板蓝根含药血清对病毒感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响

目的:研究板蓝根含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染RAW264.7细胞中干扰素-β(IFN-β),Toll样受体3(TLR3),TBK1,干扰素调节因子3(IRF3)表达的影响,阐释其可能的抗RSV机制,为临床使用提供实验依据。方法:本实验分为6组,分别为空白组,RSV感染细胞模型组,板蓝根含药血清低、中、高体积分数组(40%,50%,60%板蓝根含药血清),利巴韦林含药血清组(70%利巴韦林含药血清)。除空白组外,其余各组接种RSV造成病毒感染模型,采用板蓝根含药血清或利巴韦林含药血清进行干预,12 h后收集细胞及其上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中IFN-β含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264.7细胞中TLR3,TBK1,IRF3和IFN-βmRNA的表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测TLR3,TBK1,IRF3和p-IRF3蛋白的表达。结果:RSV感染RAW264.7细胞12 h后,与空白组比较,模型组TLR3,TBK1和IFN-βmRNA的表达显著升高,IFN-β,TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的表达也显著升高(P0.01),IRF3 mRNA和蛋白均无明显变化;与模型组比较,板蓝根含药血清中、高体积分数组能够显著下调RSV诱导的TLR3,TBK1和IFN-βmRNA的高表达(P0.05,P0.01),同时明显下调RSV诱导的TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的高表达(P0.05,P0.01),板蓝根含药血清各体积分数组的下调作用低于利巴韦林含药血清组,两者对IRF3 mRNA和蛋白均无明显调控作用。结论:RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而板蓝根含药血清通过下调TLR3信号通路关键信号分子TLR3,TBK1,p-IRF3使IFN-β适度表达。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR4及TAK1表达的调控作用

目的通过观察金欣口服液(炙麻黄、苦杏仁、生石膏、黄芩等)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺组织TOLL样受体4(TLR4)及转化生长因子β活化激酶(TAK1)表达的调控趋势,探讨金欣口服液抗病毒机制以及TLR4信号通路途径。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液给药进行干预,并于首次滴鼻后24 h取各组小鼠肺组织,Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4、TAK1蛋白表达。结果 RSV感染BALB/c小鼠后24h,TLR4﹑TAK1蛋白表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TLR4﹑TAK1表达明显下调(P<0.01);金欣组蛋白表达量最低,与利巴韦林组相比,P<0.01,利巴韦林组与RSV感染组相比P<0.01。结论金欣口服液能抑制TLR4信号转导通路中TLR4/TAK1蛋白的表达,TLR4的蛋白表达与TAK1的蛋白表达呈正相关,金欣口服液抗RSV作用机制中的TLR4信号通路途径可能是通过TAK1实现的。     

金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠TNF-α表达的调控作用

目的:通过研究不同时间点金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,进一步阐明金欣口服液治疗RSV肺炎的作用机制。方法:体外实验:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,金欣口服液合药血清进行干预,24h后收集细胞上清,ELISA法检测各组TNF-α含量;体内实验:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液不同剂量及给药方式进行干预,并于首次滴鼻后24、72、144h取各组小鼠支气管肺泡灌洗液,ELISA法检测TNF-α表达及金欣口服液的干预效果。结果:RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠后24h,TNF-α表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TNF-α表达明显下调(P<0.01);72h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达虽较正常组高(P<0.05),但较24h组明显下降(P<0.01),而金欣口服液等效剂量预防及治疗组TNF-α表达较RSV感染组均明显升高(P<0.01);144h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达较正常组无差异(P>0.05),而金欣口服液高剂量及等效剂量治疗组TNF-α表达均较RSV感染组明显升高(P<0.05)。结论:金欣口服液能显著下调RSV感染初期TNF-α的高表达,且随着感染时间的延长,可适当上调TNF-α的表达,表明金欣口服液对RSV感染后体内TNF-α的表达具有一定的双向调节趋势,这可能是其治疗RSV肺炎的作用机制之一。     

芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体表达的影响

目的:观察芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及IL-1β的影响。方法:试验分为空白对照组、模型组和芩百清肺浓缩丸含药血清组。常规培养RAW264.7细胞、肺炎支原体菌株,制备芩百清肺浓缩丸含药血清,用10 MOI MP感染RAW264.7细胞,分别于8、16、24 h收集细胞。FQ-PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达;Western-blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达;ELISA检测细胞上清液IL-1β含量。结果:与空白对照组比较,MP感染RAW264.7细胞后8、16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后24 h细胞上清液IL-1β含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,芩百清肺浓缩丸含药血清可显著下调MP感染RAW264.7细胞16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA的表达(P0.05或P0.01);显著降低感染后24 h NLRP3、ASC、Caspase-1p20蛋白表达和细胞上清液IL-1β的分泌(P0.05或P0.01)。结论:芩百清肺浓缩丸抗肺炎支原体作用的机制可能与下调NLRP3炎性体表达有关。     

金欣口服液对RSV感染大鼠Ⅰ型干扰素及SOCS1/3表达的影响

目的:通过研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染大鼠肺组织细胞因子信号抑制因子1/3(suppressor of cytokine signaling1/3,SOCS1/3)蛋白的干预作用,探讨其抗RSV感染的可能机制。方法:SD大鼠70只,随机分为正常组,感染模型组,金欣口服液低、中、高剂量组(3.3,9.9,29.7 g·kg~(-1)),预防组(提前2 d ig金欣口服液中剂量),利巴韦林组(24.5 g·kg~(-1)),每组10只,除正常组外,滴鼻感染24 h造模,给药组每天给药2次,连续给药3 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测RSV感染大鼠体内Ⅰ型干扰素IFN-α和IFN-β含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测RSV感染大鼠肺组织SOCS1,SOCS3 mRNA表达量的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理学变化。结果:与正常组比较,模型组RSV感染大鼠体内IFN-α和IFN-β含量明显升高,大鼠肺组织SOCS1,SOCS3 mRNA表达量明显升高(P0.05,P0.01),模型组大鼠肺组织病变较为明显;预防组和金欣口服液中剂量组IFN-α的表达量高于模型组(P0.05),预防组、金欣口服液中剂量组、利巴韦林组IFN-β的表达量高于模型组(P0.01),金欣口服液高剂量组IFN-β的表达量高于模型组(P0.05),金欣口服液中、高剂量组SOCS1表达量低于模型组(P0.05),金欣口服液高剂量组和利巴韦林组SOCS3表达量高于模型组(P0.05),金欣口服液中剂量组SOCS3表达量高于模型组(P0.01)。结论:金欣口服液可上调RSV感染大鼠体内Ⅰ型干扰素的表达,并通过抑制SOCS1/3的表达,发挥抗病毒作用,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的 观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升3倍,清肺口服液含药血清可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对PDGF-BB表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞PDGF-BB mRNA表达水平显著升高;清肺口服液可调节PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

清肺口服液含药血清对RSV感染人支气管上皮细胞STAT5和IL-10的影响

目的:探讨清肺口服液治疗RSV肺炎的作用机制。方法:建立RSV感染的16HBE细胞模型,随机分为正常细胞组、空白组、模型组、清肺口服液含药血清低剂量组和高剂量组,采用Real-time RT-PCR、Western blot和免疫荧光法分别检测细胞中STAT5和IL-10的表达水平以及RSV在细胞中的相对表达。结果:与正常细胞组和空白组相比,模型组STAT5 mRNA和IL-10蛋白水平降低(P0.05),RSV荧光强度较高(P0.01);与模型组比较,含药血清组低剂量组STAT5水平升高(P0.05),含药血清组IL-10水平升高(P0.05),含药血清组RSV荧光强度降低(P0.01)。结论:清肺口服液对STAT5和IL-10有一定的调控作用,可能是其抗RSV感染的内在机制。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA基因表达的影响

目的 探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法测定各组HELF TGF-β1表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组TGF-β1下降至1/3,清肺口服液含药血清组可显著升高TGF-β1水平至RSV感染细胞的2倍.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞TGF-β1 mRNA表达水平显著下降;清肺口服液可调节TGF-β1 mRNA表达,减缓RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

