膜联蛋白A7与IGFBP2结合抑制肝癌细胞增殖

目的 分析膜联蛋白A7(ANXA7)与肝癌发生的相关性及筛选、鉴定ANXA7的相互作用分子,探讨ANXA7在肝癌发生中的机制.方法 通过实时定量PCR法检测48对肝癌与癌旁组织以及多种肝和肝癌细胞株中ANXA7表达量的差异,并通过肝癌细胞ANXA7过表达及特异性干扰抑制分析其对肝癌细胞增殖的影响.采用免疫共沉淀法筛选与ANXA7发生结合的蛋白,并以点突变法分析蛋白质相互作用的关键位点;用蛋白免疫印迹法分析了ANXA7对肝癌相关的重要信号通路中ERK1/2磷酸化水平的影响.结果 ANXA7在肝癌组织与肝癌细胞中均呈下调表达.胰岛素样生长因子结合蛋白2(insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP2)能与ANXA7蛋白发生特异性结合,且IGFBP2上的RGD序列是两者结合的关键位点.肝癌细胞中ANXA7表达上调能抑制肿瘤细胞增殖(P＜0.05),并能使IGFBP2介导的ERK1/2的磷酸化水平降低.下调ANXA7的表达可促进肝癌细胞增殖(P＜0.01),磷酸化ERK1/2的水平升高.结论 ANXA7可能作为一种抑癌基因,通过介导IGFBP2对ERK1/2磷酸化水平的影响参与对肝癌增殖的调控.     

电离辐射对精子质量影响的研究进展

随着电离辐射渗入到人们生活中的各个领域,其对人体健康的影响也愈发显著.研究表明增殖分化旺盛的系统对电离辐射的敏感程度较高,比如男性生殖系统,其作为易受电离辐射影响的系统之一,与后代健康水平息息相关.本文就电离辐射对精子浓度、活动度、形态以及对精子细胞DNA和染色体结构的影响及可能的损伤机制的研究进展进行综述,为电离辐射造成男性生殖系统损伤的治疗及防护提供新的策略.     

尖吻蝮蛇类凝血酶基因的克隆及生物信息学分析

为了获得蛇毒类凝血酶基因，本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5’和3’保守性序列设计了引物；通过RT—PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段，将该cDNA重组到pMD18-T载体中，利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。结果表明：该特异性片段中有一个783bp的开放阅读框架．其编码蛋白质序列与蛇的类凝血酶序列有98．5％的同源性，也具有蛇毒类凝血酶的典型特征。结论：本实验获得了一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶基因。     

血管内皮生长因子基因转染促进骨髓间质干细胞增殖的实验

目的：以基因转染为平台，利用脂质体将血管内皮生长因子基因转入骨髓间质干细胞，使其可以在作为种子细胞的同时。作为基因治疗的载体将血管内皮生长因子基因导人缺血组织，从而为探索一种更加有效的缺血性心脏病治疗方法提供实验室基础。 方法：实验于2004—07／2005-03在解放军第二军医大学医学遗传实验室及上海交通大学附属第一人民医院心内科实验室完成。①分离、培养、鉴定大鼠骨髓间质干细胞。②试验组用构建好的PcDNA3．1-VEGF进行基因转染，阳性对照组用PcDNA3．1空质粒进行转染，阴性对照组只加入培养液。③收集各组第1，3，5，7，9，11天的上清液，用ELISA法测定培养上清液中血管内皮生长因子的浓度；提取阳性克隆的细胞蛋白；进行Western blot分析；用四甲基偶氮唑盐法检测转染后血管内皮生长因子的表达对骨髓间质于细胞增殖的影响。 结果：①免疫组织化学示所培养细胞CD106^＋，CD34^-。②ELISA方法示质粒转染细胞后第2天，上清液中即可出现血管内皮生长因子浓度的增高，第5天时达到高峰，以后逐渐降低，10d后趋于稳定，但其浓度仍高于对照组。③Westem blot示转染组血管内皮生长因子蛋白浓度明显高于空质粒转染组和未转染组。④四甲基偶氯唑盐示转染后血管内皮生长因子的表达可以促进骨髓间质干细胞的增殖。 结论：血管内皮生长因子成功转染骨髓间质干细胞，血管内皮生长因子的表达促进了骨髓间质干细胞的增殖，从而可以将促血管生长因子治疗和干细胞移植有效的结合起来。     

