电针经p38 MAPK信号通路对坐骨神经损伤大鼠脊髓中AQP1和AQP4表达的影响＊

目的 探讨电针（electroacupuncture，EA）治疗对坐骨神经损伤大鼠脊髓中水通道蛋白AQP1和AQP4表达的影响，并揭示其可能作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分成假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、电针组（EA组）、抑制剂组（SB203580组）和电针 + 抑制剂组（EA + SB203580组），每组12只。采用钳夹法复制坐骨神经损伤大鼠模型，并给予电针和p38抑制剂SB203580干预14天。分别于干预前及干预后第7天和14天检测坐骨神经功能指数（SFI）；HE染色观察损伤处远端坐骨神经组织病理学变化；BL-410电生理系统检测大鼠神经传导速度（NCV）；qRT-PCR检测脊髓AQP1和AQP4 mRNA表达水平；Western blot检测脊髓AQP1、AQP4、p-p38MAPK和p38MAPK蛋白表达水平。结果 与Sham组比较，Model组大鼠坐骨神经组织结构不完整，出现明显炎症浸润和病理损伤，EA组和SB203580组大鼠坐骨神经组织相较于Model组坐骨神经组织炎症浸润和病理损伤得到明显缓解，EA + SB203580组与SB203580组的差异不大。与Sham比较，Model组大鼠脊髓中AQP1和AQP4 mRNA和蛋白表达水平以及p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著增加，而SFI值和NCV显著降低（P < 0.01）；与Model组比较，EA组和SB203580组大鼠脊髓中AQP1 和AQP4 mRNA和蛋白表达水平、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著降低，而SFI值和NCV显著升高（P < 0.01）；与SB203580组比较，EA + SB203580组检测指标无显著性变化（P > 0.05）。结论 电针刺激可抑制脊髓中AQP1和AQP4表达，改善大鼠坐骨神经损伤，其可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关。     

基于TGF-β/Smad7信号通路探讨针灸对大鼠溃疡性结肠炎的影响※

目的 研究针灸对大鼠溃疡性结肠炎（UC）的疗效及作用机制。方法 将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组、电针组、隔药灸组。空白组予生理盐水灌肠，其余三组均予TNBS-50%乙醇液灌肠，建立UC模型。造模成功后，电针组及隔药灸组均选取天枢穴（双侧）、气海穴，分别进行电针及隔药灸治疗，每日1次，空白组、模型组不干预。干预14 d后，进行大鼠疾病活动性指数（DAI）评分及结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分，并检测血清转化生长因子-β（TGF-β）、信号转导分子7（Smad7）、白介素-10（IL-10）及结肠组织TGF-β mRNA、Smad7 mRNA、IL-10 mRNA表达量。结果 空白组大鼠DAI、CMDI评分显著低于其他三组（P<0.05），电针组、隔药灸组大鼠DAI、CMDI评分均明显低于模型组（P<0.05）；空白组大鼠结肠组织TGF-β mRNA、Smad7 mRNA、IL-10 mRNA及血清TGF-β、Smad7、IL-10表达量明显低于其他三组（P<0.05），电针组、隔药灸组低于模型组（P<0.05）。结论 电针、隔药灸能通过调节TGF-β-Smad7-IL-10信号通路而达到治疗UC的目的。     