基于RSV对细胞的感染周期研究金欣口服液的干预作用

目的基于呼吸道合胞病毒(RSV)的感染周期观察金欣口服液含药血清对RSV感染细胞的干预作用。方法分别在RSV感染Hep-2细胞前后用含药血清干预,观察细胞病变效应、检测细胞存活率和病毒滴度,以及RSV的F融合蛋白表达,判断药物对RSV感染的预防及治疗作用。结果在RSV感染前或感染早期干预,金欣口服液对细胞病变抑制率均超过50%,与病毒对照组比较,细胞存活率显著增高,上清病毒滴度显著降低,后期干预只能延缓病变。金欣含药血清作用后F蛋白表达显著降低、融合病变较少。结论金欣口服液含药血清在RSV感染早期干预效果更显著,其抗病毒作用靶点可能与F融合蛋白或该蛋白在细胞上的相应受体有关。     

芳香新塔花总黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响及机制

目的观察芳香新塔花总黄酮(ZCF)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264. 7细胞炎症模型中炎症因子的影响及机制。方法采用LPS刺激RAW264. 7细胞,建立细胞炎症模型。以MTT法检测不同浓度芳香新塔花总黄酮对RAW264. 7细胞的毒性作用。芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙(阳性药物)预处理,观察各组细胞的形态,以Griess法检测NO的含量,以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达。结果1μg/m L LPS刺激RAW264. 7细胞24 h,可成功构建炎症细胞模型。芳香新塔花总黄酮在1~100μg/m L浓度范围内对RAW264. 7细胞无显著的细胞毒性。LPS刺激RAW264. 7细胞后,细胞体积明显增大,形态不规则,伸出大量的伪足,而阿托伐他汀钙和芳香新塔花总黄酮干预后,RAW264. 7细胞变小,触角减少,形态较规则。脂多糖可明显诱导RAW264. 7细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β和IL-6(P <0. 01),TLR4和NF-κB p65 mRNA表达增高,而芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙可使NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的释放受到抑制(P <0. 05,P <0. 01)。芳香新塔花总黄酮和阿托伐他汀钙预处理可使TLR4和NF-κB p65 mRNA的表达降低(P <0. 05,P <0. 01)。结论芳香新塔花总黄酮可抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症反应,下调NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达,其机制可能与其抑制TLR4/NF-κB信号转导通路的激活有关。     

参苏饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的：研究参苏饮含药血清对脂多糖(LPS)和聚肌胞(POLY I∶C)刺激的小鼠巨噬细胞株RAW 264.7表达Toll样受体3(TLR3),Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路髓样分化蛋白(MyD88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),Toll样受体相关分子(TRAM)和Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF) mRNA的影响。方法：用LPS(5 μg·mL^-1),POLY I∶C(50 μg·mL^-1)分别刺激RAW 264.7细胞株,同时给予参苏饮含药血清(11.2,6.7,4.0,2.4,1.5 g·kg-1·U^-1)进行干预,ELISA法测定细胞培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-β (IFN-β)的含量。先计算参苏饮IC₅₀,然后再以IC₅₀(11,5,2.5,4.9 g·kg^-1·U^-1)做为药物剂量进行干预,荧光定量PCR方法测定TLR3,TLR4和下游通路相关指标mRNA的表达,分析评价参苏饮含药血清清热解毒药效学作用的现代药理学基础。结果：参苏饮含药血清对POLY I∶C刺激的TLR3及其下游通路的MyD88和TRAM有抑制作用,对LPS刺激的TLR4的病理性升高无抑制作用,但对TLR4下游通路TRAM和TRIF mRNA的表达有明显的抑制作用。以上综合作用引起炎症因子TNF-α和IFN-β的降低。结论：参苏饮清热解毒的药效学作用可能与抑制TLR3,MyD88,TRAM和TRIF等细胞因子的表达有关。     

清肺口服液通过ERK1/2通路调控RSV所致呼吸道炎症损伤的机制

目的:通过研究清肺口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后气道上皮细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)磷酸化蛋白及相关炎症因子表达的影响,探讨清肺口服液抗RSV感染及其继发炎症损伤的调节机制。方法:RSV体外感染人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16-HBE)建立气道上皮炎症损伤模型,设置空白组,模型组(RSV),利巴韦林组(利巴韦林),清肺口服液高、中、低质量浓度组,共6组。其中空白组给予含2%FBS的RPIM 1640培养基进行培养,其余各组在空白组的基础上造模,模型组加入等量RSV(MOI=1),利巴韦林组加入等量利巴韦林注射液(0.2 mg·L-1),清肺口服液组给予清肺口服液高、中、低质量浓度(200,100,50 mg·L-1)进行干预。应用噻唑蓝(tetrazolium salt colorimetry,MTT)比色法检测清肺口服液对RSV感染16-HBE的毒性作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测清肺口服液对细胞中RSV复制的影响,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达变化,同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平。结果:与空白组比较,模型组RSV大量增殖,16-HBE出现典型的炎症损伤表现,ERK1/2磷酸化蛋白水平显著提高(P0.01),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6,IL-8(P0.01)。加入清肺口服液或利巴韦林后,16-HBE中的RSV复制水平显著降低(P0.01),且清肺口服液(200,100 mg·L-1)可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P0.01),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6,IL-8的表达水平(P0.01)。结论:清肺口服液能够抑制RSV病毒复制并减轻RSV感染所致的气道炎症损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低气道炎症因子的表达有关。     

