“扎根理论”于温病学科建设的研究思路及理论价值探析

分析温病学术理论发展与温病学教学、临床应用现状,认为有关温病文献研究可从深度与广度进行再拓展、再挖掘。介绍"扎根理论"研究方法,结合温病学科学术性质及特点,探讨"扎根理论"在该学科学术理论建设中可行的研究模式与研究思路,剖析该研究对于温病学科学术建设的理论价值及应用前景。同时,基于"扎根理论"研究难点,提出研究过程中需注意的问题。     

副凋亡在肿瘤中的研究进展

<正>肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一,流行病学数据显示,2018年全球约有1 810万肿瘤新发病例以及960万肿瘤死亡病例;肿瘤的发病率和死亡率在全球范围内迅速增长,其难治性及危害性使得肿瘤成为全球最重要的生命科学领域之一^[1]。细胞死亡方式的研究对于肿瘤有重要意义,如细胞凋亡的发现对肿瘤细胞的清除及肿瘤治疗学产生了巨大影响,但单一方式的治疗常常伴随耐药性的产生^[2-4];与此同时,诱导肿瘤细胞其它死亡形式在临床抗肿瘤治疗中也发挥重要的作用^[5]。     

蛇床子素诱导内质网应激抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的机制研究＊

目的 研究蛇床子素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法 采用20 - 100 μM蛇床子素干预SMMC7721人肝癌细胞24 h、48 h和72 h，运用MTT方法检测细胞增殖；采用20 - 80 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞24 h，运用流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达；采用 60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h，运用流式细胞术检测细胞周期，以实时荧光定量PCR技术检测GRP78、DDIT3、GADD34、ATF4、EIF2A、GDF15、CDKN1B、FOXO3、RICTOR、SGK1基因表达，Western blot方法检测CyclinD1、CyclinE1、p27^Kip1和CDK4细胞周期蛋白及GRP78、GRP94、PERK、XBP-1s、CHOP、p-eIF2α(Ser51)内质网应激蛋白表达。各实验均以0.1% DMSO为对照组，并以0.1 μM毒胡萝卜素为内质网应激诱导剂组。结果 与对照组比较，100 μM蛇床子素干预24 h显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，其抑制率为36.76%（P < 0.05）；60 - 100 μM蛇床子素干预48 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为30.84%-52.49%（P < 0.05）；40 - 100 μM蛇床子素干预72 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为32.7%-73.15%（P < 0.05）。大于60 μM蛇床子素可诱导SMMC7721肝癌细胞晚期凋亡且显著抑制促凋亡蛋白Bax表达（P < 0.05）。60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h后，G1期细胞数增加、G2期和S期减少，且CyclinD1、CyclinE1和p27^Kip1蛋白表达显著被抑制（P < 0.05）。20 - 80 μM蛇床子素处理SMMC7721肝癌细胞24 h后，均显著促进GRP78、DDIT3（CHOP）、ATF4、FOXO3、RICTOR和SGK1基因表达（P < 0.05）； 20 μM蛇床子素显著促进GADD34和EIF2A基因表达（P < 0.05）；80 μM蛇床子素显著促进GDF15基因表达（P < 0.05），且CHOP、XBP-1s蛋白表达显著增强。结论 蛇床子素通过诱导内质网应激反应以抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，从而发挥抗肝癌活性。     