择时针刺对炎性疼痛模型P2X7-/-小鼠穴区成纤维细胞p38MAPK表达的影响＊

目的 明确P2X7受体是否通过p38MAPK信号通路介导择时针刺对成纤维细胞骨架的重构。方法 选择P2X7-/-小鼠18只，根据辐射热甩尾法所测痛阈值完全随机分作空白组6只、造模组12只，12只造模动物再通过右足注射完全弗氏佐剂建立炎性疼痛模型。模型成功建立后，根据各动物所测痛阈值随机分为模型组6只、模型+针刺组6只。模针组动物捆绑固定后，在特定时间点ZT8（15：00）针刺足三里穴，每5 min捻转行针1次，每次行针1 min，频率为120 次/min。每天治疗1次，每次留针30 min，连续治疗7天。空白组和模型组在同一时间点进行相同方法的捆绑固定30 min，不针刺。采用Western Blot和RT-PCR检测小鼠穴区p38MAPK蛋白表达量和p38MAPK基因表达。结果 模型组小鼠皮肤组织中p38MAPK蛋白表达与空白组相比显著升高，有统计学意义（P < 0.01）；模针组小鼠皮肤组织中p38MAPK蛋白表达与模型组相比存在降低，有统计学意义（P < 0.05）。模型组小鼠穴位皮肤及皮下组织中p38MAPK基因表达，与空白组相比升高，有统计学意义（P < 0.05）；模针组小鼠穴位皮肤及皮下组织中p38MAPK基因表达与模型组相比降低，有统计学意义（P < 0.05）。结论 P2X7受体可能并非通过对p38MAPK的调整实现择时针刺对穴区成纤维细胞骨架重构的作用。     

枸杞丹参对RCS大鼠视网膜组织中Bcl-2、Bid表达的影响＊

目的 观察枸杞加丹参对视网膜色素变性大鼠视网膜Bcl-2、Bid表达的影响。方法 实验对象分五组。空白组：RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠，8只，雌雄均4只，（n = 8），灌胃生理盐水；将RCS（rdy-/-,p-/-）雌性及雄性大鼠均随机分为4组，分别为：模型组、枸杞组、丹参组和枸杞加丹参组（杞参组），每组雌雄均4只，每组8只，分别给予灌胃生理盐水、生理盐水、枸杞、丹参、枸杞加丹参。灌胃28天后，免疫组化、Real-time PCR、WB检测各组RCS大鼠视网膜Bcl-2、Bid的相对表达量。结果 ①免疫组化检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组大鼠视网膜上Bcl-2蛋白阳性表达较RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组明显增多；RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组大鼠视网膜上Bid蛋白阳性表达较RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组明显减少，但较RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白组多。②RT-qPCR检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bid mRNA相对表达量明显低于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。③WB检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bcl-2蛋白相对表达量明显高于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bid蛋白相对表达量明显低于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。结论 视网膜色素变性经典动物模型RCS(rdy-/-,p-/-）大鼠视网膜组织中Bcl-2表达下降、Bid表达上升；枸杞加丹参灌胃促进RCS(rdy-/-,p-/-）大鼠视网膜抗凋亡因子Bcl-2表达上调，同时，下调促凋亡因子Bid表达，在抗线粒体凋亡途径上减轻视网膜色素变性大鼠的视网膜细胞凋亡，从而保护视功能。     

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

目的 研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB（p38 MAPK/NF-κB）信号通路抑制广泛性焦虑（GAD）大鼠下丘脑区炎症反应，改善GAD大鼠的焦虑样行为，缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法 74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组，剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠，造模14 d后进行旷场实验（OFT）和高架十字迷宫实验（PMT）检测各组大鼠焦虑样行为，筛选造模成功的大鼠60只，随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组（6、12、24 g·kg^-1）和地西泮组（1 mg·kg^-1），每组12只，连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮，给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素IL-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α（IκBα）、钙结合蛋白（Iba-1）mRNA的水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化（p）-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平；免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果 与空白组比较，模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏，OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加（P<0.01），PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少（P<0.01），下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高（P<0.01），血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多（P<0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01），IκBα蛋白及mRNA表达显著减低（P<0.01）。与模型组比较，柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常，OFT边缘运动距离和时间明显减少（P<0.05，P<0.01），PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加（P<0.05，P<0.01），下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低（P<0.05，P<0.01），血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低（P<0.05，P<0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05，P<0.01），IκBα蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路，降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平，发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。     

