心肌梗死后钾通道Kv9.X基因表达水平的变化及意义

目的研究大鼠心肌梗死后钾通道Kv9.X(Kv9.1、Kv9.2、Kv9.3)基因表达水平的改变,并初步探讨此种变化的意义。方法通过结扎大鼠左前降支近端建立心肌梗死大鼠模型,手术后存活大鼠进入心肌梗死组(MI组)(7 d组,30 d组)。同时,设立相应的假手术组(SH组)。应用半定量RT-PCR方法检测左室心肌(心肌梗死者取非梗死区左室心肌)钾通道Kv9.1、Kv9.2、Kv9.3 mRNA量。结果7 d组:与假手术组比较,MI组Kv9.1、Kv9.2、Kv9.3 mRNA量明显下降(P<0.05)。30 d组:与假手术组比较,MI组Kv9.1、Kv9.2、Kv9.3 mRNA的量均极显著下降(P<0.01)。MI组:30 d组与7 d组比较,Kv9.1、Kv9.2、Kv9.3 mRNA的量显著下降(P<0.05)。结论心肌梗死后钾通道Kv9.1、Kv9.2、Kv9.3 mRNA表达呈时间依赖性下调。     

猪急性心肌梗死后钾通道Kv2.1、Kir2.1基因表达的变化

目的:研究猪急性心肌梗死后梗死边缘区钾通道Kv2.1、Kir2.1 mRNA表达的变化。方法:通过结扎猪左前降支中下段2 h后再灌注建立急性心肌梗死模型(MI),手术后存活猪进入MI组,同时设立相应的假手术组(SH),于24 h后取左心室梗死边缘区及假手术组相应部位,应用半定量逆转录-聚合酶链反应方法检测心外膜和心内膜心肌内向整流性钾电流亚单位(Kir2.1)、延迟整流性钾电流亚单位(Kv2.1)mRNA的表达量。结果:Kv2.1基因表达在SH组左心室心内膜和心外膜间没有差异,而Kir2.1基因表达在心内膜高于心外膜(P<0.05),MI组Kv2.1基因表达在心内膜和心外膜都显著下降(P<0.05),而且减少的程度一致,而Kir2.1基因表达只在心外膜层下降(P<0.05)。结论:局部离子通道mRNA表达的下调可能是急性心肌梗死后电生理异质性的一个决定因素,从而增加心肌梗死后电活动的不稳定性。     

三七总皂苷对大鼠缺血心肌血管新生及相关生长因子的影响

目的观察三七总皂苷促对大鼠缺血心肌血管新生及相关生长因子表达的影响。方法结扎左冠状动脉制备急性心肌梗死(AMI)模型大鼠,随机分为模型组和三七总皂苷低、高剂量组,另设假手术组。比较各组大鼠心肌微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)蛋白表达灰度值。结果模型组和三七总皂苷组大鼠MI边缘区MVD及VEGF、b FGF蛋白表达灰度值均明显高于假手术组(P<0.01);三七总皂苷组大鼠MI边缘区MVD及VEGF、b FGF蛋白表达灰度值明显高于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论三七总皂苷可促进心肌梗死(MI)后大鼠缺血心肌血管新生而发挥缺血心肌保护作用,可能机制为增强心肌VEGF、b FGF蛋白表达。     

盐酸曲美他嗪对大鼠缺血心室肌Ito通道α亚单位表达影响的研究

目的:研究盐酸曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ)对急性心肌梗死大鼠血浆游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)浓度和左心室梗死周边区心室肌瞬时外向钾电流(Transient outward current,Ito)通道α亚单位(Kv4.2、Kv4.3和Kv1.4)表达变化的影响.方法:通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心梗模型,将存活的26只大鼠按随机数字表分为急性心梗组和TMZ组.每组13只,同时设立假手术组,10只.4周后取左室梗死周边区心肌组织,分别用Real-time PCR和Western blot检测Kv4.2、Kv4.3、Kv1.4mRNA和Kv4.2、Kv4.3、Kv1.4蛋白质表达,同时取全血用比色法测血浆FFA浓度.结果:急性心梗组血浆FFA浓度和Kv1.4基因表达水平高于假手术组(P＜0.05),而Kv4.2、Kv4.3基因表达较假手术组降低(P＜0.05);TMZ组血浆FFA浓度和Kv1.4基因表达与心梗组相比降低(P＜0.05),而Kv4.2、Kv4.3基因表达水平较心梗组升高(P＜0.05),接近于假手术组.结论:急性心梗后4周梗死周边区心肌Kv4.2、Kv4.3基因表达降低,Kv1.4基因表达和血浆FFA浓度增高,TMZ可能通过降低心梗后血浆FFA浓度,逆转其Ito通道α亚单位表达的改变.     