氢化可的松诱发虚证模型小鼠的证候特征再评价及肾上腺皮质功能变化研究

目的研究氢化可的松诱发虚证模型小鼠的证候特征及其可能的物质基础。方法将60只雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组和模型组,每组30只。正常对照组自由饮水与摄食,模型组自由饮用剂量递减的氢化可的松溶液。其中,0.015 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用3天;0.010 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用5天;0.007 5 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量,饮用7天。在造模的第8天、第15天,采用本课题组建立的小鼠四诊标准采集技术与辨证方法判断小鼠的证候属性;于造模的第3天、第8天、第15天分批处死小鼠,取肾上腺组织,分别抽提RNA和蛋白质,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达,以Western blotting法检测类固醇合成急性调节蛋白(STAR)表达,并以ELISA方法检测血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。结果 ?与正常对照组比较,模型组小鼠在造模期间,消瘦、体质量增长显著减慢(P0.05),被毛蓬松易脱落、光泽度下降,活动度降低、喜蜷缩,体温尤其是尾部温度下降,爪部色泽变化不明显。②造模第15天,与正常对照组比较,模型组小鼠气虚证、阴虚证明显,肾上腺、脾脏与胸腺持续性萎缩(P0.05);血液ACTH水平下降(P0.05);肾上腺皮质激素合成过程重要受体Srb1、Ldlr基因表达降低(P0.01),类固醇激素合成酶Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达及其酶的调节因子Fdx1、Fdxr、Nr4a1、Nr4a2、Nr5a1基因表达显著下降(P0.05),以及STAR蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论氢化可的松复制的小鼠模型属于虚证模型,具有气虚与阴虚证的特征;参与肾上腺皮质激素合成的重要功能分子涉及相关证候的发生。     

经典气血阴阳虚证模型小鼠在“肾藏象”层面的证候物质基础研究

目的研究气血阴阳虚证模型小鼠在"肾藏象"层面的证候物质基础。方法以雄性ICR小鼠为对象,以控食法复制气虚证模型,以乙酰苯肼复制血虚证模型,以甲状腺素复制阴虚证模型,以氢化可的松复制阳虚证模型。动态观察小鼠体质量变化,检测各脏器变化;取肾脏、肾上腺和骨髓组织抽提RNA,以实时荧光定量PCR技术检测相关基因表达;以ELISA方法检测血清皮质酮含量。结果 (1)与正常对照组比较,控食组小鼠体质量下降最显著(P0.01),乙酰苯肼和氢化可的松组小鼠体质量也显著下降(P0.05);控食组和氢化可的松组小鼠脾脏与胸腺明显萎缩(P0.01),乙酰苯肼组小鼠脾脏显著肿大、而胸腺严重萎缩(P0.01)。(2)与正常对照组比较,控食组和乙酰苯肼组血清皮质酮水平显著升高(P0.05),而氢化可的松组显著下降(P0.001)。(3)控食组小鼠肾上腺合成皮质激素的重要酶Star、Cyp21a1、Cyp11b1表达显著升高(P0.05);肾脏Epo表达显著升高(P0.05),Csf2显著下降(P0.05);骨髓Tpo、IL-4表达显著上调(P0.05)。(4)乙酰苯肼组小鼠肾上腺Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1表达显著升高(P0.05);肾脏Epo、Csf2、Csf3表达显著升高(P0.05);骨髓Csf3、IL-4、IL-5、IL-6表达显著升高,而IL-1b和IL-7显著下降(P0.05)。(5)甲状腺素组小鼠肾上腺Cyp11b1表达显著升高(P0.05);肾脏Epo表达显著升高,Csf2显著下降(P0.05);骨髓Csf3、IL-2和IL-5表达显著下降(P0.05)。(6)氢化可的松组小鼠Star、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2表达显著下降(P0.05),肾脏Epo表达显著升高,而Csf1和Csf2显著下降(P0.05),骨髓Csf3、IL-1b、IL-5和IL-7表达显著下降,IL-4却显著升高(P0.05)。结论通过控制摄食量,给予乙酰苯肼、甲状腺素及氢化可的松,可以复制出相关的中医虚证模型,且在肾上腺、肾脏及骨髓等"肾藏象"层面存在相应的物质功能变化。     

