VEGF-C在胰腺癌中的表达及对淋巴结转移影响的体内外实验研究

目的 研究VEGF-C在胰腺癌裸鼠原位种植瘤模型中的表达特点,及其表达抑制后对胰腺癌细胞淋巴结转移的影响.方法 建立人胰腺癌细胞株PANC-1裸鼠原位种植瘤模型,原代培养原发和淋巴结转移灶中胰腺癌细胞,应用RT-PCR、ELISA进一步检测VEGF-C的表达差异,并通过VEGF-C反义寡核苷酸体内外转染抑制其表达,应用流式细胞术及TUNEL等方法 体内外研究对淋巴结转移胰腺癌细胞凋亡的影响.结果 胰腺癌裸鼠原位种植瘤模型中淋巴结转移胰腺癌细胞VEGF-C的表达水平也显著高于原发灶细胞(P<0.05).体内外转染VEGF-C反义寡核苷酸抑制其表达后,淋巴结转移胰腺癌细胞的凋亡率均显著提高(P<0.01),而原发灶胰腺癌细胞的凋亡率无明显影响(P>0.05).结论 在胰腺癌裸鼠原位种植瘤模型中,淋巴结转移灶胰腺癌细胞VEGF-C的表达均明显高于原发灶,并且其表达下调能特异性促进淋巴结转移胰腺癌细胞的凋亡,这可能是VEGF-C在胰腺癌淋巴结转移中的新机制.     

VEGF-C表达对胰腺癌细胞凋亡的影响

目的 研究VEGF-C反义寡核苷酸对胰腺癌原位种植瘤模型中PANC-1细胞凋亡的影响.方法 建立人胰腺癌细胞株PANC-1裸鼠原位种植瘤自发性淋巴结转移模型,分离、原代培养原位灶和淋巴结转移灶中的胰腺癌细胞,并应用real time定量PCR、流式细胞术检测VEGF-C反义寡核苷酸转染对其凋亡能力的影响.结果 VEGF-C反义寡核苷酸抑制胰腺癌细胞VEGF-C的表达后,淋巴结转移灶组PANC-1细胞凋亡率为(15.2±2.7)%,显著高于空白组、SODN组(P＜0.05);原发灶组PANC-1细胞凋亡率为(5.5±2.7)%,与空白组、SODN组的差异无统计学意义(P＞0.05);并且淋巴结转移灶组PANC-1细胞的凋亡率高于原发灶组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF-C表达下调能显著诱导淋巴结转移灶中胰腺癌细胞的凋亡.     

VEGF-C反义寡核苷酸对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响

目的 研究VEGF-C反义寡核苷酸对胰腺癌原位种植瘤模型中PANC-1细胞凋亡的影响.方法 建立人胰腺癌细胞株PANC-1裸鼠原位种植瘤自发性淋巴结转移模型,分离原代培养原位灶和淋巴结转移灶中的胰腺癌细胞,并应用荧光定量PCR、流式细胞术检测VEGF-C反义寡核苷酸转染对其凋亡能力的影响.结果 VEGF-C 反义寡核苷酸抑制胰腺癌细胞VEGF-C的表达后,可促进淋巴结转移灶中PANC-1细胞的凋亡,而对原位灶中胰腺癌细胞无明显影响(P＞0.05).结论 VEGF-C反义寡核苷酸能显著促进淋巴结转移灶中胰腺癌细胞的凋亡.     

VEGF—C对胰腺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的研究VEGF—C对胰腺癌细胞凋亡的影响。方法建立人胰腺癌细胞株PANC-1裸鼠原位种植瘤模型,原代培养原发和淋巴结转移灶中胰腺癌细胞,通过VEGF—C反义寡核苷酸体外转染抑制其表达,应用RT—PCR及流式细胞术等方法研究对淋巴结转移胰腺癌细胞凋亡及bcl-2的影响。结果体外转染后,原代培养原发和淋巴结转移灶中PANC-1胰腺癌细胞VEGF—C的mRNA表达水平显著降低（P〈0．01）。体外转染VEGF—C反义寡核苷酸抑制其表达后,对照组、SODN组、ASODN组淋巴结转移胰腺癌细胞的凋亡率为（2．83±1．01）％、（4．98±2．05）％、（13．22±2．17）％,ASODN组细胞凋亡率显著提高（P〈0．01）,而原发灶胰腺癌细胞的凋亡率分别为（3．51±1．38）％、（4．79±2．16）％、（5．33±2．18）％,凋亡率无明显影响（P〉0．05）;淋巴结转移胰腺癌细胞的反义组bcl-2表达水平明显下调（P〈0．05）,而原发灶胰腺癌细胞bcl-2表达水平无明显变化（P〉0．05）。结论抑制淋巴结转移灶中胰腺癌细胞VEGF—C的高表达可促进胰腺癌细胞凋亡,这和bcl-2表达下调有关;但对原发灶胰腺癌细胞无明显影响。     

