基于GC-MS的金欣口服液对RSV肺炎小鼠脾脏代谢物的调控作用

目的通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠脾脏组织中内源性代谢物的变化,探讨金欣口服液治疗RSV肺炎可能的作用机制。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,给予金欣口服液(27.6 g/kg)干预治疗,连续治疗7 d后处死小鼠,取脾脏组织,经甲醇提取后,先后予甲氧胺吡啶和BSTFA以肟化和衍生化,然后运用GC-MS检测脾脏中所含有的代谢物及其相对量的变化。结果 RSV肺炎小鼠的脾脏中共鉴定出35种代谢产物,其中L-脯氨酸、L-谷氨酸、缬氨酸、尿素、次黄嘌呤、葡萄糖为具有显著性差异的代谢物(P0.05),与之相关的代谢通路为D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢。结论金欣口服液可以调节RSV肺炎小鼠脾脏的免疫功能,可能与氨基酸代谢有关。     

基于GC-MS代谢组学的金欣口服液治疗RSV感染的体外研究

目的:通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析Hep-2细胞内源性代谢产物的相对含量变化,阐明金欣口服液体外抗RSV感染的作用机制。方法:RSV感染接种于6孔板上的Hep-2细胞,予金欣口服液治疗,24 h后予以液氮淬灭细胞,先后加入水-甲醇-氯仿(v:v:v,1:8.1:0.9)以便取少量细胞悬浮液行蛋白定量和萃取细胞代谢物,运用GC-MS检测细胞样品内源性代谢物及其相对含量的变化,并分析其可能参与的代谢通路。结果:RSV感染的细胞样本中共测得29种内源性代谢产物,其中谷氨酰胺、γ-氨基丁酸、甘氨酸、柠檬酸、乳酸等为差异代谢产物(P0.05),主要与谷氨酰胺、甘氨酸、丙酮酸代谢通路有关。结论:金欣口服液体外治疗RSV感染的机制可能与调节RSV感染后引起的代谢紊乱有关。     

基于RSV对细胞的感染周期研究金欣口服液的干预作用

目的基于呼吸道合胞病毒(RSV)的感染周期观察金欣口服液含药血清对RSV感染细胞的干预作用。方法分别在RSV感染Hep-2细胞前后用含药血清干预,观察细胞病变效应、检测细胞存活率和病毒滴度,以及RSV的F融合蛋白表达,判断药物对RSV感染的预防及治疗作用。结果在RSV感染前或感染早期干预,金欣口服液对细胞病变抑制率均超过50%,与病毒对照组比较,细胞存活率显著增高,上清病毒滴度显著降低,后期干预只能延缓病变。金欣含药血清作用后F蛋白表达显著降低、融合病变较少。结论金欣口服液含药血清在RSV感染早期干预效果更显著,其抗病毒作用靶点可能与F融合蛋白或该蛋白在细胞上的相应受体有关。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠IFN-α表达的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染BALB/c小鼠干扰素-α(IFN-α)表达的影响.方法:将BALB/c小鼠按RSV首次滴鼻至取标本时间分为三大组,每大组分别在RSV首次滴鼻后24,72,144 h后取支气管肺泡灌洗液(BALF),用ELISA法检测BALF中所含IFN-α浓度,观察金欣口服液对IFN-α表达的影响,利巴韦林为阳性对照.结果:RSV感染24 h后小鼠BALF中IFN-α的表达显著增高,其中金欣预防组(385.38±16.54) ng·L-1能上调IFN-α的表达(P＜0.01);RSV感染72 h后小鼠BALF中IFN-α上调作用仍较显著,但是较之于24 h时IFN-α的表达明显有所下降,其中金欣治疗组(131.41±6.96)ng·L-1和金欣预防组(32.83 ±4.77) ng·L-1组均能上调IFN-α的表达(P＜0.01),且金欣治疗组上调作用更为明显(P ＜0.01);RSV感染144 h后小鼠BALF中IFN-α的表达量显著减少(P＜0.01),金欣治疗组(14.21 0.80) ng·L-1下调IFN-α表达(P＜0.01).结论:在RSV感染早期,金欣口服液预防组和治疗组能显著上调BALB/c小鼠IFN-α的表达;随着感染时间延长,IFN-α表达下降,金欣口服液能进一步下调其表达水平,以促进机体恢复.     

