丹参酮ⅡA对高糖培养的大鼠血管平滑肌细胞p38MAPK信号通路的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响，分析该作用与氧化应激以及丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 mitogen－activated protein kinases，p38 MAPK）信号通路的关系。方法：取第3代原代培养的大鼠血管平滑肌细胞建立高糖诱导细胞增殖模型，实验分为正常对照组、高糖组和丹参酮ⅡA组，BrdU掺入法测定血管平滑肌细胞的DNA合成水平；黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量；免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化p38 MAPK蛋白表达。结果：高糖诱导的血管平滑肌细胞呈快速增殖状态，在10～25mmol·L^-1间增殖效应呈剂量依赖性；丹参酮ⅡA能抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖，提高高糖培养的细胞中SOD水平，降低MDA含量，减少P-p38MAPK蛋白的表达。结论：丹参酮ⅡA抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖，这可能与其能减少血管平滑肌细胞中的氧自由基，抑制p38MAPK信号通路有关。     

熊果酸抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制

目的:研究熊果酸(UA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,并探讨其对p38MAPK信号通路的影响。方法:高糖(葡萄糖,25mmol/L)诱导VSMC增殖为模型,MTT法检测UA对细胞增殖的影响,Cell-based ELISA测定UA对p38MAPK磷酸化水平变化,采用SABC免疫组化法测定UA对细胞c-fos蛋白表达水平的影响。结果:UA(20,40μmol/L)能抑制高糖诱导的VSMC增殖作用(P<0.05)。UA组p38MAPK的磷酸化水平明显低于葡萄糖模型组(P<0.05),且c-fos的蛋白表达水平较模型组也明显降低。结论:UA可以抑制大鼠VSMC增殖,此作用可能与其抑制p38MAPK信号传导通路激活,从而下调c-fos蛋白表达有关。     

阻断p38 MAPK信号通路对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的阻断对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响。方法 大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells MCs）分别培养在低糖浓度（5．5mmol／L，LG组），高糖浓度（25mmol／L，HG组）及25mmol／L葡萄糖＋10μmol／L SB203580（p38抑制剂）。CCK-8测定MCs增殖，比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果 高糖组MCs出现增殖增加，SOD、GSH下降，MDA增加，SB203580干预能抑制MCs的过度增殖，使SOD、GSH增加、MDA减少。结论 抑制p38MAPK途径能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖．并显著减少高糖诱导的氧化应激水平。     

阿魏酸钠对高糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响

目的:探讨阿魏酸钠(SF)对高糖诱导下原代肾小球系膜细胞(GMC)增殖的作用及其机制.方法:原代培养肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24 h、48 h收集细胞.用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;免疫细胞化学检测p53和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达.结果:48 h内,高糖促进GMC增殖并上调p38MAPK蛋白的表达,抑制p53的表达,SF能明显对抗高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强.结论:SF可能是通过抑制p38MAPK通路,促进p53的合成,从而抑制高糖诱导的GMC增殖.     

肌肽对高糖环境下心肌成纤维细胞增殖的影响及机制

目的 探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响及作用机制.方法 以CFs为研究对象,采用WST-1法观察肌肽抑制高糖诱导CFs的增殖;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞膜的毒性作用;Western blot法观察细胞周期蛋白P21及MAPK通路相关蛋白P38、P-p38的表达水平.结果 肌肽显著抑制了高糖诱导的CFs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与p38 MAPK信号通路相关.结论 肌肽可通过P38MAPK信号通路抑制高糖诱导的CFs增殖.     

高糖刺激人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶表达及与p38 MAPK信号通路关系

目的:观察高糖刺激体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的作用及其与p38信号通路(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)的关系,从而进一步探讨糖尿病视网膜病变的发病机制.方法:培养人RPE细胞,分为对照组、高糖组、高糖 SB203580组和甘露醇组,采用四甲基氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,免疫荧光染色法观察RPE细胞中磷酸化p38 MAPK和iNOS的蛋白表达.结果:①MTT检测结果:高糖可以抑制RPE细胞增殖,加入特异性p38 MAPK抑制剂SB203580预处理后,抑制作用减弱;②免疫荧光法检测结果:与对照组相比,高糖组磷酸化p38 MAPK,iNOS蛋白表达明显增高;加入SB203580预处理后,iNOS表达被显著抑制.结论:高糖能够抑制RPE细胞增殖,通过活化p38 MAPK信号通路刺激RPE细胞iNOS的表达,在糖尿病视网膜病变的发生发展中起重要作用.     