清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白细胞介素-4、干扰素-γ及肺组织的影响

目的:观察清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠血清白细胞介素-4、干扰素-γ及肺组织影响。方法:42只SD大鼠被随机分成正常对照组、病毒感染模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、和地塞米松对照组6组,大鼠在戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下用呼吸道合胞病毒滴鼻吸入感染的方法建造病毒感染模型。采用荧光免疫试剂检测法,检测白细胞介素-4、干扰素-γ。观察肺组织病理学变化。结果:与正常对照组相比,病毒感染模型组大鼠白细胞介素-4升高、干扰素-γ下降,均有统计学差异(P0.05,P0.05),与病毒感染模型组比较,中药高、中、低剂量组及地塞米松组白细胞介素-4含量均明显减低(均P0.01),中药中、低剂量组干扰素-γ含量升高(P0.05,P0.01),地塞米松组干扰素-γ含量升高(P0.05)。清肺饮能减轻呼吸道合胞病毒感染大鼠肺泡壁增厚程度,减少炎症细胞浸润。结论清肺饮对呼吸道合胞病毒感染大鼠的血清白细胞介素-4有抑制作用、干扰素-γ有升高作用。清肺饮能减轻呼吸道合胞病毒感染大鼠肺组织损害程度。     

板蓝根活性部位对细胞凋亡和RAW264.7表达IL-10、TNF-α的影响

目的探讨板蓝根活性部位对Hep-2、Hela、U937、Jukart细胞的细胞凋亡和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7表达细胞因子IL-10、TNF-α的影响。方法 0.5 g/L板蓝根活性部位作用于Hep-2、Hela、U937、Jukart 24 h,经PI染色,流式细胞术研究其对细胞凋亡的影响;100TCID50的单纯疱疹病毒(HSV-1)作用于U937,0.5 g/L药物处理24 h,流式细胞术研究其对细胞凋亡的影响。ELISA检测1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L药物对LPS处理小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7后IL-10、TNF-α表达的影响。结果①0.5 g/L板蓝根活性部位作用24 h对Hep-2、Hela、Jukart、U937细胞凋亡无明显影响,但HSV-1感染U937后药物抗病毒组较病毒组的细胞凋亡率由9.72%下降至6.71%,差异有统计学意义(P<0.01);药物作用于Hela细胞时引起其G1期阻滞(从68.76%延长至74.77%),S期缩短(从31.22%降至21.62%),与正常Hela细胞组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。②LPS刺激RAW264.7后,与细胞对照组比较,LPS模型组细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.01)。LPS刺激1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L药物组细胞凋亡率分别为19.35%、28.14%、7.52%,明显低于LPS模型组(70.42%),差异有统计学意义(P<0.01)。与细胞对照组比较,1 g/L药物对照组细胞凋亡率上升(由5.81%升至15.03%),差异有统计学意义(P<0.01),而0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组无明显促进细胞凋亡的效应。与LPS刺激0.5 g/L、0.25 g/L药物组比较,0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组的细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);与细胞对照组比较,1 g/L药物对照组RAW264.7G1、S期缩短,G2期延长,差异有统计学意义(P<0.01);0.5 g/L药物对照组细胞G1期延长,S期缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。③LPS刺激RAW264.7后,与细胞对照组比较,LPS模型组IL-10、TNF-α明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);0.5 g/L、0.25 g/L药物对照组IL-10降低,1 g/L药物对照组TNF-α升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与LPS模型组比较,LPS 1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L IL-10刺激药物组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论板蓝根活性部位抑制HSV-1和LPS引起U937、RAW264.7的细胞凋亡,并24 h时下调LPS作用后RAW264.7的IL-10表达。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒肺炎大鼠模型TNF-α、分泌型IgA的影响