金欣口服液对RSV感染人胚肺成纤维细胞细胞凋亡的研究

目的:探讨细胞凋亡在RSV肺炎发病中的作用以及金欣口服液干预RSV感染的可能机制。方法:体外建立呼吸道合胞病毒A型LONG株攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞(HELF)模型,设正常细胞组、病毒组、空白血清组、利巴韦林组和金欣口服液组。采用流式细胞术检测其对感染细胞不同时间点的总凋亡率、早期凋亡率。结果:RSV感染12、24h HELF细胞的总凋亡率、早期凋亡率均低于细胞对照组,且有显著性差异(P<0.05);空白血清组、利巴韦林组、金欣口服液组12、24h的总凋亡率、早期凋亡率均高于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05)。但增加的程度不同,12、24h HELF细胞的总凋亡率和24h早期凋亡率依次排序是空白血清组、利巴韦林组、金欣口服液组;12h早期凋亡率依次排序是利巴韦林组、空白血清组和金欣口服液组。RSV感染48、72、96h HELF细胞的总凋亡率、早期凋亡率均高于细胞对照组,且有显著性差异(P<0.05);空白血清组48、72、96h的总凋亡率均高于病毒对照组(P<0.05)、48h早期凋亡率无变化(P>0.05),72、96h早期凋亡率低于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05);利巴韦林组、金欣口服液组48、72、96h总凋亡率、早期凋亡率均低于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05)。但降低的程度不同,排序依次是金欣口服液组、利巴韦林组、空白血清组(P<0.05)。结论:金欣口服液直接或间接调控细胞凋亡,实现阻止RSV感染早期抑制细胞凋亡、感染后期促进凋亡的作用,从而阻止病毒在细胞内的进一步复制和清除,这可能是金欣口服液抗RSV病毒的作用机制之一。     

金欣口服液对感染RSV大鼠血清IL-6、IL-8的影响

目的：观察金欣口服液对感染呼吸道合胞病毒（RSV）大鼠血清中IL-6、IL-8的影响。方法：将56只SD大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量治疗组,预先给药组,利巴韦林治疗组。用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组SD大鼠血清中IL-6、IL-8的水平。结果：大鼠感染RSV后血清中IL-6、IL-8水平均高于正常组（P〈0．05）,金欣治疗组及利巴韦林组干预后IL-6、IL-8水平显著降低（P〈0．01）;与利巴韦林组相比,金欣高剂量组、预先给药组的IL-6的水平明显降低（P〈0．01）;预先给药组中,血清IL-6的水平低于中、低剂量组（P〈0．01）,而IL-8水平比高、中、低剂量组均显著降低（P〈0．01）。结论：金欣口服液能降低两者的水平,且以预先给药方式更为有效,推测可以预防和治疗感染RSV的大鼠。     

金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠TNF-α表达的调控作用

目的:通过研究不同时间点金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,进一步阐明金欣口服液治疗RSV肺炎的作用机制。方法:体外实验:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,金欣口服液合药血清进行干预,24h后收集细胞上清,ELISA法检测各组TNF-α含量;体内实验:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液不同剂量及给药方式进行干预,并于首次滴鼻后24、72、144h取各组小鼠支气管肺泡灌洗液,ELISA法检测TNF-α表达及金欣口服液的干预效果。结果:RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠后24h,TNF-α表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TNF-α表达明显下调(P<0.01);72h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达虽较正常组高(P<0.05),但较24h组明显下降(P<0.01),而金欣口服液等效剂量预防及治疗组TNF-α表达较RSV感染组均明显升高(P<0.01);144h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达较正常组无差异(P>0.05),而金欣口服液高剂量及等效剂量治疗组TNF-α表达均较RSV感染组明显升高(P<0.05)。结论:金欣口服液能显著下调RSV感染初期TNF-α的高表达,且随着感染时间的延长,可适当上调TNF-α的表达,表明金欣口服液对RSV感染后体内TNF-α的表达具有一定的双向调节趋势,这可能是其治疗RSV肺炎的作用机制之一。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠肺组织TLR4及TAK1表达的调控作用

目的通过观察金欣口服液(炙麻黄、苦杏仁、生石膏、黄芩等)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺组织TOLL样受体4(TLR4)及转化生长因子β活化激酶(TAK1)表达的调控趋势,探讨金欣口服液抗病毒机制以及TLR4信号通路途径。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液给药进行干预,并于首次滴鼻后24 h取各组小鼠肺组织,Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4、TAK1蛋白表达。结果 RSV感染BALB/c小鼠后24h,TLR4﹑TAK1蛋白表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TLR4﹑TAK1表达明显下调(P<0.01);金欣组蛋白表达量最低,与利巴韦林组相比,P<0.01,利巴韦林组与RSV感染组相比P<0.01。结论金欣口服液能抑制TLR4信号转导通路中TLR4/TAK1蛋白的表达,TLR4的蛋白表达与TAK1的蛋白表达呈正相关,金欣口服液抗RSV作用机制中的TLR4信号通路途径可能是通过TAK1实现的。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒肺炎大鼠模型TNF-α、分泌型IgA的影响