缬沙坦/氨氯地平通过调控miR-21对心肌缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用及机制研究

目的:研究缬沙坦/氨氯地平对心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)大鼠的保护作用及相关机制。方法:30只大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组10只,模型组和治疗组均建立MIRI模型,给予治疗组30 mg/kg的缬沙坦/氨氯地平药物混悬液8周治疗。HE染色观察各组大鼠心肌组织形态学;计算梗死心肌占总心肌的比例;MTT法检测各组心肌细胞生存率;rt-PCR法检测各组心肌组织中miR-21和抗过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM) mRNA的相对表达。结果:模型组心肌梗死面积比例显著高于假手术组(P<0.05);治疗组心肌梗死面积比例显著低于模型组(P<0.05)。模型组心肌细胞生存率显著低于假手术组(P<0.05);治疗组心肌细胞生存率显著高于模型组(P<0.05)。模型组心肌组织中miR-21的相对表达显著高于假手术组(P<0.05);治疗组心肌组织中miR-21的相对表达显著低于模型组(P<0.05)。模型组心肌组织中PGC-1α、NRF1和TFAM mRNA的相对表达显著低...     

鞘内注射Ad-hNGFβ对神经痛大鼠的镇痛作用及背根神经节Kv1 mRNA表达的影响

目的:观察鞘内注射重组腺病毒介导人神经生长因子β基因(Ad-hNGFβ)对坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)大鼠痛阈及背根神经节(DRG)Kv1mRNA表达的影响,探讨其镇痛作用及可能机制。方法:SD雄性大鼠99只,随机分为3组:A组(CCI+Ad-hNGFβ组)(33只);B组[CCI+ACSF(人工脑脊液)组](33只);C组(假手术+ACSF组)(33只)。术前、术后3、7、14、28d分别测定各组大鼠热痛、机械痛阈值以及疼痛行为学评分。术后3、7、14、28d每组取4只麻醉后处死,取L4～L6段DRG,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,半定量分析Kv1mRNA表达变化。结果:所有CCI动物从术后第3天起,出现明显疼痛行为学改变和热痛、机械痛阈值的降低,与C组比差异有显著性(P<0.05)。CCI术后立即鞘内注射Ad-hNGFβ,术后第14天起,该组行为学评分明显低于B组(P<0.05);术后第7天起,热痛阈值明显高于B组(P<0.05)。RT-PCR结果显示A组和B组术后3dKv1.2,Kv1.4,Kv1.6mRNAs明显减少,显著低于C组(P<0.05),术后7dKv1.1mRNAs明显减少,显著低于C组(P<0.05),术后Kv1.5mRNAs均无减少(P>0.05),术后14dA组与B组比Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4mRNAs明显增高(P<0.05)。结论:CCI术后立即鞘内注射Ad-hNGFβ可缓解大鼠神经痛,降低行为学评分,增加热痛阈值,可增加钾通道Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4mRNAs表达,说明CCI大鼠痛觉过敏与背根神经节Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4,Kv1.6mRNAs表达的减少有关。     

辛伐他汀对大鼠心肌梗死后MMP-2,9 mRNA表达的影响

目的 :观察辛伐他汀对大鼠心肌梗死 (MI)后心肌基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP 2 ,9)mRNA表达的影响。方法 :结扎大鼠左冠状动脉前降支 (LAD)制成急性心肌梗死模型 ,随机分为 3组 :分别为辛伐他汀干预组(MI S)、心肌梗死对照组 (MI C)和假手术组 (sham)。 4周后 ,RT PCR法检测左心室梗死区及非梗死区心肌MMP 2和MMP 9mRNA表达的情况。结果 :大鼠MI4周后左心室心肌MMP 2和MMP 9mRNA表达较假手术组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,辛伐他汀组上述指标较梗死对照组显著降低 (P <0 .0 5 ) ,但仍高于假手术组 (P <0 0 5 ) ,三组血脂无显著性差异。结论 :辛伐他汀减少大鼠心肌梗死 4周后左心室心肌MMP 2和MMP 9mR NA表达 ,此改变不依赖其降脂作用。     