血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞肥厚过程中MAPK对细胞周期素依赖性激酶抑制因子的调节作用

目的观察在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)肥厚过程中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性和细胞周期素依赖性激酶抑制因子p27、p21、p57蛋白表达量的变化,探讨MAPK对细胞周期素依赖性激酶抑制因子的调节作用。方法分离SD大鼠主动脉中层平滑肌,贴壁法培养平滑肌细胞,无血清培养基培养静止后,加入AngⅡ1×10-6 mol/L和/或豆蔻酸佛波酰乙酯(PMA)20nmol/L,以无血清培养基培养的VSMC作对照。在刺激后90min收集细胞,用免疫沉淀法检测MAPK活性的改变。在刺激后6和24h收集细胞,用Western blotting法检测p27、p57和p21蛋白表达量。结果AngⅡ可以使MAPK活性升高,但其升高幅度较低(仅较对照组增加了138%),未能抑制p27蛋白的表达,不能使VSMC增殖。PMA和AngⅡ共同作用时,可以轻度抑制p27蛋白的表达,但仍未能使VSMC增殖。结论MAPK通路是VSMC胞外增殖肥厚刺激信号进入核内的一条重要信息传导通路。     

p38 MAPK在高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨p38 MAPK在高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2)分为正常对照组(NG),高糖组(HG),无关siRNA转染组(RG)、转染p38 MAPK siRNA 24 h组(24hG)、转染p38MAPK siRNA 48 h组(48hG).免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和细胞角蛋白(CK)的表达,RT-PCR法检测CK mRNA的表达,Western Blot检测p38 MAPK的活化及α-SMA的表达.结果:p38 MAPK siRNA能显著抑制高糖诱导的p38 MAPK过度活化;高糖刺激后肾小管上皮细胞α-SMA蛋白表达明显高于正常组(P＜0.05),而p38 MAPK siR-NA转染组其水平显著低于高糖组(P＜0.05);高糖诱导HK2细胞CKmRNA和蛋白水平明显降低(P＜0.05),而p38 MAPKsiRNA转染后其水平显著高于高糖组(P＜0.05);结论:高糖可导致肾小管上皮细胞p38 MAPK通路的激活而下调CK,同时导致α-SMA蛋白的表达,诱导其表型转化.     

晚期氧化蛋白产物诱导血管平滑肌细胞表达MCP-1及其信号转导通路的研究

目的 研究p38有丝分裂素激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)在晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)诱导的鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达中的作用.方法 使用200和400 μmol/L AOPP分别以不同时间刺激培养的鼠血管平滑肌细胞,在阻断实验中加入特异性p38MAPK阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号转导通路.采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞中MCP-1和磷酸化p38MAPK的表达情况.结果 用特异性p38MAPK阻断剂SB203580预处理后,400 μmol/L AOPP刺激4 h的鼠血管平滑肌细胞MCP-1表达(平均灰度值)从42.00±0.95降至9.35±1.35受到显著抑制(P＜0.01).结论 ①p38MAPK信号转导途径参与了AOPP诱导的鼠血管平滑肌细胞MCP-1的表达.②晚期氧化蛋白产物促进平滑肌细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达可能是其致动脉粥样硬化机制之一.     

肝X受体激动剂GW3965对高糖所致心肌细胞凋亡的影响及作用机制

目的:观察GW3965对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:取对数期H9c2心肌细胞,随机分为对照组(Control组)、高糖诱导组(高糖组)和高糖诱导+激动剂处理组(GW3965组)。GW3965组细胞加入10μmol/L GW3965预处理24h,之后高糖组和GW3965组细胞加入33mmol/L葡萄糖继续诱导培养24h。采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光染料法检测线粒体膜电位,Western blot检测LXRα、ERK和p38 MAPK信号通路相关蛋白的变化。结果:GW3965可以提高H9c2抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,改善细胞线粒体膜电位变化,并抑制ERK和p38 MAPK通路活性。结论:GW3965通过介导LXRα和MAPK通路减轻高糖诱导的细胞凋亡和线粒体损伤,对心肌细胞具有保护作用。     

JS-K对口腔鳞状细胞癌H157和CAL-27细胞增殖与凋亡的影响及机制实验研究

目的:探讨一氧化氮(NO)前体化合物(JS-K)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)H157和CAL-27细胞增殖与凋亡的影响，并分析相关机制。方法:采用细胞活力与平板克隆实验检测JS-K对OSCC细胞增殖能力的影响。采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡，以及半胱氨酸蛋白酶3/7(Caspase-3/7)活性测定评估JS-K对OSCC细胞周期与凋亡的影响。检测JS-K干预后OSCC细胞中ROS生成情况。采用亚细胞分离技术与Western blot探索JS-K诱导OSCC细胞周期停滞与细胞凋亡的机制。结果:JS-K通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制OSCC细胞的增殖，诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。此外，JS-K激活的p38 MAPK信号通路导致OSCC细胞中ROS增加，并诱导细胞周期阻滞在G₂/M期。结论:JS-K通过p38 MAPK信号通路调控ROS,诱导OSCC细胞周期阻滞在G₂/M期并凋亡，最终抑制OSCC细胞增殖。JS-K可能为一种治疗OSCC的潜在药物。     