UBE2D2基因在肝癌细胞中的作用及不同中医治法对其调控作用的影响

目的:观察不同中医治法对大鼠肝癌UBE2D2表达的调控差异,以及UBE2D2在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:采用DEN诱发大鼠肝癌,分别经中药健脾益气、清热解毒、活血化瘀等治疗后,Affy-metrix rat 230A GeneChip arrays检测肝癌组织UBE2D2表达的差异;设计2个人UBE2D2基因siRNA靶点,将重组质粒经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT法检测细胞生长增殖情况、Realtime-PCR检测该基因的表达差异。结果:芯片结果显示,UBE2D2基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中医治法对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;采用MTT法筛选到1个UBE2D2基因RNA干扰有效靶序列,转染6 d后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);实时荧光定量PCR检测表明,转染6 d后该基因的表达明显降低。结论:UBE2D2基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用。     

温补肾阳中药对虚证模型小鼠肾上腺皮质激素合成的调节作用

  目的：研究温补肾阳中药及其配伍对虚证模型小鼠肾上腺皮质激素合成的影响。  方法：120只雄性ICR小鼠随机分成10组,即对照组、模型组、淫羊藿(5.3 mg·kg-1·d-1)组、仙茅(4.3 mg·kg-1·d-1)组、巴戟天(4.3 mg·kg-1·d-1)组、杜仲(5.3 mg·kg-1·d-1)组、补骨脂(5.3 mg·kg-1·d-1)组、菟丝子(6.0 mg·kg-1·d-1)组、肉苁蓉(5.3 mg·kg-1·d-1)组以及配伍(各单味中药等比例混合,4.7 mg·kg-1·d-1)组,每组12只。除对照组外,其他各组小鼠灌胃给予0.66 mg·kg-1·d-1氢化可的松溶液,连续14 d,以复制药源性虚证模型。造模同时,各中药干预组及配伍组小鼠灌胃给予相应药液,连续14 d。末次给药后,称量小鼠体质量;采集血清和双侧肾上腺组织。ELISA检测血清皮质酮含量;PCR检测肾上腺相关基因的表达,包括类固醇激素合成酶(Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Hsd3b1)、胆固醇转运分子(Star、StarD3、Npc1、Npc2)、胆固醇摄取分子(Ldlr、Scarb1)、胆固醇合成限速酶(Hmgcr)、胆固醇储存分子(Lipe、Acat1)、胆固醇流出分子(Abca1、Abcg1)、胆固醇稳态分子(Srebf2、Nr1h3);Western blot检测肾上腺CYP11A1、CYP21A2、HSD11B1、StAR、NPC1、NPC2、LDLR、SRBI、HSL、ACAT1的蛋白表达。  结果：①与模型组相比,各中药干预组及配伍组小鼠的体质量和血清皮质酮含量无明显变化(P>0.05)。②与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Cyp21a1 mRNA表达和CYP11A1蛋白表达显著降低(P＜0.01);与模型组相比,淫羊藿组和仙茅组Cyp21a1 mRNA表达明显上调(P<0.05),各中药组及配伍组CYP11A1蛋白表达呈上调趋势。③与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Star和Npc1的mRNA表达及StAR和NPC1蛋白表达显著降低(P<0.05,P＜0.01),NPC2蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比,淫羊藿组、仙茅组、杜仲组、菟丝子组及配伍组StAR蛋白表达明显升高(P<0.05,P＜0.01),各中药组NPC1蛋白表达量增多,以补骨脂作用最为显著(P<0.05),除杜仲组外其他中药干预组及配伍组NPC2蛋白表达明显下调(P＜0.01)。④与对照组相比,模型组小鼠肾上腺Ldlr、Scarb1的mRNA表达以及LDLR、SRBI的蛋白表达均显著降低(P<0.05,P＜0.01);与模型组相比,仙茅组、补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组Ldlr mRNA表达明显下调(P＜0.01),杜仲组、菟丝子组及配伍组SRBI蛋白表达显著升高(P<0.05,P＜0.01)。⑤模型组小鼠肾上腺Hmgcr mRNA表达及HSL蛋白表达较对照组显著降低(P＜0.01);与模型组相比,仙茅组、巴戟天组、杜仲组、补骨脂组、肉苁蓉组Hmgcr mRNA表达明显降低(P<0.05,P＜0.01),淫羊藿组、补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组HSL蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。⑥模型组小鼠肾上腺Abcg1 mRNA表达较对照组显著升高(P＜0.01);与模型组比较,除肉苁蓉组外,其他各中药干预组及配伍组的Abcg1 mRNA表达均显著降低(P<0.05,P＜0.01)。⑦模型组小鼠肾上腺Srebf2 mRNA表达较对照组显著降低(P＜0.01);与模型组相比,补骨脂组、肉苁蓉组及配伍组Srebf2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P＜0.01),且补骨脂组、菟丝子组、肉苁蓉组及配伍组Nr1h3 mRNA表达显著降低(P<0.05)。  结论：温补肾阳中药可调节氢化可的松诱导的虚证模型小鼠肾上腺皮质激素的合成能力,其中以淫羊藿、仙茅、杜仲、菟丝子的作用较为显著。     

