胃癌组织中IQGAP1的表达及意义

目的 检测含有IQ模体的Ras GTP酶活化蛋白1(IQ motif-containing GTPase activating protein 1, IQGAP1)在胃癌组织中的表达,分析其与临床病理参数的相关性。 方法 分别用RT-PCR和western blot,对29例胃癌患者的癌组织及其对应癌旁组织进行IQGAP1 mRNA和蛋白质表达的检测,分析胃癌与癌旁组织IQGAP1的表达差异及其与临床病理参数的关系。 结果 胃癌组织中IQGAP1的表达高于对应癌旁组织者的为75.9%(22/29);胃癌组织IQGAP1的表达在基因和蛋白质水平上均与肿瘤分化程度呈负相关(P<0.05)。 结论 胃癌组织中IQGAP1的表达可作为癌分化程度的参考指标。     

2型糖尿病患者血浆血小板活化因子和血清可溶性细胞间粘附分子-1测定的临床意义

目的　研究 2型糖尿病患者血浆血小板活化因子 (PAF)和血清可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)水平的变化及其临床意义。方法　采用ELISA法和生物学方法分别测定 5 5例 2型糖尿病患者 (其中糖尿病并发冠心病患者 2 4例 ,糖尿病未并发冠心病患者 31例 )和 32名健康人 (对照组 )血浆PAF和血清sICM 1水平。结果　糖尿病组PAF和sICAM 1水平与对照组PAF和sICAM 1相比均显著升高 (P <0 0 1) ;糖尿病并发冠心病组PAF和sICAM 1水平均显著高于糖尿病未并发冠心病组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;糖尿病患者PAF与sICAM 1水平呈正相关 (r=0 .6 37,P <0 0 1)。结论　血浆PAF和血清sICAM 1在糖尿病及其并发症的发生、发展中起作用 ,其测定可能有助于糖尿病及其并发症的早期诊断和病情的监测。     

人胚胎骨髓MSC及其突变株F6细胞DAPK基因表达及启动子甲基化检测

摘要：目的：研究人胚胎骨髓间充质干细胞（fetal mesenchymal stem cells, FMSC）及其突变肿瘤细胞F6死亡相关蛋白激酶（deathassociated protein kinase,DAPK）基因的表达及启动子区域甲基化。 方法：用RT-PCR和甲基化特异性PCR（methylationspecific PCR, MS-PCR）技术对FMSC及F6细胞系DAPK 基因的表达和启动子甲基化状态进行检测,并对甲基化产物测序鉴定。 结果：DAPK基因在FMSC中表达而在F6中不表达。通过MS-PCR检测证实F6中DAPK基因发生甲基化,FMSC中DAPK基因发生未完全甲基化。 结论：DAPK基因启动子区域发生甲基化可能是促使其基因表达下调的重要机制,在FMSC突变成F6肿瘤细胞过程中发挥重要作用。     

低浓度5-氟尿嘧啶对胃癌细胞生物学特性的影响

目的探讨低浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)对胃癌细胞转录因子OCT4、SOX2及细胞增殖能力的影响。方法用MTT法检测并确定5-FU对胃癌细胞系MGC803、SGC-7901的半数抑制浓度(IC50),实时荧光定量PCR及western blot检测经不同浓度的5-FU处理后胃癌细胞转录因子OCT4、SOX2表达水平,平板克隆形成实验分析胃癌细胞增殖能力的改变情况。结果5-FU对MGC803、SGC-7901细胞的IC50分别为(28.82±1.25)和(23.95±1.34);低浓度5-FU(0.5、1μmol/L)处理后,胃癌细胞MGC803、SGC-7901中转录因子OCT4、SOX2在mRNA及蛋白质水平中的表达均增强,差异具有统计学意义(P0.05);平板克隆形成实验结果表明,经低浓度5-FU(0.5、1μmol/L)作用后胃癌细胞的增殖能力变强,形成的克隆数增多,差异有统计学意义(P0.05);但5-FU浓度为2μmol/L时OCT4和SOX4的表达有不同程度的减弱,且克隆形成能力也有下降。结论低浓度5-FU能增强胃癌细胞转录因子表达、促进胃癌细胞增殖。     

胃癌患者血清外泌体中DANCR表达及其临床意义

目的检测胃癌患者血清外泌体(exosome)中抗分化非编码RNA(DANCR)的表达水平并分析其临床应用价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞培养上清和胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平,分析其与临床病理资料的相关性,绘制ROC曲线评价其诊断效能。结果 DANCR在人胃癌细胞系HGC-27中表达水平(4.43±0.37)明显高于胃黏膜上皮细胞(1.01±0.01),差异有统计学意义(P0.05)。HGC-27细胞培养上清exosome中DANCR表达水平(3.06±0.14)明显高于GES-1细胞(1.01±0.20),差异有统计学意义(P0.05)。DANCR在胃癌患者血清exosome中的平均含量[5.060(1.380,22.785)]较胃良性疾病患者[0.535(0.340,1.380)]和体检健康者[1.200(0.605,1.655)]明显升高(Z分别为-3.409,-4.229,P均0.01),且与肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移相关。胃良性疾病患者与体检健康者相比,血清exosome中DANCR含量差异无统计学意义(Z=-1.308,P0.05)。胃癌患者血清exosome中DANCR的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.777,95%可信区间(CI)为0.678~0.876,cut-off值2.50,敏感性为68.6%,特异性为84.4%。结论胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平升高,有望成为胃癌诊断的新指标。     

