犬全心肌缺血与缺血—再灌注损伤的超微结构立体定量观察

给三只犬在体外循环下主动脉阻断前、阻断后60min及再灌注45min取心肌活体做电镜标本,测定线粒体比表面(Specific surface)以衡量和比较心肌损伤。结果表明,缺血60min心肌无明显损伤,再灌注45min表现有广泛性和较严重的线粒体损伤,称缺血再灌注损伤。减少缺血/再灌注损伤是当前心肌保护工作中的中心课题。     

体外循环中去白细胞血再灌注对犬缺血心肌能量代谢的影响

目的 观察去白细胞血再灌注对犬体外循环(CPB)中心肌能量代谢的影响.方法 18只犬随机分为对照组、全血组和去白细胞血组(去白组).分别于CPB前、阻断40 min、阻断60 min、开放30 min和开放60 min时,取心肌进行腺苷酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)和线粒体肿胀度检测.结果 去白组在阻断60 min、开放30 min和60 min时SOD、GSH-PX、腺苷酸含量高于对照组和全血组(P＜0.01),而MPO、MDA和线粒体肿胀度均低于对照组和全血组(P＜0.01).结论 CPB中心肌能量代谢障碍,而应用去白细胞血再灌注缺血心肌能够明显改善缺血心脏的能量代谢,保护线粒体的结构与功能,从而减轻心肌缺血再灌注损伤.     

丹参对心脏缺血停跳时心肌保护效能的研究

作者观察丹参对缺血停跳心肌的保护效能。15只狗按不同成份心肌保护灌注液分四组进行体外循环,并阻断主动脉120分钟后,比较阻断前后心肌电机械活动和超微结构的变化。以高钙液(1.71克/升)灌注的动物,在心肌缺血停跳120分钟后,各项心功能指标均显著降低,尤以主动脉压、左室收缩压、每搏输出量和每分输出量(P<0.05),心肌超微结构亦出现严重的损伤改变。其余含丹参液的三组心功能和超微结构均未见严重损伤。说明丹参对缺血停跳心肌有一定的保护作用。根据实验结果推测丹参对心肌可能有类似钙通道阻滞剂作用。     

心肌缺血-再灌注损伤的超微结构变化

目的：观察犬急性心肌缺血－再灌注损伤的早期超微结构改变,探讨急性心肌缺血－再灌注损伤所致急死的形态学基础。方法：复制犬急性心肌缺血－再灌注损伤动物模型,在透射电镜下观察心肌纤维、线粒体、内质网和微血管结构变化。结果：缺血30min再灌注120min,心肌细胞线粒体轻度肿胀,基质内可见絮状致密体;缺血60～90min再灌注120min,心肌细胞线粒体嵴断裂,基质内出现絮状致密体和颗粒状致密体。微血管内皮细胞肿胀,血管腔狭窄。结论：再灌注可使缺血30min心肌超微结构得到部分恢复,加重缺血60～90min心肌超微结构改变。     

七氟烷缺血后处理的心肌保护作用及其机制

已有大量证据表明经典的机械性缺血后处理对心肌缺血/再灌注损伤具有确切的同缺血预处理相似的保护作用,并已在临床上运用。实验研究表明,七氟烷缺血后处理作为抗心肌缺血/再灌注损伤的一种新方法,可减少再灌注心肌的梗死面积、减轻线粒体损害,以及改善再灌注后心脏的血流动力学等,有一定的应用前景。其心肌保护作用涉及复杂的机制,如阻断线粒体通透性转运孔、激活凝脂酰肌醇3-激酶、细胞外信号调节激酶1/2以及线粒体ATP敏感性K通道等。     

硫酸锌预处理对大鼠心脏缺血/再灌注损伤心肌超微结构的影响

目的观察硫酸锌预处理对成年大鼠缺血再灌注损伤心肌的超微结构影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分成4组（n=10）,即正常组（N组）、缺血/再灌注组（C组）、硫酸锌预处理组（Zn组）、缺血预处理组（IPC组）。建立SD大鼠缺血再灌注损伤模型,用透射电子显微镜观察心肌组织的超微结构,并进行线粒体评分。结果 Zn组、IPC组、N组超微结构损伤程度及线粒体评分低于C组（P〈0.05）。Zn组、IPC组和N组心肌超微结构损伤及线粒体评分差异无统计学意义（P=1.00）。结论缺血/再灌注可对心肌细胞超微结构造成严重损伤,硫酸锌预处理和缺血预处理均可减轻缺血再灌注所致的心肌细胞超微结构损伤,由此可推测硫酸锌预处理可以产生心肌保护作用。     

