基于血浆代谢组学分析金欣口服液治疗小鼠RSV肺炎的作用机制

目的:通过GC-MS技术分析BALB/c小鼠血浆内源性代谢产物的相对含量变化,阐明金欣口服液治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的作用机制。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,首次滴鼻2 h后予金欣口服液(剂量27.6 g·kg-1·d-1)灌胃治疗,连续滴鼻3 d后各组处死5只小鼠取肺组织行组织病理学检查,连续给药7 d后采集各组小鼠的血浆,运用GC-MS检测(m/z 50~500)血浆内源性代谢物及其相对含量的变化,分析其可能参与的代谢通路。结果:RSV肺炎小鼠的血浆中共测得32种内源性代谢产物,其中乳酸、尿素、谷氨酰胺、葡萄糖、花生四烯酸和1,5-脱水山梨醇为差异代谢产物,主要与花生四烯酸、谷氨酰胺、丙酮酸的代谢通路有关。结论:金欣口服液治疗RSV肺炎可能与调节RSV感染导致的代谢紊乱相关。     

金欣口服液对RSV肺炎尿液代谢物的影响

目的探讨金欣口服液治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的可能作用机制。方法将48只BALB/c小鼠随机分为正常组、RSV肺炎模型组、金欣口服液组,每组16只。RSV肺炎模型组和金欣口服液组小鼠用RSV悬液滴鼻感染小鼠建立RSV肺炎模型。金欣口服液组予金欣口服液27.6 g/(kg·d)灌胃,正常组和RSV肺炎模型组小鼠给予等量的生理盐水灌胃。连续灌胃至第4天每组处死5只小鼠进行病理学检查,其他小鼠于第6天分别收集尿液,运用GC-MS检测尿液中所含有的代谢物及其相对含量的变化。结果RSV肺炎模型组小鼠肺脏可见间质多灶性炎性浸润,肺泡壁轻度充血,明显增厚。金欣口服液组小鼠肺部炎症较RSV肺炎模型组小鼠肺部炎症明显减轻。RSV肺炎小鼠的尿液中共测得38种代谢产物,其中乳酸、甘氨酸、棕榈酸、硬脂酸为差异性代谢产物,RSV肺炎模型组乳酸、甘氨酸、硬脂酸、棕榈酸相对含量明显高于正常组和金欣口服液组(P0.05)。结论金欣口服液可能通过调节体内能量代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢治疗RSV肺炎。     

基于GC-MS代谢组学的金欣口服液治疗RSV感染的体外研究

目的:通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析Hep-2细胞内源性代谢产物的相对含量变化,阐明金欣口服液体外抗RSV感染的作用机制。方法:RSV感染接种于6孔板上的Hep-2细胞,予金欣口服液治疗,24 h后予以液氮淬灭细胞,先后加入水-甲醇-氯仿(v:v:v,1:8.1:0.9)以便取少量细胞悬浮液行蛋白定量和萃取细胞代谢物,运用GC-MS检测细胞样品内源性代谢物及其相对含量的变化,并分析其可能参与的代谢通路。结果:RSV感染的细胞样本中共测得29种内源性代谢产物,其中谷氨酰胺、γ-氨基丁酸、甘氨酸、柠檬酸、乳酸等为差异代谢产物(P0.05),主要与谷氨酰胺、甘氨酸、丙酮酸代谢通路有关。结论:金欣口服液体外治疗RSV感染的机制可能与调节RSV感染后引起的代谢紊乱有关。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠IFN-α表达的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c小鼠干扰素-α(IFN-α)表达的影响.方法:将BALB/c小鼠按RSV首次滴鼻至取标本时间分为三大组,每大组分别在RSV首次滴鼻后24,72,144 h后取支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA法检测BALF中所含IFN-α浓度,观察金欣口服液对IFN-α表达的影响,利巴韦林为阳性对照.结果:RSV感染24 h后小鼠BALF中IFN-α的表达显著增高,其中金欣预防组(385.38±16.54) ng·L-1能上调IFN-α的表达(P＜0.01);RSV感染72 h后小鼠BALF中IFN-α上调作用仍较显著,但是较之于24 h时IFN-α的表达明显有所下降,其中金欣治疗组(131.41±6.96)ng·L-1和金欣预防组(32.83 ±4.77) ng·L-1组均能上调IFN-α的表达(P＜0.01),且金欣治疗组上调作用更为明显(P ＜0.01);RSV感染144 h后小鼠BALF中IFN-α的表达量显著减少(P＜0.01),金欣治疗组(14.21 0.80) ng·L-1下调IFN-α表达(P＜0.01).结论:在RSV感染早期,金欣口服液预防组和治疗组能显著上调BALB/c小鼠IFN-α的表达;随着感染时间延长,IFN-α表达下降,金欣口服液能进一步下调其表达水平,以促进机体恢复.     