VEGF-C、VEGF-D及其受体Flt-4在胰腺癌中的表达及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-C、VEGF-D及fms-like tyrosine kinase-4(Flt-4)蛋白在胰腺癌组织中的表达及与胰腺癌临床病理特征之间的关系.方法 选择根治性手术切除的胰腺癌组织63例及正常胰腺组织13例.采用免疫组织化学法(Envision法)检测胰腺癌组织及正常胰腺组织中VEGF-C、VEGF-D的表达,检测癌周组织及正常胰腺组织中Flt-4的表达,并结合患者的临床病理特征进行统计学分析.结果 63例胰腺癌组织中VEGF-C阳性表达38例(60.3%)、VEGF-D阳性表达40例(63.5%)、癌周Flt-4阳性表达41例(76.2%),均高于正常胰腺组织(P<0.05).VEGF-C、VEGF-D和Flt-4的高表达均与淋巴结转移及患者生存率密切相关(P<0.05).胰腺癌中VEGF-C、VEGF-D与癌周Flt-4蛋白的表达呈正相关(P<0.05).结论 VEGF-C、VEGF-D在胰腺癌中表达增高,Flt-4在癌周组织中表达增高,表明它们与胰腺癌的生物学侵袭性行为有关.在胰腺癌中VEGF-C、VEGF-D均与Flt-4的表达呈显著正相关,并与淋巴结转移及患者生存期密切相关,表明VEGF-C、VEGF-D和Flt-4可以促使胰腺癌发生淋巴结转移,且在转移过程中有相互促进作用.     

人胰腺癌细胞CFPAC-1裸小鼠原位移植瘤模型的建立

目的:建立人胰腺癌裸小鼠原位移植瘤模型,并对其生物学特性进行研究.方法:将人胰腺癌细胞CFPAC-1接种于裸鼠皮下,并将皮下肿瘤组织原位移植于裸鼠胰腺,比较两种移植瘤的生长及转移情况.结果:胰腺癌皮下移植瘤模型与胰腺癌原位移植瘤模型的体内成瘤率、生长情况及形态学上均无显著差异.皮下移植瘤模型呈局限性生长,无一例发生远处转移;原位移植瘤模型远处转移率高达87.5%,发生75.0%腹膜转移,37.5%肝转移,12.5%肺转移,37.5%淋巴结转移,并保持分泌CA19-9的特性.结论:人胰腺癌裸小鼠原位种植瘤模型明显优于皮下移植瘤模型,较好地模拟了人胰腺癌自然生长和局部浸润及远处转移过程,是胰腺癌体内研究理想的动物模型.     

胰腺癌组织中Midkine的表达与细胞增殖及凋亡的关系

目的研究Midkine(MK)蛋白在人胰腺癌组织中的表达与肿瘤细胞增殖和凋亡之间的关系及意义。方法收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组化SP法检测MK蛋白和增殖细胞核抗原Ki67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数,另取同期15例正常胰腺组织作对照。结果15例正常胰腺组织中均未发现MK和Ki67阳性表达,细胞凋亡较少(0.63±0.21);77.1%(35/49)的胰腺癌组织中有MK阳性表达,其表达与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);49例胰腺癌组织中Ki67平均标记指数(LI)为(31.67±15.41),平均凋亡指数(AI)为(5.93±4.18);MK表达阳性组Ki67平均标记指数为(35.27±16.03),显著高于阴性组的(22.67±13.66)(P<0.05);MK表达阳性组凋亡指数为(5.13±2.69),显著低于阴性组的(7.93±6.65)(P<0.05)。结论MK蛋白可作为反映胰腺癌生物学行为的指标之一,其在胰腺癌中的表达可能起到促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,MK基因可能成为胰腺癌治疗的新靶点。     