基于“肺肠同治”的清肺化痰逐瘀汤治疗COPD的作用机制

目的 观察清肺化痰逐瘀汤对慢性阻塞性肺病（COPD）大鼠肺肠功能的影响并进一步探讨其体现肺肠同治的深层次机制。方法 将60只Wistar大鼠随机分为6组，每组10只，组别为正常组、模型组、急支糖浆组（10 g·kg^-1·d^-1）、清肺化痰逐瘀汤低、中、高剂量组（10、15、20 g·kg^-1·d^-1）。以脂多糖气管滴注合并烟雾吸入法建立COPD大鼠模型，急支糖浆组与清肺化痰逐瘀汤组分别以相应剂量浓度药液灌胃给药，其余组采用生理盐水灌胃对照，末次给药后监测大鼠肺功能和血气指标。镜下观察大鼠肺、肠组织病理学变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定大鼠血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与结肠组织分泌型免疫球蛋白A（IgA）表达；测定大鼠血清二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸、丙二醛（MDA）等生化指标变化；免疫组化检测大鼠结肠组织紧密连接蛋白（Occludin）表达，采用免疫荧光测定大鼠肺组织F4/80阳性肺泡巨噬细胞、α-肌动蛋白（α-SMA）、结肠闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肺组织磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、NF-κB p65和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、p38 MAPK蛋白表达，以及结肠组织Occludin和ZO-1表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肺功能障碍，用力肺活量（FVC）、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血氧饱和度（SaO₂）、肺动态顺应性（Cdyn）降低（P<0.01），肺、肠病理学改变明显，血清IL-6、TNF-α、DAO、D-乳酸、MDA表达增高（P<0.05，P<0.01），肺组织p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值升高，肺组织F4/80阳性巨噬细胞表达增强，结肠组织IgA、Occludin、ZO-1表达减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，急支糖浆和清肺化痰逐瘀汤各剂量组大鼠肺功能明显改善，FVC、PaO₂、SaO₂、Cdyn升高（P<0.05，P<0.01），肺、肠组织病理学改善明显，血清IL-6、TNF-α、DAO、D-乳酸、MDA表达降低（P<0.05，P<0.01），肺组织F4/80阳性巨噬细胞表达减少，肺组织p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达比值降低（P<0.01），结肠组织IgA、Occludin、ZO-1表达增高（P<0.01）。结论 清肺化痰逐瘀汤可以有效减轻COPD大鼠症状，其作用机制与抑制肺组织炎症反应，改善肠黏膜屏障功能有关。     

龟甲胶对肾阴虚大鼠抗氧化活性和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响＊

目的 探讨龟甲胶对肾阴虚大鼠抗氧化活性及Bax（Bcl-2同源二聚体X，Bcl2-Associated X）、Bcl-2（B淋巴细胞瘤-2，B-cell lymphoma-2）蛋白表达的作用机制。方法 60只SPF级雌性SD大鼠适应性喂养3天后，随机分为正常组，模型组、给药组（龟甲胶低剂量组、龟甲胶中剂量组、龟甲胶高剂量组）和阳性（六味地黄丸）组，给药21天。除正常组外，其余大鼠通过灌胃甲状腺素建立肾阴虚大鼠病理模型；于造模同时正常组及模型组每天灌胃等体积生理盐水。给药期间，观测大鼠脏器（肝脏、肾脏）指数、体质量、肛温、饮水量和进食量的变化；运用酶联免疫（ELISA）法检测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、雌二醇（E2）、睾酮（T）水平；免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白表达变化；RT-qPCR（荧光定量聚合酶链式反应，Real-time quantitative PCR）法检测Bax、Bcl-2蛋白mRNA相对表达量，并进行组间比较。结果 龟甲胶各给药组均能明显缓解大鼠的阴虚状态，龟甲胶中、高剂量组能显著增加肾阴虚大鼠体质量及肝脏指数（P < 0.05，P < 0.01），龟甲胶高剂量组能升高大鼠肾脏指数（P < 0.01）；龟甲胶各剂量组均能降低肾阴虚大鼠肛温（P < 0.05，P < 0.01）。龟甲胶中、高剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px、E2水平升高（P < 0.05，P < 0.01），MDA含量降低（P < 0.05）；龟甲胶高剂量组大鼠血清中T含量显著升高（P < 0.05，P < 0.01）。龟甲胶低、高剂量组大鼠肾组织中Bax表达水平降低（P < 0.05）；龟甲胶高剂量组大鼠肾组织中Bcl-2表达水平显著升高（P < 0.01）。结论 龟甲胶具有传统滋阴功效，能增强阴虚状态下机体抗氧化能力，提高SOD活力、降低MDA含量；同时下调Bax以及上调Bcl-2等衰老相关因子的蛋白表达，从而延缓机体的衰老。     