目的：探讨中药复方金欣口服液对呼吸道合胞病毒肺炎模型幼年大鼠血清中TNF-α、支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA的影响。方法：将56只幼年大鼠随机分为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量组及预先给药组,西药利巴韦林组,共7组。RSV滴鼻3天后灌胃给药,连续用药7天后处死。ELISA法测定各组大鼠血清中TNF-α、支气管肺泡及小肠灌洗液中SIgA的水平。结果：模型各组血清TNF-a及黏膜SIgA的含量表达水平均高于正常组（P〈0.01）。与模型组相比,金欣高剂量、中剂量组血清TNF-a明显增高（均P〈0.01）,差异具有统计学意义,且金欣高剂量组与利巴韦林组比较有显著性差异（P〈0.01）;金欣预先给药组、高剂量组的支气管肺泡及小肠灌洗液和中剂量组支气管肺泡灌洗液中SIgA的表达均增高,差异具有统计学意义。其中预先给药组与高剂量组的支气管肺泡及高剂量组的小肠灌洗液和中剂量组支气管肺泡灌洗液与利巴韦林组比较有显著性差异（分别为P〈0.01、P〈0.05）。结论：金欣口服液可增加RSV肺炎模型幼年大鼠TNF-α、SIgA的分泌,并且存在一定的量效关系,是治疗RSV感染的有效方剂。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1表达的调控作用

目的研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1不同时间点的表达趋势的调控作用。方法 75只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、金欣高剂量组和金欣等效剂量组,每组15只。每组分干预方式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,每种干预方式5只小鼠。RSV滴鼻感染BALB/c小鼠制备动物模型,予相应干预方式处理后处死取肺组织。Real time PCR分别检测RSV-M、SOCS1和IFN-β在mRNA水平的表达情况,并采用Western blotting检测SOCS1在蛋白水平上的表达情况。结果与正常组比较,模型组干预方式Ⅰ、ⅡSOCS1、IFN-βmRNA表达及SOCS1蛋白表达升高(P<0.01),干预方式Ⅲ时IFN-βmRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,金欣高、等效剂量组3种干预方式RSV-M mRNA表达均降低(均P<0.01),金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅲ及金欣等效剂量3种干预方式SOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅱ及金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),而金欣高剂量组和等效剂量组干预方式ⅢIFN-βmRNA的表达升高(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ及金欣等效剂量组的3种干预方式SOCS1蛋白表达明显降低,金欣高剂量组干预方式ⅢSOCS1蛋白表达升高。与金欣高剂量组比较,金欣等效剂量组干预方式Ⅰ、ⅡRSVM mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠSOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),但干预方式Ⅱ、ⅢIFN-βmRNA的表达升高(均P<0.01);金欣等效剂量组3种干预方式SOCS1蛋白表达降低。结论金欣口服液等效剂量组在不同时间点均能抑制RSV感染BALB/c小鼠肺组织中SOCS1的表达,该调控作用可能与促进Ⅰ型干扰素表达从而发挥抗RSV作用有一定关系。     

莪术静脉注射液治疗小儿呼吸道合胞病毒肺炎及其作用原理的研究

本文报告莪术静脉注射液治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的临床及实验研究。临床研究以0.04%莪术静脉注射液每日20ml/kg治疗婴幼儿RSV肺炎45例。设对照组20例口服治疗RSV肺炎确有疗效的化瘀汤。结果表明两组疗效相同,全部治愈。两组退热时间、喘憋及哮喘消失时间无统计学差异。实验研究以BaLB/c小鼠为RSV肺炎动物模型。结果表明第5、8天莪术治疗组鼠肺RSV分离率明显低于感染组及葡萄糖对照组(P<0.001)及P<0.0001)。并进行了鼠肺光、电镜病理检查。研究结果表明莪术静脉注射液治疗婴幼儿RSV肺炎有较好疗效且无副作用。其机理可能为(1)抑病毒作用;(2)改善肺部微循环;(3)减轻支气管的高过敏反应     

金欣口服液对RSV感染大鼠I型干扰素及SOCS1/3表达的影响

目的：通过研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染大鼠肺组织细胞因子信号抑制因子1/3（suppressor of cytokine signaling1/3,SOCS1/3）蛋白的干预作用,探讨其抗RSV感染的可能机制。方法：SD大鼠70只,随机分为正常组,感染模型组,金欣口服液低、中、高剂量组（3.3,9.9,29.7g·kg^-1）,预防组（提前2dig金欣口服液中剂量）,利巴韦林组（24.5g·kg^-1）,每组10只,除正常组外,滴鼻感染24h造模,给药组每天给药2次,连续给药3d。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测RSV感染大鼠体内I型干扰素IFN-α和IFN-β含量,逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测RSV感染大鼠肺组织SOCS1,SOCS3mRNA表达量的变化,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肺组织病理学变化。结果：与正常组比较,模型组RSV感染大鼠体内IFN-α和IFN-β含量明显升高,大鼠肺组织SOCS1,SOCS3mRNA表达量明显升高（P<0.05,P<0.01）,模型组大鼠肺组织病变较为明显;预防组和金欣口服液中剂量组IFN-α的表达量高于模型组（P<0.05）,预防组、金欣口服液中剂量组、利巴韦林组IFN-β的表达量高于模型组（P<0.01）,金欣口服液高剂量组IFN-β的表达量高于模型组（P<0.05）,金欣口服液中、高剂量组SOCS1表达量低于模型组（P<0.05）,金欣口服液高剂量组和利巴韦林组SOCS3表达量高于模型组（P<0.05）,金欣口服液中剂量组SOCS3表达量高于模型组（P<0.01）。结论：金欣口服液可上调RSV感染大鼠体内I型干扰素的表达,并通过抑制SOCS1/3的表达,发挥抗病毒作用,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

