Wnt/β-catenin 信号通路与器官纤维化的关系

Wnt 基因是一种原癌基因,1982年 Nusse 等［1］在用小鼠乳头瘤病毒（mouse mammary tumor virus, MMTV）诱导小鼠乳腺癌过程中发现了 Wnt 基因,由于该基因的激活依赖 MMTV 的插入（insertion）,因此被命名为 Int-1。后研究发现 Int-1基因与1973年 Sharma 报道的果蝇的无翅基因 Wingless （wg）为同源基因,因此将两者合并称为 Wnt 基因［2］。在人类已发现和经实验证实共有19个 Wnt基因家族成员［3］,其编码的 Wnt 蛋白属于分泌型糖蛋白,根据信号转导的不同方式方式,Wnt 信号转导途径可分为两条：经典 Wnt／β-catenin 途径（canonical Wnt／β-catenin signal pathway）和非经典的 Wnt 信号途径（noncanonical Wnt signal path-way）,后者又包括 Wnt-平面细胞极性途径（the pla-nar cell polarity,PCP,即 Wnt／PCP 途径）和 Wnt-Ca2＋途径［4］。Wnt 信号通路参与调控细胞的增殖、分化、凋亡、癌变及机体免疫等生理病理过程。近期研究证实：Wnt 信号通路的异常与肾脏、肝、肺、皮肤等各种组织器官纤维化疾病的发生与进展关系密切。     

糖尿病大鼠肾组织中miR-21和SnoN表达的变化

目的探讨糖尿病(DM)大鼠肾组织中微小核糖核酸-21(miR-21)和核转录共抑制因子(SnoN)在肾纤维化过程中的表达变化及其可能机制。方法用链脲佐菌素复制DM大鼠模型,并设对照组(NC),每组n=8。10周后处死大鼠,观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色、Western blot及RT-q PCR检测miR-21、SnoN、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3(Ser423/425)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)的表达。结果与对照组相比,DM组肾组织p-Smad3(Ser423/425)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达增加(P0.05),SnoN、E-cadherin蛋白表达减少(P0.05),但SnoN mRNA和miR-21表达明显上调(P0.05),并伴有collagenⅠ、collagenⅢ和FN在间质沉积增多。结论 TGF-β1可能上调miR-21表达,抑制SnoN翻译水平的表达,促进DN的纤维化病变。     

SnoN对高糖诱导大鼠原代肾小管上皮细胞纤维连接蛋白合成的影响

目的: 观察核转录共抑制因子SnoN (Ski-related novel protein N)对高糖诱导大鼠原代肾小管上皮细胞(RTECs)纤维连接蛋白(FN)合成的影响。方法: 原代培养大鼠RTECs,免疫荧光细胞化学和Western blotting检测培养细胞的上皮性钙黏蛋白、 角蛋白-18和α-平滑肌肌动蛋白表达,鉴定培养细胞;正常糖(5.5 mmol/L)、高糖(25 mmol/L)和相同渗透压的甘露醇分别培养RTECs 30 min、2 h、12 h、24 h、48 h、72 h和96 h;SnoN siRNA转染RTECs,分为对照组、高糖组、control siRNA组和SnoN siRNA组;Western blotting和免疫细胞化学检测不同处理组RTECs中SnoN和FN蛋白的表达;RT-PCR检测FN mRNA。结果: 与正常糖培养组相比,高糖刺激能抑制 RTECs中SnoN蛋白表达,且呈时间依赖性;高糖刺激能使RTECs中FN蛋白和mRNA表达增加;与单纯高糖培养组相比,转染SnoN siRNA 能进一步促进高糖诱导的RTECs中FN蛋白表达(P<0.05)。结论: SnoN表达减少参与了高糖诱导的RTECs中FN合成过程。     

高血糖和蛋白尿促进肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨糖尿病(DM)病程中高血糖和蛋白尿与肾小管上皮细胞凋亡的关系.方法:SD大鼠随机分为对照组和糖尿病组,注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病,分别于糖尿病2周、4周、8周、16周和24周处死动物;检测血糖和24 h尿蛋白量,免疫组织化学检测Bcl-2和Bax蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:与对照组相比,...     

