靶向沉默PPP1R16A基因可抑制肝癌细胞的增殖

目的 观察和比较在人肝癌与癌旁组织中蛋白磷酸酶1调节亚基16A(protein phosphatase 1 regulatory subunit 16A,PPP1R16A)基因在基因组和转录水平的差异,探讨靶向沉默PPP1R16A基因对肝癌细胞HCC LM3增殖能力的影响.方法 收集106例肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR技术检测PPP1R16A基因的基因组和转录水平.体外合成PPP1R16A序列特异性小干扰RNA(siRNA),使用脂质体法转染肝癌细胞株HCC LM3.实验分si-16A组(针对PPP1R16A的特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、NC组(非特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、空白组(未转染siRNA的HCC LM3细胞),用实时荧光定量PCR检测PPP1R16A基因拷贝数和转录水平,用蛋白质印迹法检测PPP1R16A蛋白表达,用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,用流式细胞术检测细胞周期.结果 人肝癌组织中PPP1R16A基因的拷贝数和转录表达水平均高于癌旁组织(P＜0.01),且两者具有相关性(P=0.015).CCK-8实验和克隆形成实验显示,转染siRNA后,si-16A组细胞增殖低于NC组和空白组(P＜0.001).流式细胞术结果显示,si-16A组较NC组和空白组细胞周期被抑制.结论 肝癌组织中PPP1R16A的拷贝数发生扩增,基因转录上调.靶向沉默PPP1R16A能抑制肝癌细胞HCC LM3的增殖能力.提示PPP1R16A基因在肝癌中发挥癌基因的作用.     

应用微阵列芯片分析草酸钙结晶肾损伤中LncRNA表达谱的差异

目的:利用微阵列芯片对结晶组小鼠和正常组小鼠的基因表达谱进行比对分析,筛选出差异基因,探讨lncRNA与肾结石的关系。方法:将6只C57BL/6雄性小鼠随机分为结晶组和正常组,两组腹腔分别注射50 mg/kg生理盐水和100 mg/kg乙醛酸盐。7 d处死全部小鼠,对两组小鼠的肾组织,提取总RNA后进行差异lncRNA的筛选、聚类分析以及小鼠lncRNA与人同源性分析,采用实时定量RT-PCR验证人鼠同源性lncRNA。结果:芯片结果显示差异表达lncRNA共376个,其中结晶组表达上调154个,下调222个;差异表达mRNA共3 062条,上调1 914条,下调1 148条。结论:Sprr2c、CHCHD4P4可能参与肾结石发生的调控。     

LncRNA-ATB在草酸钙结晶诱导的HK-2细胞损伤、增殖抑制和上皮-间质转化中的作用

目的探讨长链非编码RNA lncRNA-ATB在草酸钙结晶性肾细胞损伤中的作用。方法以一水草酸钙(COM)结晶诱导HK-2细胞损伤为模型,应用短发夹RNA(shRNA)慢病毒构建干扰lncRNA-ATB表达的稳转细胞株;qRT-PCR检测lncRNA-ATB的表达;qRT-PCR和Western-blot检测上皮-间质转化(EMT)标志物的表达;CCK-8试剂盒检测细胞增殖;LDH试剂盒检测细胞损伤。结果 COM刺激的HK-2细胞中lncRNA-ATB表达显著升高(P<0.05),细胞发生损伤,增殖受抑制且发生EMT;COM刺激后HK-2细胞的上皮细胞标志物E-cadherin和ZO-1表达水平明显降低、而间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin表达水平显著上升(P<0.01)。干扰lncRNA-ATB的表达显著缓解COM刺激所致的细胞损伤(P<0.01)、增殖抑制(P<0.01)和EMT(P<0.05)。结论LncRNA-ATB可促进COM诱导的HK-2细胞损伤、增殖抑制和EMT,提示其可能参与调控草酸钙结晶性肾损伤。     