Ghrelin及其受体在大鼠心肌梗死后的动态表达

目的 Ghrelin是近年发现的一种新的生长激素释放肽,具有心血管保护效应。本研究旨在观察心肌梗死（MI）后Ghrelin及其受体GHSR-1a的动态表达及其变化。方法 30只SD雄性大鼠,随机分为四组,分别为假手术组（6只）,心肌梗死后3 d组（8只）,梗死7 d组（8只）,梗死28 d组（8只）。采用冠状动脉结扎法制作心肌梗死模型,假手术组只在冠状动脉下穿线,但不结扎。采用实时定量PCR方法检测梗死边缘心肌Ghrelin及GHSR-1a mRNA表达,免疫印迹法检测梗死边缘心肌Ghrelin及GHSR-1a蛋白表达及分布。结果 与假手术组比较,MI后3 d、7 d、28 d梗死周边区域心肌中Ghrelin mRNA表达明显降低（P〈0.05）,且呈逐渐下降趋势;而GHSR-1a mRNA表达显著增加（P〈0.05）;梗死3 d组与梗死7 d组差异无统计学意义（P〉0.05）。免疫印迹显示假手术组大鼠心肌显示出了较强的Ghrelin阳性表达,而心肌梗死后Ghrelin阳性表达明显降低（P〈0.05）;与此相反,GHSR-1a蛋白表达在梗死后明显增加（P〈0.05）。结论 Ghrelin/GHSR-1a系统在梗死后心脏重构中可能起着重要作用,并可作为防止心脏重构的一个新的干预靶点。     

阿托伐他汀对大鼠心肌梗死后TNF-α、PDCD5表达的影响

目的:探讨心肌梗死后凋亡基因PDCD5表达的变化及阿托伐他汀对其表达的影响.方法:结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死(MI)模型.取大鼠45只,其中30只MI后24 h随机分为MI组(n=15)和阿托伐他汀组(n=15);余15只作为假手术组.阿托伐他汀组术后每d灌胃阿托伐他汀1 mg/kg,余2组灌胃等量生理盐水.6周后检测左心室非梗死区心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量、凋亡基因PDCD5 mRNA及其蛋白产物的表达.结果:6周后MI组、阿托伐他汀组和假手术组存活大鼠分别为10只、11只和14只.MI组非梗死区心肌组织TNF-α含量和PDCD5 mRNA及PDCD5蛋白表达高于假手术组(P均＜0.05);阿托伐他汀组上述指标的表达高于假手术组(P均＜0.05),但均低于MI组(P＜0.05).结论:阿托伐他汀可能通过降低大鼠MI后非梗死区心肌组织TNF-α的含量而降低非梗死区心肌组织中PDCD5 mRNA及其蛋白的表达.     

厄贝沙坦对大鼠梗死心肌PPAR-γ表达及心室重塑的影响

目的:检测过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ)在大鼠心肌梗死时心肌细胞中的表达水平,探讨厄贝沙坦逆转心室重塑的机制是否与PPAR-γ有关.方法:结扎大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,24 h后存活大鼠随机分成心肌梗死(Myocardial infarction,MI)组、厄贝沙坦(Irbesartan,Ire)组75 mg/(kg·d),另设假手术(Sham)组.6周后测定PPAR-γ mRNA及蛋白的表达情况,左室重量指数,心肌细胞横切面积,测定心肌胶原容积分数.结果:与假手术组比较,MI组大鼠心肌中PPAR一γmRNA及蛋白表达水平显著降低,左室重量指数增加,心肌细胞横截面积增加,非梗死区胶原沉积明显,胶原比例增加.Ire组心肌中PPAR-γmRNA及蛋白表达水平增高,左室重量指数降低,心肌细胞横截面积减少,非梗死区胶原沉积减少.结论:PPAR-γ在大鼠心肌梗死时心肌细胞中的表达下调;厄贝沙坦可能通过上调并激活PPAR-γ逆转心肌梗死后左室重塑.     

急性心肌梗死后快速延迟整流K~+通道基因表达的变化

目的探讨猪心肌梗死(MI)后梗死边缘区快速延迟整流K+通道KCNH2和KCNE2基因表达水平的改变及意义。方法通过结扎猪左前降支远端1/3～1/2处2h建立急性心肌梗死(AMI)模型,手术后存活猪进入MI组,术后24h取左心室梗死边缘区内层(Endo)、中层(Mid)和外层(Epi)心肌,应用半定量RT-PCR方法检测KCNH2和KCNE2mRNA含量。同时,设立相应的假手术组(SH组),SH组取与MI组对应区域的心肌组织。结果 KCNH2和KCNE2基因的表达在SH组左心室En-do、Mid和Epi心肌间没有差异,与SH组比较,AMI后梗死边缘区3层心肌KCNH2mRNA表达均明显下降(P<0.05),而且3层心肌间的基因表达呈不均一性(P<0.05),KCNE2mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AMI后梗死边缘区3层心肌KCNH2基因表达的不均一性下调,可能在MI后早期室性心律失常的发生中起重要作用。     

