CRYGD基因突变与一中国先天性核性白内障家系致病相关

目的对一先天性核性白内障家系进行候选致病基因的筛查,以明确其发病分子基础。方法以家系先证者基因组DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增10个白内障候选致病基因的突变热点区域,PCR产物纯化后进行直接DNA测序筛查突变位点。如发现疑似突变位点,则利用直接DNA测序法对该突变位点在家系其他成员的存在情况进行疾病表型与致病突变共分离分析,进一步确认其是否为致病性突变位点。结果该家系三代呈常染色体显性遗传,临床表型大致相同,可确诊为先天性核性白内障。候选致病基因筛查发现在患者的CRYGD基因外显子2发现一个杂合突变c.C70A,正常家系成员无此突变,临床表型与基因型共分离。该突变为错义突变,导致一个CRYGD蛋白第24位的脯氨酸被苏氨酸取代(p.P24T)。结论 CRYGD(p.P24T)突变是导致该先天性核性白内障家系的致病分子基础。     

一汉族先天性眼外肌纤维化家系KIF21A基因检测和影像分析

目的：收集一汉族先天性眼外肌纤维化1型家系,分析临床及影像学特征,明确眼外肌病理改变,检测该家系致病突变基因并讨论遗传学基础。方法：对所有参与研究的家系成员进行详细眼科检查、眼眶及颅神经高分辨核磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）检查,通过眼外肌组织切片Masson染色明确眼外肌病理改变,利用Sanger直接测序技术对该家系行KIF21A基因全部外显子及剪接位点区域测序,获取候选突变并分析。结果：该家系为3代先天性眼外肌纤维化1型家系,家系中患者临床表现为双眼中至重度上睑下垂,眼球垂直运动完全受限,水平运动不同程度部分受限。眼眶MRI示患者双侧上直肌提上睑肌复合体发育不良,左眼内、外直肌萎缩,多支眼外肌纤维化样改变。颅神经MRI示患者双侧动眼神经纤细,左侧外展神经缺如。眼外肌Masson染色示蓝染胶原纤维取代红染肌纤维,眼外肌发生纤维化样改变。Sanger直接测序获得致病突变KIF21A c.2860C>T（p.R954W）,该杂合错义突变在该家系中呈共分离。结论：KIF21A c.2860C>T（p.R954W）是该家系的致病突变,这一突变会造成较为少见的单侧外展神经缺如的表型。应用高分辨MRI检查有助于了解眼外肌纤维化患者特异性颅神经和眼外肌改变协助临床诊断和处理。     

X染色体连锁显性遗传先天性眼球震颤家系的致病基因突变研究

目的对4个X染色体连锁显性遗传先天性眼球震颤(XL-CIN)家系进行候选致病基因FRMD7突变筛查。方法采集家系成员外周血5 ml,提取基因组DNA;以4个家系的先证者基因组DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增FRMD7基因的全部外显子及其外显子-内含子拼接部的序列,DNA直接测序筛查突变位点;一旦发现突变致病性位点,则采用DNA双向测序方法在其他家系成员进行疾病与致病突变共分离分析,以及进一步确认突变,将患者的FRMD7基因外显子8和10的扩增产物克隆至TA克隆载体测序。结果 4个XL-CIN家系皆为X染色体连锁显性遗传伴外显不全,其中2个家系携带FRMD7基因已知致病性突变:XL-CIN 02家系存在c.G886C/GGT>CGT(p.G296R)错义突变,位于FRMD7基因外显子8;XL-CIN 03家系存在c.C910T/CGA>TGA(p.R304X)无义突变,位于外显子10。结论 FRMD7 G296R和R304X是导致XL-CIN 02和XL-CIN 03家系致病的主要原因。     

常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变一家系的致病基因筛查及临床分析

目的 使用外显子结合目标区域捕获测序检测常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变(autosomal dominant vitreoretinochoroidopathy,ADVIRC)家系的致病基因,并分析其临床表型.方法 收集重庆地区常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变先证者及4代成员的临床资料,完善眼科检查.采集该家系4例患者及8例健康成员的外周静脉血,提取基因组DNA,运用外显子结合目标区域捕获测序芯片进行测序,并对测序结果进行分析后得到候选致病基因性突变位点.运用PCR和直接测序进行验证,确定致病基因.根据致病基因的临床表型对该家系进行临床分析.结果 基因检测发现第六外显子的杂合突变BEST1(c.704TR＞C),家系患者中出现的小角膜、先天性白内障、周边视网膜脉络膜发育不良、晚期易发生青光眼等符合该突变基因的临床表型.结论 BEST1基因的c.704TR＞C杂合突变为该ADVIRC家系的致病基因之一.     