草酸钠结晶肾损伤肾小管上皮细胞中骨桥蛋白相关长链非编码RNA的差异表达

目的 检测草酸钠诱导的人肾小管上皮细胞结晶肾损伤模型中与骨桥蛋白(OPN)相关的长链非编码RNA(lncRNA)的差异表达,并探讨OPN相关lncRNA在结晶肾损伤发病中的作用.方法 利用草酸钠(20 mmol/L)刺激人肾近曲小管上皮细胞HK-2建立草酸钠诱导的结晶肾损伤肾小管上皮细胞模型.运用RNA干扰技术对其转染OPN小干扰RNA构建OPN敲低细胞模型(OPN-siRNA组),对照组细胞转染阴性随机对照序列(NC-siRNA组).采用Arraystar公司提供的人类全基因组lncRNA芯片(V4.0)检测两组结晶肾损伤肾小管上皮细胞模型中与OPN相关的lncRNA和mRNA的差异表达水平,并采用生物信息学方法分析lncRNA芯片结果.结果 全基因组lncRNA芯片结果显示草酸钠诱导的结晶肾损伤肾小管上皮细胞模型中与OPN相关的差异表达lncRNA共583个,其中OPN-siRNA组表达上调354个、下调229个;差异表达mRNA共235个,上调139个,下调96个.生物信息学分析结果显示差异表达lncRNA参与结晶肾损伤中细胞生长、酶活性调节等多种生物学过程.结论 草酸钠体外诱导的结晶肾损伤肾小管上皮细胞模型中存在OPN相关的差异表达的lncRNA.     

CBL、PBL教学法与传统教学法在临床遗传学教学中的应用

目的 探讨案例教学法(CBL)、问题驱动教学法(PBL)在临床遗传学教学中的应用效果。方法 选取第二军医大学2013级临床医学五年制专业60名学生作为研究对象,按教学方法不同分为2组,每组30名学生。实验组采用CBL、PBL教学方法,对照组采用传统教学法。分别对学生进行3个学时的授课教学。最后对学生采取满意度问卷调查和成绩考核2种形式来评价教学效果。结果 CBL、PBL教学法培养的实验组学生,成绩总体优于传统教学法培养的对照组学生。且学生对CBL、PBL教学法的评价满意率在80%以上。结论 将CBL、PBL应用于临床遗传学教学中效果显著,有助于充分调动学生自主学习的积极性,促进理论知识和实践技能相结合。     

B型尿钠肽在心力衰竭危险分层及预后判断中的价值

目的研究B型尿钠肽水平在心里衰竭危险分层以及预后判断中的价值。方法将来我院就诊的85例心力衰竭患者作为观察组,进行常规体检检查的70例健康人作为对照组,测量观察组和对照组的B型尿钠肽水平;将观察组按照B型尿钠肽水平分为三组:A组:B型尿钠肽水平<100 pg/mL,B组:B型尿钠肽水平在100³00 pg/mL范围内,C组:B型尿钠肽水平>300 pg/mL,观察三组患者在2个月时间内再次住院及心力衰竭病死率,并根据患者左室射血指数(LVEF)和血清尿酸(UA)水平,分析B型尿钠肽在心里衰竭的危险分层以及预后判断价值。结果观察组B型尿钠肽水平明显高于对照组,对比具有统计学意义(P<0.01);患者B型尿钠肽水平越高,2个月内再次住院率及心力衰竭病死率越高(P<0.05);随着B型尿钠肽水平上升,患者左室射血指数下降、血清尿酸水平上升。结论血浆中B行尿钠肽水平与心功能成负相关关系,与患者再次住院率和心力衰竭病死率有正相关关系,B型尿钠肽水平对于心力衰竭危险分层和预后判断具有重要的价值。     

消除小鼠肝脏冰冻切片自发荧光4种封闭方法的比较

目的 通过对小鼠肝脏冰冻切片进行不同的封闭处理,探寻消除小鼠肝脏自发荧光的最佳方法,以降低对免疫荧光阳性信号的干扰,提高免疫荧光结果的准确性。方法 （1）经脾静脉注射肝脏荷瘤裸小鼠：将Hepa1-6-GFP细胞通过脾脏注射方法使其在雄性无胸腺BALB/c裸小鼠肝脏定植,并将肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行AB液（内源性生物素封闭液）、blocking、AB液+blocking、丙酮+AB液+blocking封闭处理,然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。（2）C57BL/6小鼠：对C57BL/6小鼠肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行上述4种封闭处理,用F4/80标记肝巨噬细胞（Kupffer细胞）,然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。结果 肝脏组织冰冻切片免疫荧光染色时,4种封闭处理都可以减弱肝脏切片的自发荧光,但丙酮+AB液+blocking封闭处理效果最佳。结论 丙酮+AB液+blocking联合应用对小鼠肝脏组织冰冻切片自发荧光的消除效果最好。