番茄红素对机体力竭性运动后抗氧化能力的影响

目的：研究番茄红素对机体力竭性运动后抗氧化能力的影响。方法：选取100只sD大鼠,随机分成对照组和实验组两组,每组各50只。大鼠力竭性游泳后,实验组大鼠灌注番茄红素,对照组不灌注,实验持续21天,期间检测NO、MDA和SOD等指标。结果：实验组NO含量在第7、14和21d均低于对照组,其中在第7d（P〈0．01）和21d（P〈0．05）具有显著性差异;实验组MDA含量在第7d（P〈0．05）、14d（P〈0．01）和21d（P〈0．01）均显著低于对照组;实验组SOD活性一直保持平稳,且在第7d（P〈0．05）、14d（P〈0．01）和21d（P〈0．01）均显著高于对照组。结论：说明力竭性运动训练后,机体的自由基损伤加剧,服用番茄红素能显著提高机体抗氧化的能力。     

吉非贝齐对人巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1表达的差别调节作用及其对膜电位的影响

目的:探讨人巨噬细胞发育过程中Kv1.3、Kir2.1通道的表达和吉非贝齐的调节作用,观察其对膜电位的影响,为动脉粥样硬化（AS）相关性疾病治疗提供电生理学依据。方法：健康人外周血单核细胞源性巨噬细胞随机分为对照5 d组（C 5d）、对照7.5 d组（C 7.5d）和吉非贝齐组（G）,吉非贝齐的终浓度为400 μmol•L^-1;采用Real time RT-PCR及Western blotting技术检测Kv1.3和Kir2.1通道的表达,电压敏感染料膜电位标测技术分析膜电位的变化。结果：与C 5d组比较,C 7.5d组Kv1.3 mRNA/蛋白水平从（1.064±0.275）/（0.227±0.018）升高至（3.067±0.824）/（0.409±0.022）（P<0.05）,但Kir2.1 mRNA/蛋白水平却从（1.024±0.166）/（0.204±0.018）降低至（0.399±0.133）/（0.042±0.008）（P<0.05）;与C 7.5d组比较,吉非贝齐组Kv1.3 mRNA/蛋白水平下降至（1.137±0.067）/（0.143±0.023）（P<0.01）,而Kir2.1 mRNA/蛋白水平却升高至（1.35±0.087）/（0.202±0.033）（P<0.01）;吉非贝齐显著消弱C 5d和C 7.5d组巨噬细胞表面的荧光强度,使其膜电位从（1.000±0.026）分别下降至（0.833±0.046）和（0.481±0.053）（P<0.05）。结论：吉非贝齐差别调节人单核细胞源性巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1通道的表达,并降低巨噬细胞膜电位。     

转化生长因子β1和波形蛋白及结蛋白在糖尿病大鼠肾皮质中早期表达的研究

目的:探讨糖尿病大鼠早期不同阶段转化生长因子β1(TGF-β1)和波形蛋白(vimentin)、结蛋白(desmin)在大鼠肾皮质中表达的变化规律及其相互关系.方法:建立STZ诱导的SD大鼠糖尿病模型;用RT-PCR法半定量检测早期各观察时点糖尿病大鼠肾皮质中TGF-β1和vimentin、desmin mRNA的表达水平.结果:①随着糖尿病病情的进展,TGF-β1和vimentin mRNA的表达量分别从模型建立后第7 d和第14 d起逐渐增多(P=0.001),desmin mRNA表达从第14 d起却逐渐减少(P＜0.05).②糖尿病组的TGF-β1与vimentin的mRNA表达呈正相关(r＝0.740,P=0.000),desmin与TGF-β1的mRNA表达呈负相关(r＝-0.695,P=0.000),desmin与vimentin的mRNA表达也呈负相关(r＝-0.591,P=0.002).结论:糖尿病大鼠早期肾皮质中TGF-β1和vimentin的表达逐渐增多,desmin的表达却逐渐减少,提示TGF-β1可能促进小管上皮细胞向成纤维细胞转化.     

