治伤巴布剂对大鼠急性软组织损伤模型P38MAPK、AKT信号通路的影响＊

目的 观察治伤巴布剂对急性软组织损伤（acute soft tissue injury, ASTI）模型p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）、丝/苏氨酸蛋白激酶（AKT）信号通路的影响,探讨治伤巴布剂干预ASTI的可能作用机制。方法 将40只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、治伤巴布剂组、p38MAPK信号通路抑制剂组、AKT信号通路抑制剂组,每组8只。除正常对照组外,其余四组均予以左侧后肢小腿ASTI造模。造模成功后,治伤巴布剂组于标记部位立即予治伤巴布剂（修剪成1.5x3cm大小）外敷,并用胶布固定;其余四组均予等剂量赋形剂（修剪成1.5×3 cm大小）外敷处理,胶布固定;持续外敷,共持续24 h。p38MAPK信号通路抑制剂组在造模前30 min予腹腔注射p38MAPK信号通路抑制剂SB203580（400 μg/kg/天）1次;AKT信号通路抑制剂组在造模前30 min予腹腔注射AKT信号通路抑制剂perifosine（20 mg/kg/天）1次。分别于0（造模前）、2h、4h、8h、12h、24h测量受伤小腿肌肉处的周长,并计算肌肉肿胀率（muscle swelling rate,MSR）。24 h药物干预结束后,采用颈椎脱臼法处死大鼠。后将左侧后肢小腿损伤中心部位进行取材,分成三份。一部分用于观察组织病理学形态变化;一部分用于逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测核因子-κB（nuclear factor kappa-B,NF-κB）p65 mRNA、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA、白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达水平;剩下部分用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测骨骼肌组织TNF-α、IL-1β含量水平及蛋白质免疫印迹（Western-blot）法测定p38MAPK、AKT、NF-κB p65、核因子抑制蛋白α（inhibitor kappa B alpha, IκBα）表达水平。结果 与正常对照组相比,模型对照组MSR显著增加（P<0.01）;病理形态学上,骨骼肌组织可见大面积肌细胞排列紊乱,肌细胞变性坏死,间质内可见红细胞聚集及大量炎症细胞浸润;骨骼肌组织TNF-α、IL-1β含量水平显著升高（P<0.01）;磷酸化p38MAPK（p-p38）/总p38MAPK（t-p38）,磷酸化-AKT（p-AKT）/总-AKT（t-AKT）明显升高（P<0.01）,NF-κB p65及NF-κB p65mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与模型对照组相比,治伤巴布剂组MSR在治疗第8 h、12 h、24 h显著下降（P<0.01）,且在治疗第24 h,其MSR较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组下降更明显（P<0.05）;病理学评分显著下降（P<0.01）,且较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组下降更显著（P<0.05）;骨骼肌组织TNF-α、IL-1β含量水平明显下降（P<0.01）,且较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组更显著（P<0.05）;p-p38/t-p38及p-AKT/t-AKT明显下降（P<0.01）,NF-κB p65及NF-κB p65 mRNA表达水平显著下降（P<0.01）,且较p38MAPK、AKT信号通路抑制剂组在降低NF-κB p65及NF-κB p65 mRNA相对表达值方面更显著（P<0.01）。结论 治伤巴布剂可能同时对p38MAPK、AKT信号通路产生了一定的抑制作用,引起NF-κB活性下调,NF-κB p65蛋白的表达下调,进而引起骨骼肌组织TNF-α、IL-1β炎性细胞因子含量水平下调,减轻ASTI炎症反应,从而改善ASTI。

Effects of Injury-curing Cataplasm on P38MAPK and AKT Signaling Pathways in Rat Acute Soft Tissue Injury Model