辣椒素通过p38 MAPK/COX-2信号通路对局灶性脑缺血大鼠认知功能的影响

目的 探讨辣椒素对脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍的影响及可能的作用机制。方法 SD雄性大鼠随机选取12只作为假手术组，其余大鼠采用线栓法复制大脑中动脉阻塞（MCAO）模型。将建模成功的大鼠分为模型组、SB203580［p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂，1 mg·kg^-1］组、辣椒素低、高剂量（50、100 mg·kg^-1）组、anisomycin（p38 MAPK激动剂，2 mg·kg^-1）+辣椒素（100 mg·kg^-1）组，每组12只。再灌注及给药结束后对大鼠进行神经功能缺陷评分；Morris水迷宫和新型物体识别实验检测大鼠学习和认知能力；苏木素-伊红（HE）染色观察脑组织海马区病理学变化；免疫荧光法检测海马组织小胶质细胞的活化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脑组织白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、前列腺素E₂（PGE₂）炎性因子的水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）、p38 MAPK、磷酸化（p）-p38 MAPK、环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠神经功能缺损评分、逃避潜伏期、海马CA1区钙结合蛋白-1（Iba-1）阳性表达的小胶质细胞数量、脑组织IL-1β、TNF-α、PGE₂水平、海马组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、COX-2的表达显著升高（P<0.01）；穿越平台位置次数、新颖物体辨别指数（DI）、海马组织TRPV1的表达显著减少（P<0.01），且海马神经细胞数量减少，大量炎性细胞浸润；与模型组比较，辣椒素低、高剂量组神经功能缺损评分、逃避潜伏期、海马CA1区Iba-1阳性表达的小胶质细胞数量、脑组织IL-1β、TNF-α、PGE₂水平、海马组织p-p38 MAPK/p38 MAPK、COX-2的表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；穿越平台位置次数、DI、TRPV1的表达明显升高（P<0.05，P<0.01），少量炎性细胞浸润，神经细胞数量明显增多；且使用p38 MAPK的激活剂anisomycin可增加COX-2的表达，明显减弱辣椒素对小胶质细胞活化的抑制作用。结论 辣椒素对脑缺血再灌注大鼠的认知功能具有保护作用，其作用机制可能与抑制p38 MAPK/COX-2信号通路的激活，进而抑制小胶质细胞的过度活化有关。     