胰岛素样生长因子Ⅱ激活宫颈癌细胞株ERK1/2信号通路并诱导其增殖

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF—Ⅱ）激活宫颈癌SiHa细胞株ERK1／2（p42／44MAPK）信号通路的模式变化及对其增殖的影响。方法 用MTT法观察细胞增殖，用Western blot测定细胞p42／44MAPK磷酸化表达。结果 IGF—Ⅱ可诱导SiHa细胞增殖，并呈剂量依赖性；用IGF—IR单克隆抗体（1，5，10μmol／L）预处理30min可显著抑制IGF-Ⅱ（20ng／mL）诱导的SiHa细胞增殖，并呈剂量依赖性。IGF—Ⅱ（100ng／mL）可诱导SiHa细胞p42／44MAPK磷酸化表达，20min达到高峰；IGF—IR单克隆抗体可显著抑制IGF—Ⅱ诱导的Siha细胞p42／44MAPK磷酸化。结论IGF—Ⅱ可激活宫颈癌SiHa细胞株p42／44MAPK信号通路，并可能通过p42／44MAPK信号通路调控SiHa细胞增殖。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与c-Jun-N末端激酶信号通路反向调控血管紧张素Ⅱ诱导的人足细胞凋亡

目的:研究不同亚型的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),即p38MAPK、细胞外信号调节激酶(ERK)和cJun-N末端激酶(JNK)在血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的培养人体足细胞凋亡中的作用.方法:体外培养条件下,分别用ANGⅡ(10-8mol/L)或ANGⅡ与不同的MAPK抑制剂(SB02190、Pl98059、SP600125)处理人体足细胞;应用H-33342和碘化丙啶双染色形态学方法和DNA片段测定法检测细胞凋亡;应用Western印迹检测ANCⅡ刺激的MAPK活性改变.结果:ANGⅡ诱导足细胞凋亡呈时间和剂量依赖性;ANGⅡ刺激p38MAPK,而抑制JNK活性;p38MAPK抑制剂(SB202190)抑制ANGⅡ诱导的足细胞凋亡和p38MAPK活性;SP600125抑制JNK活性而促进了ANGⅡ诱导的足细胞凋亡.结论:ANGⅡ通过激活p38MAPK和抑制JNK活性诱导人体足细胞凋亡.     

p38 MAPK信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用

目的探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体1(s TREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测p38MAPK与磷酸化p38 MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达水平,RT-PCR法检测p38 MAPK mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养上清液中s TREM-1表达水平。用不同浓度p38 MAPK特异性抑制剂SB203580处理细胞,观察上述指标的变化。结果 LPS可呈时间依赖性诱导RAW264.7细胞p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表达;SB203580可呈浓度依赖性抑制p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表达;SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后,LPS对s TREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过p38 MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞表达s TREM-1。     

山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞增殖的影响

目的探讨山奈酚对高糖诱导大鼠肾系膜细胞（HBZY-1）增殖、纤维化的影响,并研究其相关的作用机制。方法将HBZY-1细胞分为正常糖浓度组〔葡萄糖（Glu）5.5 mmol/L〕即对照组、高糖（Glu 25 mmol/L)组、10 μmol/L山奈酚+高糖组和 30 μmol/L山奈酚+高糖组。分组处理细胞后,采用MTT实验检测正常糖浓度和高糖下山奈酚对HBZY-1细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组细胞周期变化;Real-time PCR检测各组细胞纤维连接蛋白 (FN)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达,Western blot检测FN、CTGF、细胞周期相关蛋白以及p38 MAPK信号通路蛋白的表达。结果山奈酚(10、30 μmol/L)对正常糖浓度培养的HBZY-1细胞增殖影响不大(P>0.05),高糖能够增强细胞的增殖能力（P<0.05）, 而山奈酚(10、30 μmol/L)可抑制高糖引起的增强细胞增殖作用（P<0.05）。高糖能减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,并降低细胞周期相关蛋白p21Cip1以及p27Kip1蛋白表达,山奈酚(10、30 μmol/L)能够阻止高糖引起的细胞周期改变以及细胞周期相关蛋白表达的下调。山奈酚(10、30 μmol/L)同时能够抑制高糖引起的细胞FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平的上调。高糖能够增加磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白水平,而山奈酚(10、30 μmol/L)处理能够剂量依赖性的抑制高糖诱导的p-p38MAPK蛋白的表达上调。结论山奈酚对高糖诱导的HBZY-1细胞增殖起抑制作用,其作用机理可能是通过调控p38 MAPK信号通路,对高糖培养下的HBZY-1细胞起到保护作用。     