丹参多酚酸对大鼠缺血心肌线粒体酶的影响

目的:探讨丹参多酚酸对大鼠心肌缺血再灌注过程中线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的影响。方法:采用健康Wistar大鼠(n=40)建立Langendorff离体心脏灌注模型,并分为4组。对照组用Krebs液持续灌注120 min;缺血再灌注组平衡30 min后全心缺血30 min,再灌注60 min;丹参多酚酸预处理组平衡5 min后加入丹参多酚酸使其在灌流液中终浓度为14μmol/L,持续灌注25 min后全心缺血30 min,再灌注60 min;丹参多酚酸后处理组平衡30 min后全心缺血30 min,加入丹参多酚酸使其在灌流液中终浓度为14μmol/L,再灌注60 min。TTC染色观察心肌梗死面积,并用心肌梗死面积、乳酸脱氢酶(LDH)活性和心脏血流动力学(包括心率、主动脉流量、冠状动脉流量和心输出量)的变化评估大鼠心肌的损伤程度。利用差速离心法提取线粒体,并通过紫外分光光度法测定心肌线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性。结果:丹参多酚酸预处理组的心肌梗死面积和LDH活性均显著低于缺血再灌注组([24.47±2.14)%比(34.30±2.31)%、(81.46±13.39)U/g比(142.6±6.46)U/g,均P<0.05],缺血再灌注组与后处理组无明显差异。丹参多酚酸对缺血再灌注心肌的血液动力学没有明显作用,只是冠脉流量有较小幅度的增加。丹参多酚酸预处理组线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性显著高于缺血再灌注组([6.12±0.42)U/mg比(4.29±0.28)U/mg、(3.42±0.16)U/mg比(2.62±0.96)U/mg,均P<0.05],而与对照组无明显差异。丹参多酚酸后处理组线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性与缺血再灌注组无统计学差异。结论:丹参多酚酸可以维持心肌线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性,通过降低缺血再灌注对心肌线粒体的损伤保护心肌。     

肝缺血再灌注细胞损伤机理探讨

本文在SD大鼠肝缺血45、60分钟再灌注0、10、60、120分钟不同时限,同步观察肝细胞内游离钙浓度([Ca~(++)]i),肝组织脂质过氧化自由基ROO幅值、SGPT和肝细胞超微结构病理变化。结果:缺血45分钟再灌注10分钟可见[Ca~(++)]i明显增加(P<0.05),此时ROO幅值升高不显著(P>0.05),以后二者随缺血及再灌注时间延长而增高,呈直线正相关(P<0.01)。缺血60分钟再灌注60～120分钟[Ca~(++)]i骤升并持续≥10~(-6)M,ROO幅值亦显著增加,细胞出现不可逆性损伤的病理改变。认为Ca~(++)细胞内超载及随后ROO大量生成所致膜损伤作用是肝缺血再灌注细胞损伤主要因素。     

缺血后处理对缺血/再灌注心肌保护作用的研究

缺血后处理是指在心肌再灌注之前进行数次短暂再灌注/缺血的循环,是近年提出的一种新的减轻缺血/再灌注损伤的方法。它具有同缺血预处理相似的心肌保护效应。后处理的这些保护作用可能和内源性活性物质如腺苷、一氧化氮和阿片肽增多、蛋白激酶的活化、线粒体的ATP敏感性钾通道开放和线粒体通透性转换孔道关闭有关。现就缺血后处理的发现、心肌保护机制和临床应用予以简要综述。     