治伤巴布剂对大鼠急性软组织损伤模型P38MAPK、AKT信号通路的影响＊

目的 观察治伤巴布剂对急性软组织损伤（acute soft tissue injury， ASTI）模型p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、丝/苏氨酸蛋白激酶（AKT）信号通路的影响，探讨治伤巴布剂干预ASTI的可能作用机制。方法 将40只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、治伤巴布剂组、p38MAPK信号通路抑制剂组、AKT信号通路抑制剂组，每组8只。除正常对照组外，其余四组均予以左侧后肢小腿ASTI造模。造模成功后，治伤巴布剂组于标记部位立即予治伤巴布剂（修剪成1.5x3cm大小）外敷，并用胶布固定；其余四组均予等剂量赋形剂（修剪成1.5×3 cm大小）外敷处理，胶布固定；持续外敷，共持续24 h。p38MAPK信号通路抑制剂组在造模前30 min予腹腔注射p38MAPK信号通路抑制剂SB203580（400 μg/kg/天）1次；AKT信号通路抑制剂组在造模前30 min予腹腔注射AKT信号通路抑制剂perifosine（20 mg/kg/天）1次。分别于0（造模前）、2h、4h、8h、12h、24h测量受伤小腿肌肉处的周长，并计算肌肉肿胀率（muscle swelling rate，MSR）。24 h药物干预结束后，采用颈椎脱臼法处死大鼠。后将左侧后肢小腿损伤中心部位进行取材，分成三份。一部分用于观察组织病理学形态变化；一部分用于逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测核因子-κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）p65 mRNA、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA、白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达水平；剩下部分用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测骨骼肌组织TNF-α、IL-1β含量水平及蛋白质免疫印迹（Western-blot）法测定p38MAPK、AKT、NF-κB p65、核因子抑制蛋白α（inhibitor kappa B alpha， IκBα）表达水平。结果 与正常对照组相比，模型对照组MSR显著增加（P<0.01）；病理形态学上，骨骼肌组织可见大面积肌细胞排列紊乱，肌细胞变性坏死，间质内可见红细胞聚集及大量炎症细胞浸润；骨骼肌组织TNF-α、IL-1β含量水平显著升高（P<0.01）；磷酸化p38MAPK（p-p38）/总p38MAPK（t-p38），磷酸化-AKT（p-AKT）/总-AKT（t-AKT）明显升高（P<0.01），NF-κB p65及NF-κB p65mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与模型对照组相比，治伤巴布剂组MSR在治疗第8 h、12 h、24 h显著下降（P<0.01），且在治疗第24 h，其MSR较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组下降更明显（P<0.05）；病理学评分显著下降（P<0.01），且较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组下降更显著（P<0.05）；骨骼肌组织TNF-α、IL-1β含量水平明显下降（P<0.01），且较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组更显著（P<0.05）；p-p38/t-p38及p-AKT/t-AKT明显下降（P<0.01），NF-κB p65及NF-κB p65 mRNA表达水平显著下降（P<0.01），且较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组在降低NF-κB p65及NF-κB p65 mRNA相对表达值方面更显著（P<0.01）。结论 治伤巴布剂可能同时对p38MAPK、AKT信号通路产生了一定的抑制作用，引起NF-κB活性下调，NF-κB p65蛋白的表达下调，进而引起骨骼肌组织TNF-α、IL-1β炎性细胞因子含量水平下调，减轻ASTI炎症反应，从而改善ASTI。     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及TNF-α、IL-1β调节作用的研究

目的：通过观察隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及炎症因子TNF-α、IL-1β表达的影响,探讨艾灸治疗克罗恩病的效应机制。方法：清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、隔药灸组和西药组,采用三硝基苯磺酸（TN-BS）合乙醇溶液灌肠制备克罗恩病大鼠模型,模型制备成功后,隔药灸组取天枢穴（双）、气海穴进行隔药灸治疗,西药组采用美沙拉秦灌胃治疗。治疗结束后,采用HE染色,光镜下观察各组大鼠结肠组织病理学变化,应用免疫组织化学技术观察各组大鼠结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达,并进行图像分析。结果：与正常组比较,模型组大鼠结肠组织呈现裂隙状溃疡及炎症表现,部分大鼠结肠在黏膜下层可见肉芽肿形成,结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达均显著增高（均P〈0.01）;与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠形态结构改善,肠道炎症减轻,结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达均显著降低（均P〈0.01）;相关性分析结果显示,TNF-α、IL-1β的表达与NF-κB p65的表达均呈正相关性。结论：隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达;艾灸（隔药灸）可能通过抑制克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65的表达,进而减少其下游炎症因子TNF-α、IL-1β的表达,从而减轻肠道炎症,改善结肠组织形态结构,发挥治疗作用。     

Effect of moxibustion on CRF and CRFR1 expressions in hypothalamus of TNBS-induced experimental colitis rats

Objective

To observe the effect of moxibustion on the protein and mRNA expressions of corticotropin-releasing factor (CRF) and corticotropin-releasing factor receptor 1 (CRFR1) in hypothalamus of trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS)-induced experimental colitis rats, and to explore the central mechanisms of moxibustion in improving visceral pain and the pain-related emotions in experimental colitis rats.