PD、SB对表皮生长因子诱导的大鼠VSMCS增殖及迁移的影响

目的:探讨ERK1/2抑制剂PD98059、p38MAPK抑制剂SB202190对表皮生长因子(EGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及迁移的影响。方法:实验分为对照组、EGF组、PD98059(PD)组、SB202190(SB)组。以低血清培养的VSMCs作为对照,采用细胞计数、划痕损伤实验,观察PD98059和SB202190对EGF诱导的VSMCs增殖及迁移的影响。结果:干预后24h,EGF组VSMCs增殖、迁移较对照组明显增强,加用PD98059和SB202190后,明显抑制了VSMCs的增殖和迁移。结论:EGF诱导的VSMCs增殖和迁移可能是通过p38MAPK和ERK1/2信号通路发挥作用。     

环孢素A对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察环孢素A（CsA)对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响，以探讨钙调神经磷酸酶（CaN)依赖的信号通路在血管平滑肌细胞增殖中的作用。方法；以体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞为模型，实验分为三组：（1）AngⅡ组，（2）CsA AngⅡ组，（3）对照组。检测细胞增殖活度（MTT法），增殖细胞核抗原（PCNA）表达（免疫组化定量技术），细胞数目（直接计数法）的变化。结果：AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度（吸光度表示），PCNA表达水平（光密度值表示）和细胞数目明显高于对照组（P＜0．01或P＜0．05），CsA＋AngⅡ组血管平滑肌细胞增殖活度，PCNA表达水平和细胞数目较AngⅡ组明显降低，差异显著（P＜0．01或P＜0．05）。结论：环孢素A可显著阻滞血管紧张素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖，这种作用可能通过抑制CaN活性，阻断CaN介导的信号传导通路所致。     

川芎当归提取物对血管平滑肌细胞MAPK信号通路与周期蛋白的调控效应

目的揭示川芎当归提取物(ELCAS)抑制血管平滑肌细胞增生的分子机制。方法以体外培养的原代大鼠血管平滑肌细胞为研究对象,应用Westernblot方法检测不同质量浓度ELCAS对血管平滑肌细胞内的ERK、JNK、p38磷酸化水平的影响,以及周期蛋白CyclinD1和细胞周期抑制子p21的表达情况。结果ELCAS能显著抑制ERK、JNK和p38的磷酸化以及血清诱导的CyclinD1蛋白的表达,并表现出良好的浓度依赖性;同时ELCAS能剂量依赖性地促进细胞内周期蛋白抑制子p21过表达,并抑制pRb磷酸化水平和CyclinD1蛋白表达。结论ELCAS可通过抑制MAPK信号通路以及对周期蛋白的调控来抑制血管平滑肌细胞增生。     

槲皮素对TNF-α诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及P38MAPK、HMGB1蛋白表达的影响

目的 研究槲皮素对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的心肌成纤维细胞增殖及P38MAPK、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响.方法 通过胰酶消化法和差速贴壁法获得纯化的心肌成纤维细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测心肌成纤维细胞的增殖,采用Western blot法测定P38MAPK、HMGB1蛋白的表达.结果 槲皮素对基础状态下的心肌成纤维细胞的增殖无影响,但对TNF-α诱导的心肌成纤维细胞的增殖有抑制作用,且各组细胞的吸光度(A)值随槲皮素浓度的增加而减小(P＜0.05),各组细胞P38MAPK、HMGB1蛋白表达随槲皮素浓度的增加而减弱(P＜0.05).结论 槲皮素对TNF-α诱导的心肌成纤维细胞增殖有一定地抑制作用,其机制可能是通过P38 MAPK信号通路抑制HMGB1的表达,参与抑制心肌成纤维细胞的增殖.     

绿茶多酚抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 本研究观察绿茶多酚对晚期糖基化终产物(AGEs)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)应用不同浓度的AGEs分别刺激VSMCs并设立对照组进行比较．将不同剂量的绿茶多酚与AGEs共同作用并设立对照组进行比较，采用非放射性的MTS／PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果 与对照组相比，晚期糖基化终产物对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用。在晚期糖基化终产物刺激下．绿茶多酚可明显抑制血管平滑肌细胞的生长。AGEs对p44／42MAPK磷酸化蛋白表达有显著的增强作用，此作用可被绿茶多酚抑制。结论 本研究提示绿茶多酚可抑制晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖及p44／p42 MAPK磷酸化蛋白的表达。