCR等检测并比较Tim4基因在37例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平. 结果: 建立的Tim4基因定量检测方法准确可靠;在37例胃癌组织中,26例癌旁组织Tim4基因表达量高于对应癌组织(26/37),且在26例癌旁组织高表达的样本中,18例(69.2%)胃癌癌旁组织与癌组织表达比率大于2;在19例结直肠癌中12例癌旁组织表达高于对应的癌组织(12/19),其中癌旁组织高表达率(大于2)为 75.0%(9/12).结论: 成功建立了检测Tim4基因的实时RT-PCR方法,Tim4基因在结直肠癌和胃癌的癌组织中表达呈低趋势,这为深入探讨Tim4基因与肿瘤的关系提供了实验基础.     

溶血磷脂酸受体-2基因在胃癌中的表达及其意义

目的:研究溶血磷脂酸受体-2(Lysophosphatidic acid receptor-2,LPAR2)基因在胃癌中的表达及其对肿瘤浸润转移的意义。方法:利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测LPAR2基因在56例胃癌手术切除标本中的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性。结果:LPAR2基因在正常胃黏膜组织和癌旁组织中低表达,在胃癌组织中高表达,差异有统计学意义;LPAR2基因表达与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤大小无明显相关性,而与胃癌的分化程度、浸润深度、转移及TNM分期相关联。分化程度差、浸润较深、有淋巴结转移、Ⅲ或Ⅳ期肿瘤组织中LPAR2基因的表达,明显高于分化程度较好、浸润较浅、无淋巴结转移、Ⅰ或Ⅱ期的肿瘤组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:LPAR2基因的高表达在胃癌浸润转移中有重要意义。     

DMBT1基因在胃癌组织的表达及其临床意义

目的探讨DMBT1基因表达与胃癌的关系.方法应用RT-PCR方法检测胃癌及癌旁组织DMBT1基因的表达.结果胃癌组织及癌旁组织DMBT1基因的表达率分别为22.9%(11/48)和89.6%(43/48);伴周围淋巴结转移的癌组织的DMBT1表达率9.7%(3/31)均低于不伴周围淋巴结转移的癌组织的表达率76.5%(13/17)(P<0.01),该基因的表达与肿瘤组织学分型、浸润方式及肿瘤大小等无关(P均>0.05).结论 DMBT1基因表达率降低与胃癌转移有关,提示该基因在抑制肿瘤发生及肿瘤转移中起一定作用.     

MTA1基因过度表达与胃癌浸润和转移的关系

目的:探讨MTA1基因与胃癌浸润和转移关系.方法:建立测定MTA1基因mRNA表达的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)最适条件,在半定量水平测定37例胃癌标本癌组织和癌旁正常黏膜组织MTA1基因mRNA表达的相对水平,分析与临床和组织病理学特征的关系.结果:37例胃癌中有14例MTA1基因mRNA过度表达(癌组织与癌旁正常黏膜组织MTA1基因mRNA表达半定量之比≥2),过度表达MTA1基因mRNA的胃癌浸润层次深、淋巴结转移率高,与对照组比较差异均有显著性(P=0.001 6和P=0.015 2),过度表达组脉管累及、TNM分期、分化程度与剩余病例组比较差异均无显著性(P＞0.05).结论:MTA1基因过度表达与胃癌浸润和转移相关.     

NR4A2基因及其选择性剪接异构体与胃癌发生及转移的关系

目的:检测胃癌中NR4A2(又称Nurr1)基因的表达,从NR4A2调控机制出发寻找相关选择性剪接异构体,探讨其与胃癌发生和转移的关系。方法:通过选择性剪接数据库(ASD)预测NR4A2基因可能存在的选择性剪接异构体,半定量PCR检测NR4A2及异构体的表达,基因测序技术鉴定新的剪接异构体;实时定量PCR检测41例样本中NR4A2及剪接异构体的表达水平;免疫组织化学方法检测28例样本中NR4A2蛋白表达。结果:NR4A2基因在胃癌原位、癌旁、转移组织中均有表达,确定了2种剪接异构体NR4A2-Ⅰ和NR4A2-Ⅱ。实时定量PCR检测41例样本中NR4A2及2种异构体在癌旁组织表达水平高于原位癌 (P= 0.017,P=0.007,P=0.004);在肝转移灶中表达水平低于原位癌(P=0.001,P=0.018,P=0.016),差异有统计学意义。免疫组化检测发现癌旁组织中NR4A2表达阳性率高于原位癌及转移灶,但差异无统计学意义(P=0.672)。结论:胃癌原位、癌旁和转移组织中至少存在NR4A2基因的2种剪接模式;NR4A2及异构体的表达变化与胃癌发生和转移相关。     