Methods

Thirty-six Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into a normal group (NG), a model group (MG), a herb-partitioned moxibustion group (HPMG) and a sham herb-partitioned moxibustion group (SHPMG). Except the NG, rats in the remaining three groups all received TNBS enema to establish experimental colitis models. The HPMG received herb-partitioned moxibustion (HPM) at bilateral Tianshu (ST 25) and Qihai (CV 6) for intervention; for the SHPMG, the herbal cakes and moxa cones were only placed on the acupoints but not ignited; rats in the MG and NG were only fixed in the same way as those in the HPMG but did not receive any treatment. At the end of the intervention, the abdominal withdrawal reflex (AWR) score, the open field test (OFT) score and the elevated plus maze (EPM) score were observed to measure the changes in visceral pain and pain-related emotions of the rats. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to examine the expressions of CRF and CRFR1 proteins in hypothalamus; the fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the expressions of CRF and CRFR1 mRNAs in hypothalamus.

Results

Compared with the NG, the AWR score increased significantly and the OFT and EPM scores dropped significantly in the MG (all P<0.05), and the expressions of hypothalamic CRF and CRFR1 proteins and mRNAs increased significantly (all P<0.01). Compared with the MG and SHPMG, the AWR score dropped significantly and the OFT and EPM scores increased significantly in the HPMG (all P<0.01), and the expressions of hypothalamic CRF and CRFR1 proteins and mRNAs decreased significantly (all P<0.05). There were no significant differences between the MG and the SHPMG (all P>0.05).

Conclusion

HPM can down-regulate the abnormally increased expressions of CRF and CRFR1 proteins and mRNAs in hypothalamus of the TNBS-induced experimental colitis rats, which is plausibly one of its action mechanisms in mitigating visceral pain and the pain-related emotions in the experimental colitis rats.

     

Regulatory effect of moxibustion for rats with ulcerative colitis on the macrophage functional phenotype protein of lung tissue

Objective

To observe the regulatory effect of moxibustion on the expression of CD86 and CD163, which are the important functional phenotypes of macrophage differentiation in lung tissue of ulcerative colitis (UC) rats. The mechanism of the regulatory effect of moxibustion for macrophage differentiation based on the key cytokine interferon-gamma (IFN-γ), tumor necrosis death factor-alpha (TNF-α), interleukin- 4 (IL-4) and interleukin-13 (IL-13) was also explored.

Methods

Forty SD rats were randomly divided into a normal group (NG), a model group (MG), a normal moxibustion group (NMG) and a smokeless moxibustion group (SMG). The model of UC was made by antigen immunization combined with enema with topical formalin. The rats in the normal moxibustion group accepted moxibustion at bilateral Tianshu (ST 25), while the rats in the smokeless moxibustion group with smokeless moxibustion at bilateral Tianshu (ST 25), each 10 min, once a day for 8 d. After treatments, the hematoxylin-eosin (HE) staining was used to observe the pathological changes of colonic tissue, the Western blotting (WB) was used to observe the expression of CD86 and CD163, two important functional phenotypes of macrophage differentiation in lung tissue of UC rats, while the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to assess the content of IFN-γ, TNF-α, IL-4 and IL-13, the key cytokines of macrophage differentiation in micro environment of the lung tissue.