SALL4在肿瘤中的作用及临床应用价值

婆罗双树样基因-4(sal-like 4,SALL4)是维持胚胎干细胞自我更新和多能性的重要转录因子。近年来,研究发现SALL4在肿瘤发生、发展中发挥重要作用。SALL4通过调控下游基因表达和信号通路转导,参与肿瘤生长、转移、耐药和复发。SALL4在多种肿瘤组织中存在过表达,且其表达水平与肿瘤进展和患者预后相关。靶向抑制SALL4的表达及其生物学功能具有明显抗肿瘤效果。本文就SALL4在肿瘤中的作用机制及其临床应用价值作一综述。     

FP248基因表达检测在白血病和肿瘤诊断中的意义

目的 用real-time PCR和RT-PCR检测FP 248 mRNA表达,研究其在白血病和肿瘤诊断中的意义.方法 用real-timePCR和RT-PCR检测肿瘤细胞株(SGC-7901、A549、95D、SW480、U937、PC3)和白血病(ALL、CML、AML)患者骨髓或外周血以及胃癌等消化道肿瘤患者癌组织中FP248 mRNA的表达水平;用RT-PCR技术检测消化道肿瘤患者外周血单个核细胞(PB-MC)FP 248 mRNA的表达.结果 SGC-7901细胞株FP 248 mRNA强阳性,A549和95D细胞弱阳性,其他细胞株阴性;ALL、CML、AML患者骨髓及PBMC FP 248表达上调;胃癌、直肠癌、结肠癌患者癌组织中FP 248 mRnNA的表达高于癌旁组织,食道癌组织为阴性;胃癌、结肠癌和直肠癌患者PBMC未检测到FP 248 mRNA.结论 FP 248的表达可能在白血病和消化道肿瘤的发生发展中起重要作用;检测该基因的表达可能有助于白血病和消化道肿瘤的诊断.     

人骨髓间质干细胞来源外体的分离鉴定及生物学特性

目的 分离纯化人骨髓间质干细胞（MSCs）来源的外体（exosome）,并鉴定其生物学特性。 方法 收集人骨髓MSCs培养上清,采用超滤及梯度离心法分离并纯化exosome,通过透射电镜观察其形态,SDS-PAGE电泳初步分析exosome蛋白质组成,western blot检测exosome包含的相关蛋白质,用流式细胞术检测其表面标志CD44、CD29等。 结果 骨髓来源的MSCs能够分泌exosome,电镜下呈椭圆或碟状的囊泡结构,直径约40~100 nm。exosome内含多种蛋白质成分,具有MSCs膜脂质成分,能与PKH26脂质染料结合,并表达MSCs表面黏附分子CD44、CD29。 结论 人骨髓MSCs能够分泌exosome,采用超滤及梯度离心法可以成功从MSCs培养上清中分离纯化exosome,MSCs分泌的exosome具有MSCs的胞膜及胞质蛋白组分。本研究可为进一步开展人骨髓MSCs来源exosome的生物学特性及其在组织损伤修复中的作用和机制研究提供实验基础。     

miR-146b在高糖环境下对肾小球系膜细胞的作用研究

目的探讨miR-146b在高糖环境下对肾小球系膜细胞的作用。方法构建高糖培养环境,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-146b在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)、足细胞(podocyte)及肾小球系膜细胞(HBZY-1)中的表达水平;western blot分析过表达/敲减miR-146b前后,HBZY-1细胞中YAP及磷酸化YAP(p-YAP)蛋白的表达水平;细胞免疫荧光法检测YAP蛋白的表达情况。结果体外经高糖刺激后,HBZY-1细胞中miR-146b的表达水平(2.197±0.166)明显升高(t=7.215,P0.01)。western blot结果显示,高糖组YAP蛋白(0.753±0.008)的表达水平升高(t=32.17,P0.001),p-YAP蛋白(0.372±0.005)的表达水平降低(t=39.56,P0.001);免疫荧光结果显示,高糖组YAP蛋白荧光强度(53.620±4.229)明显升高(t=5.410,P0.01)。过表达miR-146b后,western blot结果显示,YAP蛋白(0.883±0.005)表达上调(t=10.71,P0.001),而p-YAP蛋白(0.606±0.006)表达下调(t=44.16,P0.001);免疫荧光结果显示,YAP荧光强度(25.70±1.589)增强(t=10.45,P0.001)。敲减miR-146b后,western blot结果显示,YAP蛋白(0.706±0.002)表达下调(t=22.15,P0.001),p-YAP蛋白(0.774±0.003)表达上调(t=25.61,P0.001);免疫荧光结果显示,YAP荧光强度(8.900±1.022)减弱(t=11.56,P0.001)。结论 miR-146b在高糖刺激的HBZY-1细胞中表达上调,可能通过调控YAP信号参与肾细胞损伤。