原发性开角型青光眼一家系的基因突变和临床表型分析

目的：对中国南京地区1个原发性开角型青光眼（primary open angle glaucoma,POAG）家系进行基因突变位点的筛查和临床表型分析。方法：对该家系成员行全面的眼科检查,采集受检者的外周静脉血,提取基因组DNA,以二代测序方法进行基因组定点捕获测序分析,对发现的变异用Sanger测序技术在家系成员中进行致病基因验证。对照组为100名健康人群。结果：在先证者的小梁网诱导性糖皮质激素反应蛋白（myocilin,MYOC）基因第3外显子区域发现杂合突变c.734G>A（p.C245Y）,这一突变也出现在其他12个POAG的家系成员中,无该突变的家系成员中无POAG患者及可疑者。对照组未发现该突变位点。结论：MYOC基因C245Y突变是该POAG家系的致病突变位点,本研究结果补充了中国江苏地区MYOC基因的突变谱。     

华人遗传性混合息肉病综合征BMPR1A基因种系突变检测

[目的]探讨遗传性混合息肉病综合征华人家系中BMPR1A基因是否存在种系突变.[方法]34个家系成员外周血提取基因组DNA,利用聚合酶链式反应分别扩增BMPR1A基因全部外显子,进行DNA测序与突变分析,对突变外显子PCR扩增产物作变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定.[结果]家系12和2所有发病成员BMPR1A基因2号外显子位于codon23处缺失11个碱基(AAAGTCAGAAA),同时2号外显子PCR扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳也发现异常迁移条带,而家系中正常成员的检测未发现这一突变.[结论]两华人HMPS家系中BMPR1A基因缺失突变与疾病共遗传,该基因极可能是HMPS华人家系的致病基因.     

蒙古族并指一家系临床特点及其HOXD13基因突变检测

目的: 探讨先天性并指畸形一大家系的临床特点及其致病基因突变分析,为该类疾病的产前诊断以及携带者筛查提供依据。方法: 通过家系调查,对家系患者进行临床表型分析并进行手和脚部X光检查;绘制系谱图,整理分析家系资料;采集家系成员外周血并提取基因组DNA;通过外显子测序方法筛选候选基因,将捕获的候选基因突变位点进行PCR扩增后Sanger测序验证分析。结果: 该家系已传4代,并指患者共9例,其中男4例,女5例,Ⅰ2、Ⅱ4、Ⅲ5,7,10等5例患者为单侧并指,Ⅲ16和Ⅳ3,6,7等4例患者为双侧手指并指,脚趾均为正常。先证者及其家系患者均为HOXD13基因的第二外显子917位点发生G>A的突变,导致306位氨基酸从精氨酸到谷氨酰胺的改变,即c.917G＞A（P.R306Q）。家系正常成员均无此突变。结论: 该先天性并指家系属于常染色体显性方式遗传,HOXD13,c.917G＞A（p.R306Q）基因突变位点是该并指家系的致病突变。该家系Ⅲ12成员表型正常但致病基因携带者,表明该家系存在不完全外显特点。     

华人遗传性混合息肉病综合征BMPR1A基因种系突变检测

【目的】探讨遗传性混合息肉病综合征华人家系中BMPR1A基因是否存在种系突变。【方法】34个家系成员外周血提取基因组DNA，利用聚合酶链式反应分别扩增BMPR1A基因全部外显子，进行DNA测序与突变分析，对突变外显子PCR扩增产物作变性聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。【结果】家系12和2所有发病成员BMPR1A基因2号外显子位于codon23处缺失11个碱基(AAAGTCAGAAA)，同时2号外显子PCR扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳也发现异常迁移条带，而家系中正常成员的检测未发现这一突变。【结论】两华人HMPS家系中BMPR1A基因缺失突变与疾病共遗传，该基因极可能是HMPS华人家系的致病基因。     