Results

Compared with the NG, the colons of rats in MG were injured more seriously, and the scores of gross observation and histological examination were significantly higher (P<0.05). Compared with the MG, the pathological changes of the two groups of rats with moxibustion treatment were improved, which presented with ulcer repair, inflammation dissipation, and the general score and histological score of the two groups were decreased (P<0.05). Compared with the NG, the expression of CD86 in the lung tissue of rats in the MG was increased (P<0.05), and CD163 expression was decreased (P<0.05). Compared with the MG and the SMG, the expression of CD86 in the lung tissue of the rats in the NMG was significantly lower than those in the MG and SMG, and CD163 was higher (P<0.05), while the differences were not statistically significant between the MG and the SMG (P>0.05). Compared with the NG, the expression of key cytokines in lung tissue of MG was abnormal, the contents of IFN-γ and TNF-α increased (P<0.05), while the IL-4 and IL-13 decreased (P<0.05). The IL-4 and IL-13 were significantly increased in lung tissue of rats in the NMG (P<0.05), and the IFN-γ and TNF-α were reduced (P<0.05), compared with those in the MG and the SMG, while the differences were not statistically significant between the MG and the SMG (P>0.05).

Conclusion

Moxibustion can increase the expression of CD163, the important functional phenotype of macrophages in lung tissue of UC rats, and the differentiation critical cytokines IL-4 and IL-13. It can also reduce activated phenotype CD86 and its differentiation critical cytokines IFN-γ and TNF-α in the lung tissue of UC rats.

     

柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及ERK/p38 MAPK信号通路的影响

目的:观察柴朴汤对哮喘模型大鼠气道炎症及细胞外信号调节激酶(ERK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、柴朴汤低、中、高(0.75,1.5,3.0 g·kg-1)组,地塞米松组。采用卵蛋白(OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型。柴朴汤低、中、高剂量组于激发前0.5 h给予相应剂量柴朴汤灌胃;地塞米松组于激发前0.5 h给予地塞米松(0.005 g·kg-1)灌胃;模型组于激发前0.5 h给予等体积生理盐水灌胃;空白组以生理盐水代替OVA进行腹腔注射及雾化吸入;隔日1次,共激发28 d。观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类细胞计数的变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织磷酸化ERK(p-ERK),磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的活性;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)分析检测ERK,p38 MAPK mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ERK,p-ERK,p38MAPK,p-p38 MAPK蛋白的表达;光镜下观察病理组织形态学变化及进行炎症评分。结果:模型组大鼠BALF中细胞总数和分类细胞计数;肺组织p-ERK,p-p38 MAPK的活性,ERK,p38 MAPK mRNA的表达,p-ERK,p-p38 MAPK的表达,炎症评分均明显高于空白组(P0.01);柴朴汤低、中、高剂量组和地塞米松组上述指标则明显低于模型组(P0.05,P0.01)。结论:柴朴汤可改善哮喘模型大鼠气道炎症,其机制可能与其抑制ERK/p38 MAPK信号通路有关。     

“拔伸松动手法”对膝骨性关节炎兔白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的影响

目的研究拔伸松动手法对膝骨性关节炎兔膝关节液中白细胞介素1β（interleukin 1beta,IL-1β）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）的影响。方法采用随机数字表法分为4组,即为拔伸松动手法组、注射透明质酸钠组、模型组,正常组。拔伸松动手法组手法治疗,每天一次,治疗十天后休息一天,共治疗6周;注射透明质酸钠组注射治疗,每周一次,共治疗6周;模型组正常喂养、正常组给正常喂养。结果治疗后各组关节液中IL-1β浓度平均数值为模型组〉正常组〉注射透明质酸钠组〉拔伸松动手法组;TNF-α浓度平均数值为模型组〉拔伸松动手法组〉注射透明质酸钠组〉正常组。用方差分析及LSD-t进行两两比较分析显示,拔伸松动手法组、正常组、注射透明质酸钠组两个指标与模型组比较均为P〈0.05,差异有统计学意义;拔伸松动手法组、注射透明质酸钠组、正常组之间两两比较比较,两个指标均为P〉0.05,差异无统计学意义。结论拔伸松动手法和注射透明质酸钠,均能降低膝骨性关节炎兔关节液中IL-1β、TNF-α的浓度,但两种方法之间不能认为有差异。拔伸松动手法可能通过降低膝骨性关节炎兔关节液中的IL-1β、TNF-α浓度,从而抑制膝骨性关节炎软骨基质降解和关节软骨破坏,对软骨损伤的修复有利。     