阿司匹林对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的抑制作用及其机制

 目的  观察阿司匹林对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法  取体质量250 g左右的健康清洁级雄性SD大鼠60只,随机分为生理盐水对照组、博莱霉素模型组、甲基强的松治疗组、阿司匹林治疗组,每组15只。生理盐水对照组经气管插管注入生理盐水0.2 mL,其他各组注入博莱霉素 5 mg/kg制备成模型。甲基强的松治疗组和阿司匹林治疗组每天灌胃给药分别予甲基泼尼松龙6 mg/kg、阿司匹林10 mg/kg,于第7、14、28天每组各处死5只,取其肺组织作以下测试:HE染色病理学观察;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测羟脯氨酸、IL-4、TNF-α、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF β)和角化细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)水平;Real Time PCR检测TGF β的mRNA表达。结果  博莱霉素模型组大鼠肺组织在第7天时出现明显的出血渗出性炎症反应,在第28天时出现明显的肺组织纤维化;其肺组织的羟脯氨酸、IL-4和TNF-α水平较生理盐水对照组有明显升高(P<0.05),TGF-β蛋白和TGF β mRNA的表达也明显高于生理盐水对照组(P<0.01)。阿司匹林治疗组肺组织病理与博莱霉素模型组比较,第7天时大鼠肺组织的炎性渗出有明显减轻,第28天时肺组织纤维化程度较轻。阿司匹林治疗组大鼠肺组织的羟脯氨酸、IL-4、TNF-α含量较博莱霉素模型组有明显下降(P<0.01),其肺组织TGF-β蛋白含量和mRNA表达明显低于博莱霉素模型组(P<0.05)。阿司匹林治疗组与甲基强的松治疗组相比较,在第28天时肺组织羟脯氨酸含量低于甲基强的松治疗组(P<0.01),而IL-4、TNF-α、TGF-β、TGF-β mRNA的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论  阿司匹林可抑制炎症细胞分泌TGF-β、IL-4和TNF-α,减轻博莱霉素导致的肺间质纤维化反应,其作用机制可能与下调TGF β mRNA和蛋白的表达有关。     

肝细胞生长因子在肺纤维化模型中的表达及意义

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)在大鼠肺纤维化模型中的表达及意义,探讨肺纤维化可能的发病机制。方法:40只Wistar大鼠随机分成模型组及对照组。前者经气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化,后者灌注生理盐水。两组于气管内灌注后第7,14,28,42d各处死5只,原位杂交法检测HGFmRNA在肺内的表达,酶联免疫吸附法检测HGF蛋白在肺组织及血清中的表达。结果:模型组肺组织HGFmRNA表达及蛋白含量在第7d达高峰,之后下降,第28,42d时低于正常对照(P<0.05,P<0.01)。模型组血清HGF在第7d开始升高达峰,后降低,但仍高于正常对照(P<0.05)。结论:HGF在肺纤维化组织中的表达早期升高,中晚期降低,而血清中的含量始终高于正常组。HGF参与了肺纤维化的发病过程。     

慢性心房颤动患者心房肌细胞Kir2.1、Kir3.4和Kv4.3钾通道重构的研究

目的:观察心房颤动(AF)患者心房组织钾通道 IK,ACh、IK1及 Ito1基因水平的改变。方法:将 59 例风湿性心瓣膜病接受心脏外科手术患者分为两组,其中窦性心律(SR)患者 29 例,慢性房颤(CAF)患者 30 例。手术时切取患者右心耳组织,应用RT PCR技术检测心房肌组织 Kir2.1、Kir3.4 和 Kv4.3 mRNA的表达。结果:与 SR组相比,Kir2.1 mRNA的表达在CAF患者中增加明显,达71%(P<0.01),并与 AF时程呈明显正相关(r=0.49,P=0.004)。与之相反的是Kir3.4 mRNA的表达在CAF患者中均显著减少(下降43%,P<0.01),与AF时程呈明显负相关(r=-0.54, P=0.003)。CAF组编码 Ito1的Kv4.3钾通道的mRNA表达较SR组明显下降(下降 60%,P<0.01)。Kv4.3 mRNA表达也与AF时程呈明显负相关(r=-0.67,P=0.003)。结论:慢性房颤患者 Kir2.1的mRNA表达水平增加及Kir3.4和Kv4.3 的mRNA表达水平减少可能分别是 IK1上调、IK,ACh和 Ito1下调的分子基础,而Kir3.4和Kv4.3 mRNA表达水平减少很可能是机体为拮抗AF电重构时有效不应期缩短的代偿机制之一。     

卒中后抑郁模型大鼠海马BDNFmRNA的表达及舍曲林的干预作用

目的 分析卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)模型大鼠海马脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白及mRNA表达水平,及抗抑郁剂舍曲林干预后BDNF表达水平的变化,初步探讨BDNF在PSD发生中的作用.方法 大脑中动脉阻塞(Mi...