金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠TNF-α表达的调控作用

目的:通过研究不同时间点金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,进一步阐明金欣口服液治疗RSV肺炎的作用机制。方法:体外实验:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,金欣口服液合药血清进行干预,24h后收集细胞上清,ELISA法检测各组TNF-α含量;体内实验:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液不同剂量及给药方式进行干预,并于首次滴鼻后24、72、144h取各组小鼠支气管肺泡灌洗液,ELISA法检测TNF-α表达及金欣口服液的干预效果。结果:RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠后24h,TNF-α表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TNF-α表达明显下调(P<0.01);72h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达虽较正常组高(P<0.05),但较24h组明显下降(P<0.01),而金欣口服液等效剂量预防及治疗组TNF-α表达较RSV感染组均明显升高(P<0.01);144h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达较正常组无差异(P>0.05),而金欣口服液高剂量及等效剂量治疗组TNF-α表达均较RSV感染组明显升高(P<0.05)。结论:金欣口服液能显著下调RSV感染初期TNF-α的高表达,且随着感染时间的延长,可适当上调TNF-α的表达,表明金欣口服液对RSV感染后体内TNF-α的表达具有一定的双向调节趋势,这可能是其治疗RSV肺炎的作用机制之一。     

基于GC-MS代谢组学的黄芩素干预RSV肺炎小鼠肝损害作用机制探究

目的通过基于气相色谱-质谱联用(GC-MS)的代谢组学技术检测小鼠RSV肺炎对肝脏的损害,阐明黄芩素保护肝损害的作用机制。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,予黄芩素混悬液灌胃干预,并于滴鼻7d后处死各组小鼠,取肝组织,运用GC-MS检测肝组织内源性代谢物及其相对含量的变化,分析其可能参与的代谢通路。结果 RSV肺炎小鼠的肝脏组织中共测得31种内源性代谢产物,其中天冬氨酸、甘氨酸、延胡索酸、苹果酸、肌醇、棕榈酸、肌苷、硬脂酸、胆固醇、松醇、麦芽糖等为差异代谢产物(P0.05),主要与天冬氨酸、甘氨酸、磷酸肌醇代谢通路有关。结论运用基于GC-MS的代谢组学技术能从微观角度检测RSV肺炎对肝脏的损害,黄芩素可以改善肝脏代谢功能,从而发挥保护作用。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR4及TAK1表达的调控作用

目的通过观察金欣口服液(炙麻黄、苦杏仁、生石膏、黄芩等)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺组织TOLL样受体4(TLR4)及转化生长因子β活化激酶(TAK1)表达的调控趋势,探讨金欣口服液抗病毒机制以及TLR4信号通路途径。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液给药进行干预,并于首次滴鼻后24 h取各组小鼠肺组织,Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4、TAK1蛋白表达。结果 RSV感染BALB/c小鼠后24h,TLR4﹑TAK1蛋白表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TLR4﹑TAK1表达明显下调(P<0.01);金欣组蛋白表达量最低,与利巴韦林组相比,P<0.01,利巴韦林组与RSV感染组相比P<0.01。结论金欣口服液能抑制TLR4信号转导通路中TLR4/TAK1蛋白的表达,TLR4的蛋白表达与TAK1的蛋白表达呈正相关,金欣口服液抗RSV作用机制中的TLR4信号通路途径可能是通过TAK1实现的。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠RIG-I信号传导通路的影响