姜黄素抗脑缺血再灌注损伤作用与MAPK信号通路的相关性分析

目的探讨姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤中细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）、C-Jun氨基末端（JNK）/应激化蛋白激酶（SAPK）及p38MAPK信号转导通路的影响。方法采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉（MCAO）建立局灶性脑缺血模型,观察不同浓度姜黄素（20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg）对脑缺血再灌注损伤后大鼠神经行为学评分的影响,并用Western blot法检测p38MAPK、p-p38MAPK、ERK1/2、p-ERK1/2及JNK的表达。结果假手术组无神经行为学改变;各用药组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组（P〈0.05）。与缺血再灌注组相比各用药组p-p38MAPK及JNK表达明显降低（P〈0.05）,而p-ERK1/2表达显著增加（P〈0.05）,p38MAPK及ERK1/2表达各组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护作用机制可能与抑制p38MAPK和JNK/SAPK信号转导通路以及增强ERK1/2信号转导通路有关。     

补肾调肝方对少精症大鼠生精作用及睾酮影响的研究

目的：探讨补肾调肝方治疗少精症的作用机理。方法：大鼠少精症用棉子油造模，将大鼠随机分成给药造模组、给药正常组、单纯造模组、正常组，每组20只。给药造模组、给药正常组连续给补肾调肝方21天后，处死大鼠，测定大鼠附睾精子数及血清睾酮（T）含量。结果：给药造模组、给药正常组、正常组与单纯造模组，在精子数、血清睾酮等方面比较，差异有显著性意义（P＜0．05），说明补肾调肝方能有效提高少精症的精子数，而对正常大鼠的精子数无明显的影响，同时能够稳定大鼠少精症睾酮 的含量，达到正常大鼠的睾酮水平。结论：补肾调肝方可能有直接生精的作用，有效防止机体病理性激素水平 的升高，维持机体性激素水平的平衡。     

温阳补心汤对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及MAPK/PPAR-γ信号通路的影响

目的观察温阳补心汤基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)信号通路对慢性心衰(CHF)大鼠心肌线粒体能量代谢的影响。方法在48只大鼠中随机抽取12只作为假手术组,其余运用腹主动脉缩窄法建立CHF模型,取造模成功36只大鼠,随机分为模型组、温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组。温阳补心汤组和琥珀酸美托洛尔组给予相应药物,假手术组、模型组给予等量的去离子水10 mL/(kg·d),各组均每日灌胃1次。给药后8周,观察CHF大鼠各项指标变化情况。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠外周血中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)的含量;采用彩色多普勒超声检测大鼠心室功能;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测大鼠心肌组织中p38MAPK、p-p38MAPK、PPAR-γ的蛋白表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠ATP含量显著下降,ADP、NT-proBNP含量显著升高(P <0.01);与模型组比较,温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组大鼠ATP表达升高,ADP、NT-proBNP表达下降(P <0.05)。与假手术组比较,模型组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平明显升高(P <0.05),PPAR-γ蛋白表达水平明显下降(P <0.05);与模型组比较,温阳补心汤组、琥珀酸美托洛尔组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平下降(P <0.05),PPAR-γ蛋白表达水平升高(P <0.05)。琥珀酸美托洛尔组与温阳补心汤组的心室功能相关指标[左心室舒末内径(LVDD)、左心室缩末内径(LVDS)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期后壁厚度(LVPWD)、左心室收缩末期后壁厚度(LVPWS)],与模型组比较差异具有统计学意义(P <0.05)。结论温阳补心汤能改善心衰,延缓病情进展,其机制可能与p38MAPK通路被抑制及PPAR-γ通路被激活,促进线粒体合成有关。