无创性肢体缺血预处理对缺血心肌的保护作用

目的 验证在远距离预处理中抑制线粒体钙单向转运体对缺血、再灌注心肌的保护作用.方法 结扎冠脉左前降支使心脏局部缺血30 min,然后再灌注120 min形成缺血/再灌注损伤模型.分别应用远距离预处理、线粒体钙单向转运体抑制剂(钌红)、线粒体钙单向转运体激动剂(精胺、SB202190)进行干预.远距离预处理采用右股动脉结扎5 min,再灌注5 min,反复3个循环实现.再灌注过程中测量平均动脉压,心率,血浆乳酸脱氢酶水平,结束后测量心肌梗死面积.结果 与缺血再灌注组相比,远距离预处理使再灌注后心肌梗死面积缩小[(20.4±2.5)%比(51.0±6.0)%],乳酸脱氢酶的释放减少[(271±9)U/L比(339±39)U/L];而在远距离预处理前给予精胺或SB202190干预后梗死面积、乳酸脱氢酶降幅均减小,分别为[(40.8±9.2)%,(383±43)U/L;(44.3±6.8)%,(356±26)U/L].结论 远距离预处理通过抑制线粒体钙单向转运体的开放可以减轻缺血/再灌注对缺血心肌的损伤,起到对缺血心肌的保护作用.     

经腹主动脉阻断致犬脊髓缺血再灌注损伤实验模型的探讨

目的 经腹主动脉阻断建立犬脊髓缺血再灌注损伤模型。方法 健康成年家犬14只，其中肾动脉后阻断型8只，阻断时间分别为30、60、90及120min（各2只），肾动脉前阻断型6只，阻断时间分别为60和120min（各3只）。于动脉阻断前、阻断后0、20、40、60、80、100min及动脉开放后0、10、30min测定心率（HR）、桡动脉压（RABP）、股动脉压（FABP）、鼻咽温度（NPT）和直肠温度（RT），再灌注后12、24、48h及7d动物行为学评分。结果 动脉阻断前后HR基本平稳；RABP略有升高，动脉开放后则逐渐趋于平稳，FABP在动脉阻断后波形消失，收缩压及舒张压基本相等，维持在20～40mmHg之间；NPT基本平稳，RT随着阻断时间的延长逐渐降低；再灌注后12h行为学评分均为≥3分，24h以后均为4分。结论 本研究采用的方法确能保证腹主动脉完全阻断，但建立脊髓缺血再灌注损伤模型失败。     

含甘露醇的温血停搏液控制性再灌注对缺血再灌注心肌线粒体功能的保护作用

利用猫体外循环模型观察含甘露醇的温血停搏液控制性再灌注对缺血再灌注心肌线粒体功能的影响。结果发现,缺血心肌再灌注后其线粒体功能在缺血损伤的基础上进一步加重,线粒体膜丙二醛含量明显增加,心肌超氧化物歧化酶活性明显下降。用含甘露醇的温血停搏液控制性再灌注可保护缺血后再灌注心肌的线粒体功能,降低线粒体膜丙二醛含量保护心肌超氧化物歧化酶活性。表明含甘露醇的温血停搏液控制性再灌注,可提高心肌对氧自由基的清除能力,减轻线粒体膜脂质过氧化,有利于再灌注线粒体功能的恢复。     

预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌自噬的影响

目的 观察预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌自噬的影响.方法 30只SD大鼠随机分为缺血再灌注组,预处理+缺血再灌注组.缺血再灌注组在左冠状动脉左前降支近心端中上1/3处结扎阻断血流,60 min后解除阻断,再灌注60 min.预处理+缺血再灌注组结扎阻断冠状动脉左前降支5min,然后恢复灌流5 min,重复3次.再阻断60 min,复灌60min.测量心肌细胞自噬发生情况,以及心功能指标,包括左心室收缩压(LVSP)、舒张压(LVDP)和最大压力变化速率(±LVdp/dtmax)值.分段收集流出液以计算冠脉灌流量(CPF)和测定蛋白质漏出量.结果 与缺血再灌注组比较,预处理可以明显激活心肌细胞自噬的发生.预处理能显著减少LVSP、LVDP及蛋白漏出量;使±LVdp/dtmax显著增加(均P＜0.05).自噬的激活与心肌损伤呈负相关.结论 预处理能够明显激活心肌细胞自噬,改善缺血再灌注损伤大鼠的心功能.     