目的:研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中RIG-I信号传导通路的影响,探讨其可能的抗病毒机制。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,不同剂量金欣口服液灌胃给药进行干预,于首次滴鼻后24 h、72 h、144 h取各组小鼠肺组织,Real time RT-PCR分别检测RSV-M、RIG-I、IPS-I和IFN-β在mRNA水平的表达情况,Western Blot检测RIG-I和IPS-I在蛋白水平上的表达情况。结果:RSV感染24 h和72 h后,其肺组织中RIG-I、IPS-I和IFN-β的表达均较正常组显著升高,金欣口服液不同剂量组RIG-I、IPS-I和IFN-β表达较RSV组明显下调;144 h后,RIG-I、IPS-I和IFN-β表达量显著下调,金欣口服液不同剂量组能上调RIG-I、IPS-I和IFN-β的低表达。结论:RSV能诱导RIG-1信号传导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而金欣口服液能通过调控RIG-1信号通路从而调节IFN-β的表达。     

金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染RAW264.7细胞Toll样受体3表达的调控作用

目的:通过研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)活化诱导的Toll样受体3(TLR3)的干预作用,探讨其治疗RSV肺炎可能的免疫学机制。方法:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,采用金欣口服液含药血清进行干预,并设利巴韦林阳性对照,24h后收集细胞,Real time RT-PCR法测定TLR3 mRNA的表达变化;激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学染色法处理的各组细胞TLR3表达水平;ELISA法检测各组细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)含量,在核酸及蛋白水平探讨金欣口服液含药血清抗RSV感染的作用机制。结果:RSV感染RAW264.7细胞后24h,细胞中TLR3 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清中IL-6表达明显升高(P0.01),而金欣组TLR3及IL-6表达均显著低于RSV感染组(P0.01,P0.05),且效果优于利巴韦林组(P0.01,P0.05)。结论:金欣口服液含药血清能下调RSV活化诱导的TLR3及其下游炎症因子IL-6的高表达,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干扰素表达的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠Ⅰ型干扰素(IFN)-α/β表达的影响。方法:采用细胞培养、动物实验、ELISA(酶标记免疫吸附测定)法检测大鼠体内IFN-I表达量的变化。结果:金欣口服液预防组和中剂量组IFN-α表达量高于模型组(P<0.05);金欣口服液高、中剂量组IFN-β表达量高于模型组(P<0.05)。结论:金欣口服液抗RSV的机制可能与其通过上调RSV感染宿主体内Ⅰ型干扰素的表达,从而发挥Ⅰ型干扰素的抗病毒效应有关。     

苘麻子中脂肪酸成分的GC-MS分析

目的: 分析苘麻子中脂肪酸的组成并测定主要脂肪酸成分的含量。方法: 采用索氏提取法提取其脂肪酸,经甲酯化处理后,用GC-MS联用仪对其脂肪酸组成进行分析和鉴定。采用毛细管气相色谱法,甲酯化后以二十一酸甲酯为内标同时测定苘麻子中棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸的含量。结果: 共分离出10种脂肪酸,占脂肪油总量的99.43%。棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸的线性分别为33.6~336 mg·L^-1(r=0.999 0), 6.58~65.8 mg·L^-1 (r=0.999 9),33.4~334 mg·L^-1 (r=0.999 8),128.3~1 283 mg·L^-1 (r=0.999 5)。各成分的平均回收率分别为100.4%,100.6%,101.6%,101.0%,RSD分别为1.3%,1.5%,1.6%,2.1% (n=9)。结论: 鉴定了苘麻子中的10种脂肪酸并首次建立了其中4种主要脂肪酸成分的含量测定方法,可为苘麻子的质量评价提供依据。     

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+梓醇3 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+三七总皂苷12 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+草酸铵1.5 mg·L~(-1)组,雷公藤甲素3.5 mg·L~(-1)+青藤碱0.75 mg·L~(-1)组。流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况。结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P0.05)。而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显。结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡。而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性。     