肺癌VEGF-C表达的器官差异性与淋巴结转移度及肿瘤细胞凋亡的关系

目的 探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)在肺癌原发灶和转移淋巴结中表达的差异,以及与淋巴结转移度(LNR)和肺癌细胞凋亡的关系.方法 采用免疫组织化学和TUNEL法染色,检测并分析肺癌原发灶和转移淋巴结中肿瘤细胞VEGF-C的表达,及其与LNK及肿瘤细胞凋亡的关系.结果 原发灶和LNM灶肿瘤细胞中,LNM灶VEGF-C表达水平明显高于原发灶(P＜0.05);两者的VEGF-C表达均与LNR显著相关(P＜0.05,P＜0.01),LNM灶的表达水平与LNR的相关系数明显高于原发灶(P＜0.05);原发灶VEGF-C的表达与肿瘤细胞凋亡率无显著相关(P＞0.05),而LNM灶VEGF-C的表达与凋亡率呈显著负相关(P＜0.01).结论 肺癌VEGF-C在原发灶和LNM灶中的表达差异具有统计学意义,而LNM灶表达水平与LNK的关系更为密切,且与LNM灶中肺癌细胞的凋亡相关.     

人胰腺癌裸小鼠胰腺原位移植模型的建立

目的建立人胰腺癌高转移裸小鼠胰腺原位移植模型.方法将人胰腺癌细胞株SW1990分别接种于裸鼠皮下和裸鼠胰腺,比较两组移植瘤的生长和侵袭转移情况.结果胰腺癌皮下移植模型与胰腺原位移植模型的体内成瘤率、生长率和形态学上均无显著不同,但前者呈局限性生长,后者的9周转移率为93.8%,其中淋巴结转移、腹膜播散和肝转移发生率各占93.3%、73.3%和53.3%,且肝肿瘤结节CEA阳性,AFP阴性.结论胰腺癌细胞SW1990的胰腺原位移植模型明显优于皮下移植模型,为一较理想的"拟人”胰腺癌转移模型.     

VEGF-C及其受体Flt4在非小细胞肺癌转移中的作用

目的探讨VEGF-C/VEGFR-3(Flt4)在非小细胞肺癌转移中的作用及意义.方法应用免疫组化S-P法,检测75例临床病理资料完整的非小细胞肺癌癌组织中VEGF-C及Flt4的表达.结果 75例非小细胞肺癌癌组织中VEGF-C阳性率为77.3%(58/75),Flt4阳性率为46.7%(35/75);且VEGF-C与Flt4的表达呈正相关(r=0.721, P<0.01).VEGF-C阳性指数在转移组(54.65±13.23)高于未转移组(32.45±10.12)(P<0.05).随着癌细胞VEGF-C表达的强度增加,Flt4阳性脉管数也随之增加,各组间差异均有显著性(P<0.01).非小细胞肺癌中Flt4阳性脉管数在淋巴结转移组(14.58±3.24)高于未转移组(10.51±2.32)(P<0.05).结论非小细胞肺癌高水平表达VEGF-C、Flt4, 两者表达呈正相关.Flt4阳性脉管数与淋巴结转移密切相关.     

VEGF-C介导的乳腺癌肿瘤淋巴管生成及定位

目的：探讨血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor C，VEGF-C）介导的乳腺癌肿瘤淋巴管生成及定位。方法：分子生物学原位杂交方法检测VEGF-C mRNA基因在89例原发性乳腺癌组织中的表达；免疫组化SP法对乳腺癌肿瘤淋巴管进行血管内皮生长因子受体3（vascular endothelial growth factor receptor-3，VEG-FR-3）标记。结果：在89例原发性乳腺癌组织中，49例表达VEGF-C mRNA，表达率为55．06％。VEGF-C mRNA的表达与乳腺癌淋巴管密度（lymphatic vessel density，LVD）和腋淋巴结转移呈正相关；与VEGF-CmRNA阴性组相比，VEGF-C mRNA阳性组的肿瘤淋巴管密度大、腋淋巴结转移率高（均P〈0．05）；所有病例都有不同程度的淋巴管生成，但以肿瘤间质组织中淋巴管生成为主，癌巢中未见到明显的成形淋巴管。肿瘤淋巴管密度与乳腺癌临床分期和腋淋巴结转移呈正相关，临床分期越晚，肿瘤淋巴管密度越高（P〈0．05）；腋淋巴结转移组的肿瘤淋巴管密度比无淋巴结转移组高（P〈0．05）。结论：原发性乳腺癌组织VEGF-C mRNA的表达与乳腺癌肿瘤淋巴管生成、腋淋巴结转移呈正相关；VEGF-C介导的乳腺癌肿瘤淋巴管生成主要发生在肿瘤间质组织中。     