缺血/再灌注损伤后心肌神经生长因子的变化

目的：观察缺血／再灌注损伤后神经生长因子表达的变化，初步探讨神经生长因子在心肌缺血／再灌注损伤发生机理中的作用及对交感神经功能改变的影响。方法：选用SD大鼠随机分2组，每组各8只，分别为假手术组、缺血／再灌注损伤组（本组以非缺血／再灌注损伤区为自身对照）。通过阻断左冠状动脉左前降支建立在体大鼠工作心缺血／再灌注损伤模型，用免疫组化法检测神经生长因子在缺血／再灌注损伤组左心室缺血／再灌注损伤区、非缺血／再灌注损伤区及假手术组左心室心肌中表达的差别。结果：免疫组织化学法显示神经生长因子在假手术组的大鼠心肌、非缺血／再灌注损伤区心肌与缺血／再灌注损伤区心肌表达阳性率分别为34．34％、38．28％、51．05％，前两者之间差异无显著性（P〉0．05），但缺血／再灌注损伤区神经生长因子的表达量明显增高，与前两组比较差异有显著性（P〈0．01）。结论：神经生长因子在心肌缺血／再灌注损伤过程中明显增高，神经生长因子参与心肌缺血／再灌注损伤的发生发展及交感神经功能的改变。     

缺血预处理限制线粒体钙超载保护再灌注大鼠心肌

目的研究缺血预处理(IP)对缺血大鼠心肌的保护作用。方法将Wistar大鼠随机分为对照组(CON组)、缺血预处理组(IP组)、5-羟葵酸拮抗IP组(5HD+IP组),每组8只。建立Langendorff灌注模型,平衡灌注20min,全心缺血40 min,再灌注30 min,观察比较各组血流动力学变化;再灌注末取心肌并制备线粒体,电镜观察比较形态学改变;分离、测定线粒体游离钙浓度。结果IP组与对照组相比,能明显改善缺血再灌注大鼠心脏收缩功能,左室发展压(LVDP)有显著差异(P<0.01);缺血末、再灌注末线粒体游离钙浓度显著低于对照组(P<0.01);IP组明显改善心肌、线粒体显微结构。5HD+IP组与IP组比较,再灌注各时间点大鼠心脏收缩功能指标LVDP有显著性差异(P<0.01),缺血末、再灌注末线粒体游离钙浓度显著高于IP组(P<0.01);5HD+IP组心肌细胞、线粒体形态的保存明显比IP组差。结论①IP能改善缺血再灌注大鼠心肌的收缩功能,减少线粒体钙超载,保护心肌细胞和线粒体形态和结构的完整,产生心肌保护作用;②选择性线粒体钾通道拮抗剂5-羟葵酸能翻转缺血预处理的心肌保护作用;③缺血预处理的心肌保护机制可能是通过激活线粒体ATP敏感性钾通道,限制心肌线粒体钙超载,维护线粒体整体形态和功能的完整,产生心肌保护作用。     

二氮嗪停搏液对缺血再灌注心肌线粒体的保护作用

目的观察线粒体三磷酸腺苷(ATP)敏感钾离子通道开放剂二氮嗪加入停搏液内对缺血再灌注大鼠心肌线粒体保护作用。方法50只大鼠随机分为5组,每组10只,取离体心脏,A组取正常心肌,其余四组置于Lan-gendorff模型。B组停灌30 min,复灌60 min;其余各组分别灌注不同的停搏液:C组灌注停搏液;D组灌注含二氮嗪的停搏液;E组灌注含二氮嗪停搏液之前10 min给予格列苯脲。各组复灌60 min取标本,电镜下观察线粒体结构改变;提取线粒体,激光共聚焦显微镜扫描检测线粒体膜电位变化;测定线粒体呼吸功能;高效液相法测定心肌ATP含量及能荷(EC)变化。结果缺血再灌注心肌线粒体结构损伤和功能降低(P<0.05);而二氮嗪处理组相应指标显著改善(P<0.01)。结论含二氮嗪停搏液能够改善缺血再灌注心肌线粒体结构和功能。     

异搏停钾停搏液对犬缺血心肌的保护作用

12只犬均分为二组,在常温体外循环下阻断主动脉,心脏缺血60分钟,比较异搏停钾停搏液和单纯钾停搏液对缺血心肌的保护作用。试验表明异搏停钾停搏液对缺血心肌糖元和超微结构的保护作用优于单纯钾停搏液;开放主动脉重灌注30分,糖元储备和超微结构损伤的恢复亦优于单纯钾停搏液。     