结核抗原ESAT-6基因的克隆及在大肠埃希菌中的表达

目的：将结核分支杆菌ESAT抗原编码区基因克隆，并使其在大肠埃希菌中表达。方法：培养并抽提结核分支杆菌基因组，采用聚合酶链反应（PCR）扩增编码ESAT的全长cDNA，并插入到原核表达载体pGEX5T中，构建pGEX5T-ESAT重组质粒，IPTG诱导使该基因在k802菌中表达，并免疫印迹（Western blot)方法确证表达蛋白的特异性。结果：PCR扩增获得了单一的条带，大小约0.3kb；全自动测序与Genbank中登录的序列完全相同。获得了pGEX5T-ESAT重组子并在k802菌中表达，该蛋白可被结核病患者血清特异地识别。结论：扩增和克隆结核杆菌ESAT抗原的全长cDNA并在大肠埃希菌中获得表达，为进一步研究其在结核病诊断和防治中的应用打下了基础。     

八年制模拟遗传咨询教学中建构主义学习理论的应用

根据临床遗传学的学科特点与学生实际情况,将模拟遗传咨询与建构主义学习理论相结合,设置了基于建构主义学习理论来模拟遗传咨询的教学课程,创造了良好的教学环境,培养了学生的综合能力和实践感知,提高了临床遗传学的教学效率与质量。     

猪囊尾蚴抗原cC1与γ-干扰素融合蛋白在大肠杆菌中的表达

目的： 构建含猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 与猪γ 干扰素（ Ｉ Ｆ Ｎ γ） 的融合表达载体。方法： 从已克隆的含人猪囊尾蚴共通抗原ｃ Ｃ１ 的质粒中, 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增出含酶切位点及接头的ｃ Ｃ１ 和 Ｉ Ｆ Ｎ γｃ Ｄ Ｎ Ａ, 两ｃ Ｄ Ｎ Ａ 经接头融合后构建成融合形式的原核表达载体转入大肠杆菌 Ｘ Ｌ Ｂｌｕｅ。结果： 经酶切分析, 表明重组载体中含１５ｋｂ 插入片段。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示一５２ ｋ Ｄａ 的诱导产物。结论： 猪 Ｉ Ｆ Ｎ γ和猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合ｃ Ｄ Ｎ Ａ 在大肠杆菌中获得表达。     

表达ROG的重组腺相关病毒载体的构建及高滴度病毒的制备

目的:观察三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)患者痛支神经的有髓纤维脱髓鞘处是否有河豚毒素不敏感型(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)hNav1.8通道蛋白的异常表达,探讨其与三叉神经痛的关系.方法:以6例原发性TN第三支痛经保守治疗无效行手术治疗患者的下牙槽神经为研究对象,以舌颌颈联合根治术患者的耳大神经、下牙槽神经为阴性和正常对照,以鼠脊神经为阳性对照,运用免疫组化的方法观察hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支神经与对照神经标本超微结构中的表达.结果:hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支神经的有髓纤维脱髓鞘处有大量表达,鼠脊神经轴突内有少量表达,而正常下牙槽神经及耳大神经中无表达.结论:hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支有髓纤维脱髓鞘处的异常表达可能与TN的发病有关.     

核酸疫苗pcDNA3-cC1小鼠体内表达的血清学分析

抗原cC1 是从猪囊尾蚴cDNA 文库中以囊虫病患者、病猪血清为探针筛选出的抗原蛋白, 经免疫学检测证实为具有较高特异性的诊断用抗原[ 1] .在前期的研究[ 1] 中,我们将全长cC1 cDNA 插入真核表达质粒载体pcDNA 3, 构建了重组质粒pcDNA3-cC1.该DNA疫苗免疫仔猪后,能有效诱导仔猪的免疫保护效应.本研究选择该DNA疫苗为分析对象,旨在建立一种早期预测DNA疫苗免疫效果的方法.     

营造研究生创新成才的微环境

如何培养具有探索与创新素质的高层次人才是我国高等教育面临的现实课题。从研究生培养的微环境角度对影响研究生创新成才的要素进行了探讨,通过对创新思维的培育、创新氛围的建立、创新素质的提高等微环境要素的剖析,阐明了营造创新成才微环境在研究生培养中的重要作用。