Bmi-1基因过度表达与胃癌分化、转移及预后的关系

目的 探讨胃癌组织中Bmi-1基因mRNA表达与胃癌分化、转移及临床预后的关系.方法 收集我院2006年5月～2006年11月共42例行胃癌手术切除标本,提取肿瘤及癌旁组织配对标本的总RNA,用RT-PCR方法测定Bmi-1基因表达,并结合临床资料,对Bmi-1基因差异表达与胃癌病人临床表现的相关性进行分析研究.结果 42例配对标本分别进行Bmi-1 mRNA荧光检测比较,29例标本的肿瘤组织中Bmi-1基因mRNA表达明显高于癌旁正常胃组织.Bmi-1mRNA的表达与胃癌大小、淋巴结转移和浸润深度密切相关(P＜0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度等无关(P＞0.05).并且Bmi-1 mRNA阳性表达者生存率明显低于阴性者.结论 Bmi-1基因在胃癌组织中表达状态与胃癌的生长和浸润转移关系密切,Bmi-1基因mRNA可望作为胃癌病情发展及指导临床治疗的标记物之一,Bmi-1 mRNA的测定有助于判断肿瘤预后.     

共刺激信号B7-1的缺失促进了胃癌生成及转移

目的：探索共刺激信号B7—1的表达缺失对胃癌生成及淋巴结转移的影响。方法：应用RT-PCR技术检测44例胃癌组织、癌旁组织标本中B7-1 mRNA的表达，分析其与胃癌病理学特征的关系。结果：所有癌旁胃组织都有B7—1基因的表达，而44例胃癌组织中只有8例有表达，癌旁正常胃组织与胃癌组织中B7—1基因表达率差异有显著性（X^2=9．14，P〈0．05）。有淋巴结转移的35例胃癌组织中，1例有B7—1基因表达，无淋巴结转移的9例胃癌组织中有7例检测到B7—1 mRNA的表达，有淋巴结转移的胃癌组织中B7—1 mRNA的表达率显著降低（X^2=23．66，P〈0．05）。结论：B7—1 mRNA表达缺失促进了胃癌生成及淋巴结转移。     

食管癌表达上调基因NADH氧化还原酶MLRQ亚基的研究及临床意义

目的研究在食管癌中差异表达明显的NADH氧化还原酶MLRQ亚基基因在食管癌中的表达,并探讨它在食管癌发生发展过程中的可能机制。方法利用微陈列技术方法获得一个在食管癌中的表达显著上调的NADH氧化还原酶MLRQ亚基基因,用RT PCR及Northern印迹从mRNA水平检测其在38对食管癌、7对贲门癌、14对胃癌、11对结肠癌和7对肝癌等消化系统肿瘤中的表达情况。结果(1)MLRQ基因在食管癌、贲门癌、胃癌、结肠癌和肝癌中显著上调者,分别为81.6%(31/38)、57.1%(4/7)、85.7%(12/14)、65.6%(7/11)、57.1%(4/7)。用X2检验,各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)在38对食管癌配对组织中,MLRQ基因上调与临床分期、肿瘤浸润程度、淋巴结转移及分化程度无相关性(均P>0.05)。结论MLRQ亚基基因在消化道肿瘤中表达上调。     

The association between PPP1R3 gene polymorphisms and type 2 diabetes mellitus

Objective To detect the relationship between the polymorphism of the glycogen-targeting r egulatory subunit of the skeletal muscle glycogen-associated protein phosphatas e 1 (PPP1R3) gene and type 2 diabetes by case-control study.Methods We genotyped the PPP1R3 gene Asp905Tyr polymorphism and a common 3’-untranslate d region AT (AU)-rich element (ARE) polymorphism in 101 type 2 diabetic patient s and 101 controls by oligonucleotide ligation assay (OLA) and polyacrylamide ge l elecrophoresis, respectively.Results Subjects with Tyr/Tyr genotypes whose body mass index (BMI)&lt;25 were used as the reference group.Those whose BMI25 with Asp905 had a 3.66-fold increase (95 % CI: 1.48-9.06, P=0.005) in type 2 diabetes risk.No association was fo und between 3’UTR ARE polymorphism and type 2 diabetes mellitus (OR=1.15; 95% C I: 0.62-2.14, P=0.65). Conclusion A joint effect between the Asp905 and BMI increases the risk of type 2 diabetes, and Asp905Tyr and ARE polymorphism of PPP1R3 gene are not the major diabetogeni c gene variants in Chinese population.     