新疆鼠尾草总酚酸的体外抗氧化活性

目的：研究新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物的体外抗氧化活性。方法：以40%乙醇提取和大孔吸附树脂纯化分别制备得到新疆鼠尾草总酚酸的提取物和纯化物,以维生素C（VC）为对照,通过体外化学模拟方法测定新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物的还原能力、对·DPPH自由基、羟基自由基（·OH）和超氧自由基（O₂^-·）的清除能力,研究新疆鼠尾草总酚酸的抗氧化活性。结果：新疆鼠尾草总酚酸提取物和纯化物清除·DPPH自由基的作用50%清除浓度（IC₅₀,分别为0.029,0.039 g·L^-1）弱于VC（IC₅₀0.018 g·L^-1）;对羟基自由基（·OH）的清除作用（IC₅₀分别为0.212,0.165 g·L^-1）强于VC（IC₅₀0.356 g·L^-1）;对超氧自由基（O₂^-·）的清除能力（IC₅₀分别为3.735,1.913 g·L^-1）弱于VC（IC₅₀0.390 g·L^-1）,其纯化物还具有一定的还原能力。结论：新疆鼠尾草总酚酸具有较强的抗氧化作用。     

苦瓜水提取物对高脂血症小鼠的降血脂作用研究

目的:探讨苦瓜水提取物对高脂血症模型小鼠的降血脂作用.方法:高脂饲养建立高脂血症小鼠模型,随机分成4组,即苦瓜水提取物高、低剂量组(30,10 g·kg-1)、左旋肉碱(1 g·kg-1)组、模型组,另取同步饲养的正常小鼠作为空白对照组,每组10只.连续灌胃给药4周后,眼眶后静脉丛取血,分离血清,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量;计算肝脏指数,HE染色观察肝脏组织形态学改变.结果:与模型组比较,各给药组小鼠血清TC,TG含量和肝脏指数均明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),其中苦瓜水提取物高剂量组小鼠血清TC,TG含量和肝脏指数,与模型组差异非常显著(P＜0.01);肝组织染色结果显示苦瓜水提取物能明显减少高脂血症小鼠肝脏的脂肪沉积.结论:苦瓜水提取物具有良好的降血脂作用.     

红曲发酵炮制前后对脾虚食积证小鼠的胃肠调节作用

目的:研究红曲发酵炮制对脾虚食积证小鼠的胃肠调节作用及其作用机制,为曲类中药的健脾消食作用机制探索新思路。方法:采用随机分组法将50只昆明小鼠分为5组,包括空白组、模型组、红曲未发酵组(1. 17 g·kg~(-1)·d~(-1)),红曲发酵组(1. 17 g·kg~(-1)·d~(-1)),多潘立酮组(3. 9 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只,连续灌胃给药10 d。对比红曲发酵炮制前后对脾虚食积证小鼠行为学、体质量、进食量、胃内残留率和小肠推进率的影响。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测红曲对脾虚食积证小鼠血清中胃动素(MTL),胃泌素(GAS),5-羟色胺(5-HT)和血管活性肠肽(VIP)水平的影响;采用苏木素-伊红(HE)染色法研究红曲对脾虚食积证小鼠胃肠组织形态学的影响;基于细菌16S rRNA基因序列的V3-V4区,通过高通量测序平台Illumina MiSeq研究红曲对脾虚食积证小鼠肠道菌群结构的调节作用。结果:与模型组比较,红曲发酵后可恢复脾虚食积证小鼠的体质量和进食量,显著降低胃内残留率(P 0. 01)和显著升高小肠推进率(P 0. 01)。红曲可增加脾虚食积证小鼠胃肠激素MTL和5-HT的水平,降低VIP水平;红曲能改善脾虚食积证小鼠胃肠组织形态,改善脾虚食积证小鼠胃黏膜的轻微充血和局部腺体排列不整齐,显著升高脾虚食积证小鼠小肠绒毛长度、增加小肠黏膜厚度;红曲可以恢复脾虚食积证小鼠肠道菌群结构,增加有益菌双歧杆菌属和乳酸杆菌属的相对丰度,降低有害菌大肠埃希菌-志贺菌的相对丰度。结论:红曲发酵后能调节脾虚食积证小鼠的胃肠功能,其机制可能与调节胃肠激素水平、改善胃肠组织形态、恢复肠道菌群结构有关。     