截哮口服液对呼吸道合胞病毒的抑制作用研究

目的:观察截哮口服液对呼吸道合胞病毒复制的抑制作用。方法:将呼吸道合胞病毒接种于Hela细胞单层增殖,测定截哮口服液对细胞最低无毒浓度。取不同浓度的药液加入病毒,观察在细胞单层上的空斑形成以判定病毒产量。结果:截哮口服液使呼吸道合胞病毒产量减少,药物浓度的高低与病毒产量的高低呈明显的负相关(rs=-1,P<0.05);其对RSV有直接灭活作用,且能影响病毒的吸附与吸附后的复制过程。结论:截哮口服液在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的复制有抑制作用。     

截哮口服液对呼吸道合胞病毒的抑制作用研究

目的：观察截哮口服液对呼吸道合胞病毒复制的抑制作用.方法：将呼吸道合胞病毒接种于Hela细胞单层增殖,测定截哮口服液对细胞最低无毒浓度.取不同浓度的药液加入病毒,观察在细胞单层上的空斑形成以判定病毒产量.结果：截哮口服液使呼吸道合胞病毒产量减少,药物浓度的高低与病毒产量的高低呈明显的负相关（rs=-1,P＜0.05）;其对RSV有直接灭活作用,且能影响病毒的吸附与吸附后的复制过程.结论：截哮口服液在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的复制有抑制作用.     

清肺口服液对RSV感染哮喘急性发作小鼠肺组织炎症及气道反应性的影响

目的:探讨清肺口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘急性发作小鼠模型肺组织炎症及气道反应性的影响。方法:60只雄性6~8周龄Balb/C小鼠,每组10只,随机分为正常组,模型组,清肺口服液高、中、低剂量组(2.34,1.17,0.59 g·kg^-1·d^-1),利巴韦林组(0.1 g·kg^-1·d^-1),共6组,卵细胞(OVA)致敏及雾化激发哮喘模型,经RSV隔日滴鼻连续3次感染,获得RSV感染哮喘模型;治疗组予清肺口服液分高、中、低剂量ig;正常予等量生理盐水ig:阳性药组给予利巴韦林注射液ip。末次激发24 h后,用Buxco RC系统检测小鼠气道反应性;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸细胞分析;肺组织经HE染色,PAS染色,VG染色评估炎症反应。结果:与正常组比较,模型组小鼠BALF中嗜酸粒细胞比例(EOS%)明显升高,气道反应性较正常组明显增高(P<0.01),模型组小鼠肺组织呈现哮喘合并感染典型改变,组织充血水肿,分泌物显著增多;气道周围炎性细胞浸润、胶原增生显著;与模型组比较,清肺口服液中剂量组BALF中EOS%明显降低,清肺口服液及利巴韦林干预均可显著改善气道高反应性(P<0.05),其中中剂量清肺口服液效果尤为显著,气道功能与正常组相比差异无显著性,清肺口服液中剂量可以明显减轻小鼠肺组织充血水肿及炎性细胞浸润,气道分泌物及气道周围胶原增生较模型组明显改善。结论:中剂量清肺口服液可以明显减轻RSV感染哮喘急性发作小鼠肺组织炎症及气道高反应性。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。     

小儿呼吸道合胞病毒性肺炎的中医证候学特点

目的 研究小儿呼吸道合胞病毒性肺炎的中医证候学特点.方法 对114例风热闭肺证、痰热闭肺证患儿进行证候学资料调查及统计分析. 结果 风热闭肺证和痰热闭肺证患儿在发热、痰壅、紫绀、舌象、脉率、精神方面差异有统计学差异(P＜0.05).痰热闭肺证重于风热闭肺证;在恶风恶寒方面差异有统计学意义(P＜0.05),风热闭肺证重于痰热闭肺证;其他指标比较无统计学意义(P＞0.05). 结论 发热、痰壅、恶寒、紫绀、舌象、脉率、精神的程度可作为小儿呼吸道合肥病毒性肺炎风热闭肺证、痰热闭肺证的主要鉴别指标.