Overexpression of Protein Phosphatase 2 Regulatory Subunit B″Alpha Promotes Glycolysis by Regulating Hexokinase 1 in Hepatocellular Carcinoma

ObjectiveTo investigate the regulatory relationship of Protein Phosphatase 2 Regulatory Subunit B″Alpha (PPP2R3A) and hexokinase 1 (HK1) in glycolysis of hepatocellular carcinoma (HCC).MethodsIn HepG2 and Huh7 cells, PPP2R3A expression was silenced by small interfering RNA (siRNA) and overexpression by plasmid transfection. The PPP2R3A-related genes were searched by RNA sequencing. Glycolysis levels were measured by glucose uptake and lactate production. QRT-PCR, ELISA, western blot and immunofluorescence assay were performed to detect the changes of PPP2R3A and HK1. Cell proliferation, migration and invasion assay were used to study the roles of HK1 regulation by PPP2R3A.ResultsRNA sequencing data revealed that PPP2R3A siRNA significantly downregulated the expression of HK1. PPP2R3A gene overexpression promotes, while gene silencing suppresses, the level of HK1 and glycolysis in HCC cells. In HCC tissue samples, PPP2R3A and HK1 were colocalized in the cytoplasm, and their expression showed a positive correlation. HK1 inhibition abrogated the promotion of glycolysis, proliferation, migration and invasion by PPP2R3A overexpression in liver cancer cells.ConclusionOur findings showed the correlation of PPP2R3A and HK1 in the glycolysis of HCC, which reveals a new mechanism for the oncogenic roles of PPP2R3A in cancer.     

FGFR4基因单核苷酸多态性和杂合性丢失在胃癌发病中的作用

目的 研究成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）基因在胃癌患者中的单核苷酸多态性（SNP）情况和杂合性丢失（LOH）的发生频率，探讨其在肿瘤发生发展和患者预后判断中的意义。方法 检测50例胃癌标本中FGFR4基因5个外显子区域6、9、13、16、18的SNP情况，并以SNP技术检测FGFR4基因外显子9区域内密码子388位点rs351855的LOH，分析FGFR4基因SNP和LOH与胃癌临床病理特征及患者生存率的关系。结果 FGFR4基因的外显子9区域第401密码子发生1例体细胞突变（R401C，C>T），34例胃癌发生编码区非同义SNP，GG、AG、AA三种基因型比例分别为32%、52%和16%。26例AG型杂合子胃癌患者中，rs351855位置LOH的发生频率为92.31%。LOH发生频率和Arg388等位基因的表达在不同肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、pTNM分期及患者生存率中的差异均无统计学意义（P>005）。结论 胃癌患者FGFR4第388密码子rs351855位点发生高频LOH，提示在其附近存在抑癌基因的缺失或失活。Arg388等位基因的表达和FGFR4基因rs351855位点LOH不直接影响胃癌的发展及患者的预后。     

p21WAF1基因多态性与胃癌的关系

目的探讨p21 WAF1基因缺失与多态性及其在胃癌发生中的意义.方法采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)法检测胃癌中p21 WAF1基因缺失与多态性.结果 PCR扩增显示, 30例胃癌和45例非胃癌标本均无p21 WAF1第2外显子缺失.PCR-RFLP 发现,胃癌和非胃癌p21 WAF1第2外显子多态性分别为27%(8/30)和9%(4/45), 差异有显著性(χ2=4.23,P<0.05) ,且8例具多态性胃癌标本中的正常胃粘膜亦具有这种多态性.结论胃癌中p21 WAF1基因无缺失,而存在多态性,p21 WAF1基因多态性与胃癌发生有关.     