痰热清注射液对呼吸机相关性肺炎高热患者C反应蛋白和感染参数的影响

目的: 探讨痰热清注射液对呼吸机相关性肺炎高热患者C反应蛋白（CRP）和感染参数的影响。 方法: 选择胜利石油管理局汽修卫生院56例呼吸机相关性肺炎高热患者,按数字法随机分为对照组（n=28）和观察组（n=28）,对照组采用常规治疗包括盐酸左氧氟沙星0.4 g静滴,qd,干扰素-γ,皮下注射,1次/d,12周后改隔天1次;观察组在此基础上加用痰热清注射液静滴,1个疗程用药10 d,观察两组治疗前后C反应蛋白和感染参数等指标的变化。 结果: 观察组与对照组临床有效率分别为92.86%（26/28）,75.00%（21/28）,具有统计学差异（P<0.05）。观察组治疗前CRP含量为（43.12±0.75） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（1 872.99±11.25）ng·L^-1;治疗后CRP含量为（11.51±0.22） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（673.52±10.71）ng·L^-1;对照组治疗前CRP含量为（44.82±0.92） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（1 863.02±11.93）ng·L^-1;治疗后CRP含量为（19.64±0.84） mg·L^-1,NT-proBNP含量为（894.12±10.73）ng·L^-1;治疗后两组CRP均呈降低趋势,观察组降低优于对照组（P<0.05）;观察组治疗后中性细胞数（GRAN）为（3.33±0.34）×10⁹/L、白细胞（WBC）为（1.52±0.71）×10⁹/L、淋巴细胞比率（LYM）为（51.61±7.64）%;对照组治疗后中性细胞数（GRAN）为（5.92±0.15）×10⁹/L、白细胞（WBC）为（2.92±0.04）×10^-9/L、淋巴细胞比率（LYM）（66.18±6.15）%;与治疗前比较,两组GRAN,WBC,LYM等指标均有明显降低（P<0.01）,观察组降低程度显著优于对照组（P<0.05）。 结论: 呼吸机相关性肺炎高热患者采用痰热清静滴可以有效地抑制炎症反应,起到有效抗菌的效果。     

肝癌全方及其不同治法拆方抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的作用

目的:探讨肝癌全方及不同治法拆方抗肿瘤作用的分子机制。方法:体外培养SMMC7721人肝癌细胞,分别给予2.5~100 g·L-1肝癌全方、清热方、活血方、健脾方干预24 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;分别采用1.25~20 g·L-1肝癌全方,5~20 g·L-1清热方和活血方及20~120 g·L-1健脾方干预24 h后,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测相关基因的表达;分别采用20 g·L-1肝癌全方和清热方,10 g·L-1活血方及120 g·L-1健脾方干预SMMC7721细胞24 h后,通过蛋白免疫印迹法检测相关蛋白的表达,通过碘化丙啶(PI)/RNase staining solution试剂染色检测细胞周期的改变。结果:与空白组比较,肝癌全方及其不同治法拆方能抑制SMMC7721细胞的增殖,并呈现量效关系(P0.05)。与空白组比较,5~20 g·L-1清热方呈现量效抑制细胞周期依赖性激酶阻滞基因1B(CDKN1B)基因表达(P0.05),20~120 g·L-1健脾方也呈现量效抑制CDKN1B基因表达(P0.05);5~20 g·L-1肝癌全方明显抑制糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)基因表达(P0.05),且量效显著;5~20 g·L-1清热方量效抑制SGK1基因表达(P0.05);20~120 g·L-1健脾方也抑制SGK1基因表达(P0.05),同时肝癌全方及清热、活血治法方可抑制SGK1磷酸化蛋白的表达(P0.05);1.25,20 g·L-1肝癌全方可促进叉头框蛋白O3(FOXO3)基因表达(P0.05);15,20 g·L-1清热方明显促进FOXO3基因表达(P0.05);20 g·L-1活血方促进FOXO3基因表达(P0.05)。与空白组比较,全方组G2期细胞数增加(P0.05),清热组和健脾组G2期细胞数增加更明显(P0.05);肝癌全方及不同治法拆方能够抑制细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)蛋白的表达,其中以健脾组抑制效果最显著。结论:肝癌全方及其不同治法拆方通过改变细胞增殖和周期,从而发挥抑制肝癌的作用。     

