尿毒症血液透析患者Treg/Th17功能失衡影响血管钙化因子BMP-2表达的研究

目的 探讨尿毒症血液透析患者Treg/Th 17细胞功能是否发生失衡及其对血管钙化因子BMP-2表达的影响.方法 选取66例尿毒症血液透析患者(MHD组)、30例尿毒症未并发心血管疾病且未透析患者(WHD组)和20例健康志愿者,将MHD组患者分为并发心血管疾病(MHD1,n=36)和未并发心血管疾病(MHD2,n=3...     

慢病毒介导p38MAPK基因沉默对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响

目的 观察p38丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)在高糖诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用,并探讨其对凋亡相关信号分子caspase-3、bax及bcl-2表达的影响.方法 构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体,将体外培养的MC3T3-E1成骨细胞分为正常对照组(A组)、高糖组(B组)、p38MAPK-shRNA慢病毒转染组(C组)、信号转导阻断剂组(D组)和无关shRNA转染组(E组).RT-PCR检测细胞p38MAPK mRNA的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测p38MAPK、p-p38 MAPK、caspase-3、bax、bcl-2蛋白水平,透射电镜观察细胞超微结构.结果 构建靶向p38MAPK的shRNA慢病毒载体,并成功导入MC3T3-E1成骨细胞.与高糖组和无关转染组相比,p38MAPK-shRNA转染能显著抑制高糖诱导的MC3T3-E1细胞p38MAPK过度活化,明显减少细胞的凋亡(P＜0.01);同时,p38MAPK-shRNA转染及p38MAPK阻断剂明显降低MC3T3-E1细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、caspase-3及促凋亡基因bax蛋白表达,上调凋亡抑制基因bcl-2,与高糖组和无关转染组相比,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 慢病毒介导p38MAPK靶向RNA干扰可通过抑制p38MAPK 信号通路的活化,降低p-p38MAPK、caspase-3、bax表达,上调bcl-2表达,最终抑制高糖所诱导的MC3T3-E1成骨细胞的凋亡.

Abstract：

Objective To examine the role of p38MAPK in high glucose-induced apoptosis of osteoblast MC3T3-E1 cell line, and to investigate its effect on the expressions of apoptosis-related molecules including caspase3, bax, and bcl-2. Methods The lentiviral vector containing short hairpin RNA targeting p38MAPK was constructed. The cultured osteoblast MC3T3-E1 cell were divided into 5 groups:normal control group(A group), high glucose group(B group), p38MAPK-shRNA transfection group(C group), signal transduction inhibitor group(D group), and transfection with negative control siRNA group(E group). RT-PCR was used to determine the p38MAPK mRNA expression levels in MC3T3-E1 cells. Flow cytometry(FCM)was employed to detect the cell apoptotic percentage. The protein levels of apoptosis-related molecules p38MAPK, p-p38MAPK, caspase-3, bax, and bcl-2 were assayed by Western blot. Ultrastructural alternation of MC3T3-E1 cell was observed under transmission electron microscopy(TEM). Results The lentiviral vector containing short hairp in RNA targeting p38MAPK was successfully constructed and transfected into MC3T3-E1 cells. RT-PCR result suggested that the siRNA targeting p38MAPK could effectively reduce the p38MAPK mRNA expression level induced by high glucose in MC3T3-E1 cell line. FCM showed siRNA significantly decreased high glucose-induced apoptosis percentage of MC3T3-E1 cells(P＜0.01). Meanwhile, we also found the siRNA significantly attenuated the proteins levels of p38MAPK, p-p38MAPK, caspase-3, and gene bax induced by high glucose in MC3T3-E1 cells, whereas the protein level of gene bcl-2 was enhanced remarkably when compared with high glucose group and negative control siRNA group(P＜0.01, P＜0.05).Conclusion The iRNA targeting p38MAPK suppressed high glucose-induced MC3T3-E1 cell apoptosis via inhibiting the activation of p38MAPK signaling pathway, thereby reducing the expressions levels of p-p38MAPK, caspase-3 and gene bax, and up-regulating the level of gene bcl-2.     