常染色体显性遗传性听神经病家系全外显子组测序分析

目的：在多年围绕1个常染色体显性遗传性非综合征型听神经病家系开展系统分子遗传学研究的基础上,进一步探讨该家系耳聋的致病机制,以期发现新的听神经病致病基因和突变位点。方法：对3例耳聋患者和1例配偶进行全外显子组测序,初步筛选出与家系耳聋相关的候选致病基因。采用PCR-Sanger测序法,检测上述候选基因变异是否与家系表型共分离。最后,以50例与研究家系无关的听力正常人为对照,检测候选致病突变在正常群体中的突变频率和SNPs遗传多态性。结果：全外显子测序分析得到41个候选致病基因突变;用PCR-Sanger测序法对核心家系的9名成员和2名家系外听力正常人进行验证,仅发现1个基因突变（ALOX15B 7942797 C>T）与家系耳聋表型共分离。选取50例家系外正常对照的DNA样本对ALOX15B基因进行PCR扩增和序列分析,结果显示有2例听力正常人也检测到该基因的同一变异,提示该变异为SNPs遗传多态性。结论：对核心家系成员的全外显子组测序分析和Sanger测序法验证未发现有意义的突变位点,排除了该家系耳聋由基因编码区突变及Indels致病的可能性。     

KIF21A基因p.Arg954Trp突变引起先天性动眼神经麻痹

目的 在先天性动眼神经麻痹家系中定位相关致病基因并克隆该基因. 方法对1个先天性动眼神经麻痹家系(3代共16人)通过血液基因组提取和微卫星连锁分析寻找基因突变所在区域,计算有利连锁优势比的对数值(logarithm of the odds of linkage,LOD),并对该区域内的可能致病基因进行突变筛选和突变验证. 结果微卫星标记连锁分析发现位于12p11-12p12区域的D12S85和D12S345区域显示与该家系疾病紧密连锁,LOD值为2.4.对家系KIF21A基因全部外显子进行的突变检测分析显示21号外显子存在c.2680C＞T(p.Arg954Trp)的碱基改变. 结论 KIF21A基因c.2680C＞T(p.Arg954Trp)突变是导致该先天性动眼神经麻痹的致病因素.     

8例异染性脑白质营养不良患者ARSA基因突变分析

目的 分析并确定8例异染性脑白质营养不良(metaehrcxnatie leukodystrophy,MLD)患者的芳基硫酸酯酶A(arylsttlf-tase A,ARSA)基因突变及遗传特征.方法 收集并分析8例MLD患者及其家系成员临床资料,采用DNA直接测序方法进行ARSA突变检测,确定基因突变位点,明确基因诊断.结果 例1-3发现ARSA基因纯合突变c.954G>A;例4复合杂合突变C.887G>T/c.911C>T;例5复合杂合突变C.862C>T/c.1338dupC;例6仅发现1种突变C.179180dupCA;例7与例8复合杂合突变c.251G>A/c.296G>T.结论 明确了8例MLD患者的基因诊断,并发现4个国际上未见报道的AR-SA基新突变.     

一个Paget骨病家系SQSTM1及TNFRSF11A基因突变分析

目的 研究一Paget骨病家系SQSTM1基因及TNFRSF11A基因突变情况。方法 收集一Paget骨病家系,家系成员外周血中提取基因组DNA,应用聚合酶链式反应、直接测序对该家系成员SQSTM1及TNFRSF11A基因外显子进行测序。测序结果与GenBank公布的SQSTM1和TNFRSF11A基因正常序列对比,寻找有无突变。结果 在该家系中未发现与Paget骨病共分离的致病基因突变,检测到14个已知的单核苷酸多态性。结论 该家系成员的发病情况与SQSTM1、TNFRSF11A基因中发现的SNP无相关性,排除其为该Paget骨病家系致病基因的可能性。     