厚朴醇提物与远志醇提物配伍对大鼠粪便代谢物的影响

目的:考察厚朴醇提物、远志醇提物及二者配伍对大鼠粪便代谢物的影响,分析其潜在的代谢通路,为探索厚朴缓解远志所致胃肠动力障碍的机制提供实验依据。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为空白组,厚朴醇提物组(3. 50 g·kg~(-1)),远志醇提物组(1. 75 g·kg~(-1)),配伍组(3. 50 g·kg~(-1)+1. 75 g·kg~(-1)),连续灌胃给药3 d,收集大鼠末次给药24 h内的粪便,采用UPLC-Q-TOF-MS采集粪便代谢物数据,流动相乙腈(A)-0. 1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0～0. 5 min,3%A;0. 5～12. 5 min,3%～70%A; 12. 5～13 min,70%～90%A; 13～16 min,90%～97%A; 16～17 min,97%～100%A; 17～22 min,100%A; 22～23 min,100%～3%A),电喷雾离子源,正、负离子模式数据采集范围m/z 50～1 200;借助Progenesis QI v2. 0,SIMCA-P 14. 0,SPSS 20. 0,MetaboAnalyst 4. 0等软件进行多元分析,筛选特征代谢标志物并分析其相关代谢通路。结果:共筛选出5-亚胺甲基四氢叶酸,L-3-羟基犬尿氨酸,7,8-二氢蝶酸等17个特征代谢标志物,其相关代谢通路为不饱和脂肪酸的生物合成、亚油酸代谢、维生素B_6代谢、叶酸生物合成等。结论:厚朴缓解远志所致胃肠动力障碍的作用机制可能与嘌呤代谢、叶酸生物合成、色氨酸代谢、初级胆汁酸生物合成有关。     

裸花紫珠提取物的抗乳腺癌转移作用及其机制

目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extracts from Callicarpa nudiflora,ECN)的抗乳腺癌转移作用及其作用机制。方法:采用尾静脉注射肿瘤细胞法建立裸鼠实验性肺转移模型,24 h后将实验动物随机分为空白组,ECN低、中、高剂量组(0.125,0.25,0.5 g·kg-1),空白组给予等量溶剂,每日ig给药1次,连续8周。给药结束后,采用巢式PCR法检测裸鼠肺组织中人细胞角蛋白19(CK19)基因的表达,以确定肿瘤细胞的肺转移程度(n=10)。建立肿瘤细胞体外迁移、侵袭模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94(阳性对照)处理MDA-MB-231细胞14 h(n=4),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭的影响;建立肿瘤细胞体外黏附模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94处理MDA-MB-231细胞60 min(n=3),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外黏附能力的影响;采用Western blot法,检测MDA-MB-231细胞分别经100,200 mg·L-1ECN处理24 h后p-锌指转录因子(p-Snail)和上皮性钙黏附蛋白(Ecadherin)的表达情况。结果:体内研究表明,ECN可显著降低裸鼠肺组织中人CK19 mRNA的表达(P0.01);体外迁移实验发现,ECN 100,200 mg·L-1组的迁移细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外侵袭实验显示,ECN低、高剂量组的侵袭细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外黏附实验表明,ECN可干扰肿瘤细胞与细胞外基质蛋白之间的黏附(P0.01);Western blot实验结果表明,ECN可显著抑制p-Snail,并增加E-cadherin的表达。结论:ECN具有明显的抗乳腺癌转移作用。抑制细胞内p-Snail的活化可能是抗转移作用的机制之一。