食源性致病菌六联融合毒素的构建及免疫学特性研究

[目的]构建4种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体,制备六联融合毒素的血清抗体. [方法]采用柔性Linker序列(G-G-G-G-S)对目的基因进行串联(HblA-VT1B-SEA-VT2B-BoNTaHc-SEB),构建重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中进行表达,将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体,利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性. [结果]成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中成功表达,37℃表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量10.2%),基因序列全长3 384bp,编码1 127个氨基酸,蛋白分子量为127 205,测序结果与设计序列一致性为100%.ELISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素F6与4种食源性致病菌有良好的反应原性,与多种非目标菌不反应. [结论]成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒及制备了抗血清,为利用融合毒素的方法检测食源性致病菌,进而建立食源性致病菌广谱、快速的检测方法奠定基础.     

食物中毒菌多联融合毒素Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB的表达及免疫学特性研究

目的构建食物中毒菌多联融合毒素基因及重组表达载体,制备抗5种毒素的血清抗体。方法采用一定的linker序列(G-P-G-P-G)将克隆的3种食物中毒菌的5个毒素基因片段进行串联,并定向克隆到表达载体pET-22b(+)的NcoI和XhoI位点之间,构建五联融合毒素基因及重组表达载体,表达产物经切胶回收初步纯化后免疫獭兔,制备抗血清,利用ELISA和琼脂扩散试验检测抗体和5种毒素反应的特异性和敏感性。结果构建了重组融合毒素(命名为F5)Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB基因和重组表达载体F5-22b,且在表达宿主菌E.coliBL21中得到有效表达(9.90%),基因序列全长2937bp,编码成熟蛋白979个氨基酸,融合蛋白分子量112.369ku,测序结果与设计序列(GenBank)100%同源。表达产物经初步纯化后免疫獭兔获得抗五种毒素的血清抗体,且具有较高的特异性和敏感性。结论成功构建了融合毒素基因,获得了抗五种毒素的血清抗体,本实验结果为下一步建立食品广谱、快速免疫学检测新方法奠定了基础。     

重金属镉单克隆抗体的制备

重金属对环境及人类存在潜在的持续的毒害作用,建立一种规范的程序,对重金属实施有效的监测。传统的重金属检测方法多采用化学方法检测,如原子吸收光谱分析（atomic abs orption spectroscopy, AAS）、电感耦合等离子发射光谱（inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy, ICP-AES）等,这些方法需要大量的样品预处理,     

单克隆抗体在食品检测中的应用

作者对单克隆抗体在食品检测中的应用进行了文献复习。迄今为止,对一些重要的食源性病原体及其产物,如细菌、细菌毒素、真菌毒素以及寄生虫等,已制备出多种单克隆抗体,用于动物的宰前诊断、食品检测及食物中毒的诊断,已显示出胜过常规使用(多克隆抗体)的免疫学方法,具有广阔的应用前景。在食品抗原分析上,一些难以用已有的方法解决的问题,有希望通过单克隆抗体技术得到解决。     

肉品中猪丹毒杆菌的快速检验

利用含猪丹毒免疫血清、吖啶橙、卡那霉素、叠氮钠及蚕蛹浸出液等混合配制的增菌培养基,进行猪丹毒杆菌的增菌培养,结合荧光菌团检查,在含菌量为5×10~2～5×10~3cfu/g时。经37℃培养12h,即可呈现阳性结果。     

食品中单核细胞增多性李氏杆菌的研究现状

在食品安全性方面,单核细胞增多性李氏杆菌是每个人都关心的食源性病原菌,已出版了两本专著和发表许多综述。这里主要讨论三个方面的最新研究现状,即方法学、控制和法规方面的研究现状。在方法学上由于篇幅所限,只能作以简要探讨。     

李氏杆菌的流行病学及其致病机理（1）

单核细胞增多性李氏杆菌(Listeriamonocytogenes,以下简称L·M)是一种危害严重的人畜共患病病原微生物。自1926年Murray等提出其对人畜致病性以来,各国大多侧重于该菌在动物临床疫病及防治的研究。近几年来,世界各地,特别是欧美国家均发现经食品感染L·M患者,并呈增长趋势,使人们逐渐认识到该菌在食源性致病菌中的重要地位,被     

大田软海绵酸液相色谱串联质谱检测方法的研究

目的:利用高效液相色谱-串联质谱法建立海产品中大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)的检测方法。方法:贝样品提取液经AccuBondⅡSPE silica固相萃取小柱预分离和富集,用三级四极杆串联质谱(MS/MS)作为HPLC的检测器,使用正离子电喷雾(ESI)电离方式,多反应监测(MRM)扫描模式,选择母→子离子对m/z827→m/z723,m/z827→m/z809作为定量检测的离子对,HPLC的流动相为乙腈:1%甲酸-水(体积比70:30),色谱柱为Agilent Extend-C18(2.1×150 mm,Φ5.0μm),对OA标准品及加标样品和实际样品进行HPLC-MS/MS检测。结果:方法线性回归方程为Y=193.07X-780.6(Q1/Q3:m/z827.4→723.5);Y=83.021X-335.6(Q1/Q3:m/z827.4→809.5),相关系数r2均为0.9991;线性范围为10~800μg/L。样品平均回收率为83.99%,平均RSD为4.34%。结论:建立的HPLC-MS/MS方法灵敏、快速、准确,可用于海产品中贝类样品OA限量标准检测。