阿托伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注后无复流的影响

目的观察阿托伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注后无复流的影响,探讨其可能机制。方法 56只雄性SD大鼠随机分为4组:(1)假手术组,左前降支冠脉(LAD)穿线不结扎180 min;(2)缺血再灌注组,结扎LAD60 min后再灌注120 min;(3)阿托伐他汀组,结扎LAD前给予阿托伐他汀20 mg/(kg.d)灌胃3 d;(4)阿托伐他汀+L-硝基精氨酸(L-NNA)组,L-NNA 15 mg/kg结扎LAD前15 min尾静脉注入,阿托伐他汀处理同上,后两组缺血再灌注处理同缺血再灌注组。实验结束后测血清CK-MB及心肌一氧化氮(NO)水平;心肌染色法区分缺血区、无复流区及梗死区;免疫组化法检测心肌及血管中eNOS、iNOS含量;电镜下观察微血管及心肌线粒体等超微结构改变。结果与假手术组比较,缺血再灌注组心肌及血管iNOS表达增加,eNOS表达无变化,心肌NO水平下降,微血管及心肌线粒体损伤明显;与缺血再灌注组比较,阿托伐他汀能抑制iNOS表达,诱导eNOS表达,增加NO水平,减轻微血管及心肌线粒体损伤,减少心肌梗死及无复流。一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可阻断阿托伐他汀上述作用。结论阿托伐他汀通过eNOS/iNOS—NO途径,激活线粒体ATP敏感钾通道和减轻微血管损伤,减少心肌梗死及无复流。     

The effects of atorvastatin on myocardial no-reflow after ischemia/reperfusion in rats.

目的 观察阿托伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注后无复流的影响,探讨其可能机制.方法 56只雄性SD大鼠随机分为4组:(1)假手术组,左前降支冠脉(LAD)穿线不结扎180 min;(2)缺血再灌注组,结扎LAD 60 min后再灌注120min;(3)阿托伐他汀组,结扎LAD前给予阿托伐他汀20 mg/(kg·d)灌胃3 d;(4)阿托伐他汀+L-硝基精氨酸(L-NNA)组,L-NNA 15mg/kg结扎LAD前15min尾静脉注入,阿托伐他汀处理同上,后两组缺血再灌注处理同缺血再灌注组.实验结束后测血清CK-MB及心肌一氧化氮(NO)水平;心肌染色法区分缺血区、无复流区及梗死区;免疫组化法检测心肌及血管中eNOS、iNOS含量;电镜下观察微血管及心肌线粒体等超微结构改变.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心肌及血管iNOS表达增加,eNOS表达无变化,心肌NO水平下降,微血管及心肌线粒体损伤明显;与缺血再灌注组比较,阿托伐他汀能抑制iNOS表达,诱导eNOS表达,增加NO水平,减轻微血管及心肌线粒体损伤,减少心肌梗死及无复流.一氧化氮合酶抑制剂L-NNA可阻断阿托伐他汀上述作用.结论 阿托伐他汀通过eNOS/iNOS-NO途径,激活线粒体ATP敏感钾通道和减轻微血管损伤,减少心肌梗死及无复流.     

SEA0400对离体大鼠心肌再灌注损伤的保护作用

【目的】研究SEA0400对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的效应及作用机制。【方法】SD大鼠随机分为正常对照组（NC组）、缺血再灌注组（IR组）及SEA0400处理组（SEA0400＋I/R组）,每组动物10只。离体大鼠心脏采用Langendorff法灌流,停灌40 min再灌60 min造成心肌缺血再灌注损伤模型。全程连续记录左心室发展压（LVDP）和左心室内压最大变化速率（±dp/dtmax）。心脏灌流结束后测定心肌组织ATP含量以及心肌线粒体膜电位（ΔΨ）和基质钙离子浓度（[Ca2＋]m）。【结果】灌注液加入SEA0400可显著改善缺血再灌注所致的心功能损伤,抑制缺血再灌注造成的心肌组织ATP含量下降、线粒体钙超载以及线粒体膜电位去极化。【结论】SEA0400可通过抑制缺血再灌注所致线粒体钙超载维持线粒体功能和心肌组织ATP含量,从而起到心肌保护的效应。