Mutation analysis of PAX6 gene in a large Chinese family with aniridia

Background Mutations in PAX6 gene have been shown to be the genetic cause of aniridia, which is a severe panocular eye disease characterised by iris hypoplasia. However, there is no study to do genetic analysis of aniridia, although there are several case reports in China. Here, we describe a mutation analysis of PAX6 in a large Chinese family with aniridia.Methods Genomic DNA from venous blood samples was prepared. Haplotype analysis was performed with two genetic markers (D11S904 and D11S935 ). Fourteen exons of the PAX6 gene were amplified from genomic DNA. Polymerase chain reaction (PCR) products of each exon were analysed by single strand conformational polymorphism (SSCP). The PCR products having an abnormal pattern were sequenced to confirm the mutation.Results Significant evidence for allele sharing in affected patients was detected suggesting that PAX6 mutation links to aniridia in this family. An extra band corresponding to exon 9 in PAX6 was found by single strand conformational polymorphism analysis in all the aniridia patients in this family, but not detected in the unaffected members. A mutation of C to T was detected by sequencing at the nucleotide 1080 that converts the Arg codon (CGA) to the termination codon (TGA).Conclusions Aniridia is caused by a nonsense mutation of PAX6 gene in the large Chinese kindred. Genetic test is important to prevent the transmission of aniridia to their offsprings in the kindred by prenatal diagnosis.     

颗粒状角膜营养不良家系的BIGH3基因突变

目的 以基因突变分析一角膜营养不良家系的致病分子基础.方法 应用PCR产物直接DNA测序及限制性内切酶分析检测家系中7例患者和6例表型正常成员的K3、K12和BIGH3基因突变情况.结果 该家系患者成员在K3与K12基因的编码序列区没有发现突变,而BIGH3基因外显子12存在CGG＞TGG(R555W)突变杂合子,家系表现正常成员及正常对照均无BIGH3基因突变;限制性内切酶分析结果显示突变与疾病表现型呈完全共分离.结论 利用基因突变分析确诊我国首例报道的Meesmann角膜营养不良家系属于颗粒状角膜营养不良,且为BIGH3 R555W杂合突变类型.     

儿童交替性偏瘫家系ATP1A2基因的检测

目的 对儿童交替性偏瘫(AHC)的家系进行基因检测,查找AHC发病的基因突变点。方法 对1个患儿交替性偏瘫家族的5名成员提取DNA,根据突变区域设计引物,进行PCR扩增,将所得到的DNA产物进行基因测序。结果 用正常ATP1A2基因片段序列和基因测序序列进行比对,基因测序图中在1237c碱基处未见明显双峰,其他位置波形亦无异常双峰,在5个样本中均未发现基因突变点。结论 ATP1A2基因突变与儿童交替性偏瘫发病的联系还有待进一步证实。     

中国人遗传性并指畸形家系HOXD13基因突变鉴定

目的:研究一个中国人并指(趾)畸形(synpolydactyly,SPD)家系,检测家系成员中是否存在同源盒D13 基因(homeobox D13,HOXD13 )突变.方法:采集SPD 患者及其家系成员的外周血,提取基因组DNA,设计针对HOXD13 基因特异性引物,进行PCR 扩增,产物经2%琼脂糖凝胶电泳检测,并进行测序鉴定.结果:本家系3代共23人, 6人患病,研究发现患者HOXD13 基因第一个外显子中多聚丙氨酸链由15个延长至22个,第二个外显子基因序列正常.结论:首次揭示中国人并指(趾)畸形家系HOXD13 基因存在多聚丙氨酸延展增加7个丙氨酸的突变形式,表明一定数目的丙氨酸延展可能是导致并指(趾)畸形的重要因素.     

中国北方一马凡氏综合征家系致病基因突变研究

目的研究确定我国北方一马凡氏综合征(MFS)家系致病基因突变位点。方法对马凡氏综合征一家系进行临床研究和系谱分析。采集家系中3例患者和3例健康成员的静脉血,提取基因组DNA。应用聚合酶链反应(PCR)扩增马凡氏综合征致病基因原纤维蛋白1(FBN1)基因外显子及外显子-内含子接头处,直接测序确定致病的基因突变。结果马凡氏综合征患者的FBN1基因外显子6发生了错义突变,cDNA 640位的鸟嘌呤被腺嘌呤取代(G640A);对应的甘氨酸改变为丝氨酸。突变后EagⅠ内切酶位点消失。该突变在家系中表现为与疾病共分离。结论 FBN1基因突变G640A是该马凡氏综合征家系的致病基因突变。