先天性巨大蛛网膜囊肿并脑积水合并胸椎神经鞘膜瘤1例

1临床资料患者男性,32岁,汉族,因右下肢无力1年,加重4月,胸背痛10 d于2012年1月4日入院。患者缘于1年前无明显诱因出现右下肢乏力,无感觉异常,无大小便障碍,无头昏、头痛等,能正常行走及进行日常工作生活,未重视。4月前右下肢无力明显加重,仍无其他伴随症状,在外院行腰椎CT平扫,诊断为"腰椎间盘突出",对症治疗无效。2011年12月     

狂犬病误诊为精神障碍1例分析

狂犬病是狂犬病病毒侵犯中枢神经系统所致的急性人兽共患传染病,临床表现为特有的恐水怕风、咽肌痉挛、进行性瘫痪等,亦可表现为神经精神症状［1］。现将解放军第324医院2012年1例误诊为精神障碍的病例报道如下。     

阿格列汀联合高压氧舱内运动意念对糖尿病无症状脑梗死功能损害的疗效观察

目的 评估阿格列汀联合高压氧舱内运动意念对糖尿病无症状脑梗死（SCI）患者功能损害的疗效。方法 选取60 例新诊断2 型糖尿病SCI 患者为研究对象,将研究对象随机分为阿格列汀治疗组（A 组）和阿格列汀联合高压氧舱内运动意念组（B 组）,每组30 例。治疗前后进行神经功能缺损程度和蒙特利尔认知评估量表评估,ELISA 测血清GP Ⅵ和尿11- 脱氢血栓素B2（11-DH-TXB2）水平,Western blot 检测微管相关蛋白2（MAP-2）的表达。结果 与A 组相比,B 组患者神经功能缺损程度、GP Ⅵ、11-DH-TXB2 及MAP-2 表达水平降低（P <0.05）,而B 组患者MoCA 评分高于A 组,其中视空间/ 执行能力、注意力与集中评分、综合评分增高（P <0.05）,计算、抽象思维、语言能力、记忆力及定向力评分比较,差异无统计学意义（P >0.05）,治疗前后两组组内差异呈时间依赖性。结论 阿格列汀联合高压氧舱内运动意念可更好地促进糖尿病SCI 患者血栓溶解吸收和脑损伤恢复,改善神经认知功能。     

AP-1活化在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨转录活化蛋白-1（activator protein-1，AP-1）在高糖诱导的肾小管上皮细胞表型转化中的作用。方法将体外培养的人肾小管上皮细胞（human kidney proximal tubular epithelial cell，HK2）分为正常对照组、高糖组、AP-1阻断组。光镜、透射电镜观察细胞形态的改变，免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和细胞角蛋白（cytokeratin，CK）的表达，用凝胶电泳迁移率改变分析法（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）检测HK2细胞AP-1的改变，RT—PCR法检测CKmRNA的表达，Westernblot检测α-SMA蛋白的表达。结果高糖作用48h后，HK2细胞由椭圆形贴壁生长变为长梭形，胞体拉长，透射电镜下，细胞表面微绒毛明显减少，胞质内粗面内质网丰富，而AP-1阻断组较高糖组明显减轻；EMSA结果分析表明，在高糖刺激下，AP-1结合活力较正常对照组增加79．22％（P〈0．05），而AP-1阻断剂可明显抑制AP—1的活化，较高糖组降低51．19％（P〈0．05）；免疫细胞化学和RT—PCR检测显示，高糖组和AP-1阻断组CKmR—NA和蛋白水平明显降低（P〈0．05），而AP—1阻断组显著高于高糖组（P〈0．05）；免疫细胞化学和Westernblot检测显示，高糖组和AP-1阻断组α—SMA蛋白表达明显高于正常组（P〈0．05），而AP-1阻断组显著低于高糖组（P〈0．05）。结论高糖能够导致肾小管上皮细胞AP-1活化，诱导其表型转化。