靶向沉默PPP1R16A基因可抑制肝癌细胞的增殖

目的 观察和比较在人肝癌与癌旁组织中蛋白磷酸酶1调节亚基16A(protein phosphatase 1 regulatory subunit 16A,PPP1R16A)基因在基因组和转录水平的差异,探讨靶向沉默PPP1R16A基因对肝癌细胞HCC LM3增殖能力的影响.方法 收集106例肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR技术检测PPP1R16A基因的基因组和转录水平.体外合成PPP1R16A序列特异性小干扰RNA(siRNA),使用脂质体法转染肝癌细胞株HCC LM3.实验分si-16A组(针对PPP1R16A的特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、NC组(非特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、空白组(未转染siRNA的HCC LM3细胞),用实时荧光定量PCR检测PPP1R16A基因拷贝数和转录水平,用蛋白质印迹法检测PPP1R16A蛋白表达,用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,用流式细胞术检测细胞周期.结果 人肝癌组织中PPP1R16A基因的拷贝数和转录表达水平均高于癌旁组织(P＜0.01),且两者具有相关性(P=0.015).CCK-8实验和克隆形成实验显示,转染siRNA后,si-16A组细胞增殖低于NC组和空白组(P＜0.001).流式细胞术结果显示,si-16A组较NC组和空白组细胞周期被抑制.结论 肝癌组织中PPP1R16A的拷贝数发生扩增,基因转录上调.靶向沉默PPP1R16A能抑制肝癌细胞HCC LM3的增殖能力.提示PPP1R16A基因在肝癌中发挥癌基因的作用.     

变性高效液相色谱法筛选鼻咽癌相关基因单核苷酸多态性

目的 利用变性高效液相色谱法（DHPLC）结合测序筛选和鉴定鼻咽癌基因的单核苷酸多肽性（SNPs)。方法 PCR扩增30例鼻咽癌患者和28例正常对照者6p21.3区域基因PPP1R11，PP1R10，FLOT1，KIAA0170的4个外显子与1个内含子片断，采用DHPLC技术对扩增片断进行基因变异检测，将不同的类型PCR片断进行全序列测定并与参考序列对照分析。结果 在5个片断中初步鉴定出4个未见报道的新SNP位点，验证了4个已知的SNPs位点和基因型。结论 DHPLC预测结合全序列测序是一种高效，经济，简便，可靠的SNP筛选方法。     

MC1R在食管鳞癌细胞和组织中高表达

目的 通过分析MC1R在食管鳞癌细胞和组织中的表达水平及其与相关临床病理参数的相关性,探讨MC1R在食管鳞癌中的临床意义。方法 通过生物信息学分析MC1R在食管癌中的表达情况;以RT-PCR和Western blotting方法比较分析人食管上皮细胞BAr-T、人食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE150、KYSE510、TE-1、TE-13、EC9706、人胃癌细胞SGC7901及19对食管鳞癌组织和对应癌旁组织中 MC1R的表达水平;以IHC方法比较分析32对食管鳞癌组织切片和对应癌旁组织切片中MC1R的表达水平;使用t检验进行组间MC1R表达量的差异比较,使用Fisher 's精确检验分析MC1R表达水平与临床病理特征之间的关系。结果 生物信息学分析显示MC1R在食管癌组织中显著高表达（P<0.05）;食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE510、TE-13、EC9706和胃癌细胞系SGC7901中MC1R表达量高于食管上皮细胞（P<0.05）;食管鳞癌组织切片中MC1R相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。MC1R高表达现象主要存在于老年、胸中段和中分化食管鳞癌患者中,其与肿瘤T分期有关（P<0.05）,与年龄、细胞分化程度、肿瘤原发部位、TNM分期等临床病理参数无关（P>0.05）。结论 MC1R在食管鳞癌细胞系和组织中表达量显著升高,可能作为食管鳞癌诊断的辅助分子标志物。     

胃癌组织中Brg1基因突变及蛋白表达的研究

目的：研究Brg1基因在胃腺癌组织中突变及蛋白表达意义，探讨其与肿瘤发展的关系。方法：应用聚合酶链反应及单链构象多态性（PCR—SSCP）技术检测37例胃腺癌和正常胃组织中Brg1基因第4和16外显子的基因突变，同时应用免疫组化技术分析30例胃癌组织Brg1蛋白的表达，初步探讨其和胃癌发生、发展及预后的关系。结果：37例胃腺癌标本中，Brg1第4和16外显子的基因突变率为零。Brg1蛋白在胃癌中的表达率为76．67％（23／30）．与正常组织的表达率（44．44％）相比有明显增高，Brg1的表达与胃癌的浸润、淋巴结转移及分级分期均有关。结论：Brg1基因突变在胃癌中少见且不起主要作用，但其蛋白在胃癌中高表达并对胃癌的发生、发展起重要作用。Brg1的表达可作为判断胃癌恶性程度及预后的重要指标。