Y1细胞生物学特性及其在肾上腺皮质功能研究中的应用

肾上腺皮质功能减退、肾上腺糖皮质激素分泌减少是肾虚证发生的主要物质基础,因此肾上腺皮质细胞在探索肾虚及补肾机制研究方面具有重要价值。Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞(Y1细胞)已广泛用于肾上腺皮质功能的体外研究。综述Y1细胞的来源、不同细胞系的衍变、类固醇激素的合成途径以及Y1细胞增殖与功能相关的信号通路,以期为肾虚证发病机制、补肾中药的有效成分筛选及作用机制研究提供参考。     

PBL教学模式在中医学综合实验教学中的实践与评价

背景：探讨中医学综合实验课程引入PBL教学模式的教学效果。方法：观察我校选修该课程的2004级、2005级中医七年制2个本科生班学生,在PBL教学结束后发放并回收问卷调查表。结果：（1）大多数学生对该课程采用PBL教学产生了浓厚的兴趣,堂课气氛十分活跃。（2）71％．100％学生认为该课程引入PBL教学有利于其能力的培养,但是尚有一定比例（0．29％）学生不认可。（3）与传统教学相比较,PBL教学最大优点是提高了学生自主学习的积极性,增强了学生的中医科研思维能力,提升了学生的表达沟通能力。（4）值得注意的是,PBL教学形式相对复杂,学生负担增加,难以完全理解与消化所查阅的中医科研前沿文献。结论：中医学综合实验课程引入PBL教学模式达到预期教学目标,但如何探索PBL教学与传统教学相结合的新模式,值得进一步研究。     

同病异证H22肝癌小鼠甲状腺机能及激素合成关键基因表达特征

目的：观察同病异证H22肝癌小鼠甲状腺机能及激素合成相关基因表达特征。方法：采用标准化诊法技术在接种同样H22腹水癌细胞数的昆明种小鼠中,筛选出不同组别的同病异证肿瘤小鼠,以ELISA法检测血清甲状腺激素水平,以RTqPCR法检测激素合成相关基因mRNA水平的改变。结果：①筛选出濒危组、邪毒组、邪中组、邪微组,及邪中兼气虚组（简称气虚组）等5个同病异证组小鼠。②甲状腺激素T3在肿瘤早期有升高趋势,邪盛衰度增加则出现下降;T4在肿瘤发生后迅速出现抑制。③激素合成相关基因Tshr、Tpo、Nis、Tg等基因转录水平总体表现出邪盛衰度低者表达量相对较高,高者表达量相对较低的趋势。结论：肿瘤发生后,邪盛衰度与荷瘤小鼠甲状腺机能抑制程度有关,邪毒微弱时呈代偿状态,加重后转而出现失代偿状态,是因实致虚,同时激素合成关键基因亦发生相应变化,从而影响甲状腺激素水平。