胰岛素控制血糖对糖尿病大鼠肾组织Smad7表达及纤维化病变的影响

 目的：观察胰岛素控制糖尿病大鼠血糖后是否能上调肾组织Smad7的表达,减轻或延缓糖尿病肾病(DN)肾纤维化病变的发生发展。方法：链脲菌素复制大鼠糖尿病模型,随机分为糖尿病组(DM组) 和胰岛素治疗组(INS组) (n=8);INS组于成模13周起用胰岛素将血糖控制在4~7 mmol/L;同时设正常对照组(NC组)(n=8)。17周处死大鼠,检测相应生化指标,观察胰腺和肾组织病理学改变,免疫组化和Western blotting检测各组大鼠肾组织组织转化生长因子β1 (transforming growth factor β1, TGF-β1)、Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor 2, Smurf2)、Smad7、 E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、层连蛋白(fibronectin, FN)和胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)的蛋白表达。结果：与NC组比较,DM组大鼠体重显著减轻,24 h尿蛋白、血糖和甘油三酯显著升高(P<0.05),病理检查显示胰岛被破坏,肾组织TGF-β1、Smurf2、α-SMA、FN和collagenⅠ蛋白的表达均显著增加(P<0.05),并伴有肾小管Smad7和E-cadherin的表达减少(P<0.05);而经胰岛素控制血糖后,INS组大鼠较DM组体重逐渐增加,24 h尿蛋白和血糖均显著降低 (P<0.05),肾纤维化病变明显改善,TGF-β1、Smurf2、α-SMA、FN和collagenⅠ蛋白的表达均显著减少(P< 0.05),Smad7和E-cadherin的表达显著上调(P<0.05)。结论：控制血糖能恢复糖尿病大鼠肾组织Smad7蛋白表达水平,减少细胞外基质的沉积,延缓DN的纤维化进展,其机制可能与肾组织中TGF-β1和Smurf2表达降低、Smad7蛋白的泛素化降解减少有关。     

Wnt5a在糖尿病大鼠肾组织中表达及意义

目的 探讨Wnt5a基因及蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达及意义.方法 链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导大鼠糖尿病模型,分为2、4、8、12、16、24周组,每一时间组均设正常对照,测定各组血糖、24 h尿蛋白、血肌酐水平.免疫组化方法检测Wnt5a及FN蛋白表达,蛋白免疫印迹(western blotting)检测Wnt5a蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应检测Wnt5a及FN基因表达.结果 与正常对照组比较,糖尿病组Wnt5a蛋白表达分别增多了65.5%、72.2%、60%、68.8%、68.8%及63.0%(P＜0.01);糖尿病各组Wnt5a和FN mRNA的表达分别增多了50.9%、50%、35.7%、50.9%、55%、54.2%和35.5%、64.6%、34.1%、61.8%、66.7%、64.6%(P＜0.01);Wnt5a与FN mRNA表达水平呈正相关(r=0.714,P＜0.01).结论 Wnt5a蛋白和基因在糖尿病大鼠肾组织表达增多,Wnt5a可能参与了糖尿病的发生发展过程.     

SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义

目的：动态观察核转录共抑制因子SnoN蛋白在糖尿病大鼠肾组织中的表达变化，探讨其在糖尿病肾病（DN）发病机制中的作用。方法：SD大鼠随机分为3组，分别为糖尿病2周（DM2）、4周（DM4）和8周（DM8）组，每组均设相应的正常对照，链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病大鼠模型；免疫组织化学法检测肾组织中SnoN、TGF-β₁、Smad2/3、APC的表达；Western印迹法检测肾皮质SnoN蛋白的水平；生化方法测定血糖、血肌酐及24 h尿蛋白量；光镜检查肾组织的形态改变。结果：Western印迹和免疫组化检测发现DM2大鼠肾组织中SnoN的表达与正常组相比差异无显著，DM4组明显减少(P<0.01)，至8周时减少为正常对照组的42%。DM2组，大鼠肾小管上皮细胞中TGF-β₁、Smad2/3、APC较正常组显著增多，并随病程进展而增加（P<0.01）；DM4和DM8组，SnoN蛋白表达的减少与TGF-β₁、Smad2/3、APC表达增多呈显著负相关（P<0.01）。结论：糖尿病大鼠肾脏TGF-β₁表达增多，可能通过APC依赖的泛素化作用使SnoN蛋白降解，从而在DN的发病机制中起重要作用。     

丹芪合剂和依那普利对糖尿病大鼠肾组织PTEN的影响

目的研究丹芪合剂和依那普利对糖尿病(DM)大鼠肾组织第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)表达的影响,探讨丹芪合剂和依那普利治疗糖尿病肾病(DN)的作用及机制。方法将SD大鼠分成对照组、糖尿病组、丹芪合剂治疗组和依那普利治疗组(n=8)。尾静脉注射链脲菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型;12周处死大鼠,检测相应生化指标和计算肾脏指数;观察肾组织病理学改变;免疫组化和Western blotting检测肾组织PTEN、TGF-β1、p-AKT1(Ser473)和FN蛋白的表达;RT-PCR检测PTENmRNA的表达。结果丹芪合剂和依那普利能减轻DM大鼠肾脏肥大,显著改善肾功能,减轻DN肾脏病变及肾间质FN表达,下调TGF-β1和p-AKT1(Ser473)表达,上调PTEN蛋白和mRNA的表达。结论丹芪合剂和依那普利可能通过上调肾组织PTEN表达,抑制AKT1激活,减少FN的沉积,减轻或延缓了DN的病变。     

肾脏纤维化的负调节因素

肾脏纤维化过程十分复杂,受到多种因素的作用,但总体上可以归结为两方面,一方面是促进纤维化的因素,为正调节因素;另一方面是抗纤维化的因素,为负调节因素。近年来,发现了一些肾脏纤维化的内源性负调节因素,比较公认的有肝细胞生长因子,骨形态发生蛋白,核心蛋白聚糖和过氧化物酶体增殖物激活受体γ等,本文旨在对这四种负调节因素及其作用机制的研究进展作一综述。