目的：探讨中药复方金欣口服液对呼吸道合胞病毒肺炎模型幼年大鼠血清中TNF-α、支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA的影响。方法：将56只幼年大鼠随机分为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量组及预先给药组,西药利巴韦林组,共7组。RSV滴鼻3天后灌胃给药,连续用药7天后处死。ELISA法测定各组大鼠血清中TNF-α、支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA的水平。结果：模型各组血清TNF-a及黏膜SIgA的含量表达水平均高于正常组（P〈0.01）。与模型组相比,金欣高剂量、中剂量组血清TNF-a明显增高（均P〈0.01）,差异具有统计学意义,且金欣高剂量组与利巴韦林组比较有显著性差异（P〈0.01）;金欣预先给药组、高剂量组的支气管肺泡及小肠灌洗液和中剂量组支气管肺泡灌洗液中SIgA的表达均增高,差异具有统计学意义。其中预先给药组与高剂量组的支气管肺泡及高剂量组的小肠灌洗液和中剂量组支气管肺泡灌洗液与利巴韦林组比较有显著性差异（分别为P〈0.01、P〈0.05）。结论：金欣口服液可增加RSV肺炎模型幼年大鼠TNF-α、SIgA的分泌,并且存在一定的量效关系,是治疗RSV感染的有效方剂。     

桑菊饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体表达的影响

目的: 研究桑菊饮对小鼠肺巨噬细胞株RAW264.7表达Toll样受体(TLR)的影响。 方法: 用桑菊饮含药血清作用于正常RAW264.7细胞,24 h后以荧光定量PCR方法测定TLR-1~TLR-9 mRNA的表达,探讨桑菊饮对Toll样受体表达的影响。结果:桑菊饮含药血清在一定剂量(7.7 g·kg^-1·U^-1)时,可以促进TLR-4和TLR-7的表达,而对TLR-1,TLR-2,TLR-3,TLR-5,TLR-6,TLR-8和TLR-9的表达没有明显影响。 结论: 桑菊饮的药效学作用可能与促进Toll样受体某些亚型表达有关。     

丹参-苦参对免疫抑制小鼠的免疫调节功能探讨

目的:通过使用环磷酰胺所致免疫抑制小鼠模型探讨丹参-苦参提取物对免疫缺陷小鼠的免疫调节作用的机制。方法:采用环磷酰胺造免疫抑制动物模型,空白组,模型组,丹参-苦参提取物低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg~(-1)),采用小鼠脏器指数评价脏器功能,采用小鼠碳粒廓清模型评价小鼠吞噬细胞功能,采用luminex法检测血清中相关细胞因子水平,流式检测辅助性T细胞数量。体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264. 7,给予丹参-苦参提取物后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测丹参-苦参提取物对RAW264. 7细胞增殖的影响,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对其增殖的影响及其可能机制进行探讨。结果:与空白组比较,模型组显著抑制肝指数(P 0. 01)和脾脏指数(P 0. 05),动物血清白细胞介素-6(IL-6)的分泌明显降低(P 0. 05),吞噬指数显著下降(P 0. 01),同时50 mg·L~(-1)环磷酰胺显著抑制RAW264. 7细胞的增殖(P 0. 01);与模型组比较,丹参-苦参提取物中、高剂量均可以显著提高肝脏指数(P 0. 01),并显著促进趋化因子C-X-C配体1(CXCL1)的分泌(P 0. 01),丹参-苦参提取物高剂量可以显著促进IL-6的分泌(P 0. 01),丹参-苦参提取物中、高剂量能够明显提高小鼠腋下以及颈部淋巴结中辅助性T细胞的数量(P 0. 05,P 0. 01),显著性升高吞噬指数的趋势(P 0. 01),显著性促进RAW264. 7细胞的增殖(P 0. 01),且促进IL-6信号传导与转录激活因子(STAT3)调控下游B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2样蛋白1(Bcl-2L1)以及细胞周期蛋白D1(CCND1) mRNA的表达,起抗凋亡作用。结论:丹参-苦参提取物可对抗环磷酰胺所导致的免疫抑制,增强动物免疫功能。