P53、VEGF和VEGF-C在胰腺癌中的表达及意义

目的　探讨胰腺癌组织中P5 3蛋白、血管内皮生长因子 (VEGF)及血管内皮生长因子C (VEGF C)的表达及其与临床病理学特征之间的关系。方法　采用SP免疫组织化学方法 ,对 4 6例胰腺癌组织中P5 3蛋白、VEGF及VEGF C的表达进行检测。结果　P5 3、VEGF与VEGF C阳性表达率分别为 5 8 7%、 6 5 2 %和 4 3 5 %。P5 3表达与胰腺癌远处转移显著相关 (P <0 0 5 ) ,而与肿瘤大小 ,病理学分级及淋巴结转移无关 ,VEGF表达与胰腺癌淋巴结转移 (P <0 0 5 )和远处转移 (P <0 0 1)显著相关 ,而与肿瘤大小 ,病理学分级无关 ,P5 3表达与VEGF表达呈明显正相关 (P <0 0 5 )。VEGF C表达与胰腺癌淋巴结转移显著相关 (P <0 0 5 ) ,而与肿瘤大小 ,病理学分级及远处转移无关。结论　在胰腺癌中 ,VEGF与P5 3表达呈正相关 ,在胰腺癌的淋巴结转移和远处转移中起重要作用。VEGF C表达与胰腺癌淋巴结转移呈正相关 ,在胰腺癌的淋巴结转移中起重要作用。     

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子C表达与淋巴结转移关系的研究

目的 探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)与非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴管生成和淋巴结转移的关系.方法 52例NSCLC患者分为淋巴结转移阳性组(25例)和淋巴结转移阴性组(27例),采用半定量反转录PCR及免疫组织化学方法 检测2组患者手术切除癌组织及196枚淋巴结组织(2组各98枚,淋巴结转移阳性组98枚中病理阳性淋巴结72枚,阴性26枚)中VEGF-C mRNA及蛋白的表达.结果 淋巴结转移阳性组患者癌组织VEGF-C mRNA表达水平(0.273±0.179)明显高于淋巴结转移阴性组(0.089±0.087,P<0.01);阳性淋巴结组织VEGF.C mRNA表达水平(0.207±0.174)明显高于淋巴结转移阴性组的淋巴结组织(0.114±0.107,P<0.01).在淋巴结转移阳性组中,阳性与阴性淋巴结组织VEGF-C mRNA表达水平分别为0.207±0.174、0.196±0.186,差异无统计学意义(P>0.05).淋巴结转移阳性组15例患者中14例(93.3%)肺癌组织VEGF-C蛋白表达阳性,46枚阳性淋巴结组织中37枚(80.4%)VEGF-c蛋白表达阳性;而淋巴结转移阴性组15例患者中仅1例(6.7%)肺癌组织VEGF-C蛋白表达阳性,52枚淋巴结组织VEGF-C蛋白表达均为阴性,组间差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 VEGF-C mRNA与蛋白的表达水平与NSCLC淋巴结转移关系密切,在淋巴结转移的早期诊断中有潜在的应用价值.     

VEGF-C在直肠癌中的表达及与淋巴结转移的关系

目的 :检测血管内皮生长因子C(VEGF -C)在直肠癌中的表达 ,探讨VEGF -C的表达与直肠癌淋巴转移的关系。方法 :采用免疫组化的方法检测 88例直肠癌术后肿瘤组织的标本中VEGF -C的表达。结果 :VEGF -C阳性表达 38例 (43.2 % )。在淋巴结转移的病例组中VEGF -C阳性表达 (81.6 % ) ,明显高于其在无淋巴结转移的病例组中的表达 (14 .0 % ) (P <0 .0 1)。VEGF -C在肠系膜根部淋巴结转移组的阳性表达 (10 0 % )高于其在肠系膜淋巴结转移组的阳性表达 (96 .3% )与其在肠旁淋巴结转移组的表达 81.6 % (P <0 .0 1)。结论 :VEGF -C表达于部分直肠癌中 ,其表达与直肠癌淋巴结转移显著相关 ,并且与直肠癌淋巴结转移程度显著相关。     

CXCR4和VEGF-C在结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系

目的探讨趋化因子受体(CXCR4)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在人结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系。方法选择65例结肠癌标本,应用免疫组织化学染色方法,检测CXCR4和VEGF-C在人结肠癌组织中的表达,同时对其与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果CXCR4在结肠癌组织中的阳性表达率为43.1%,其中淋巴结转移组表达率为57.9%,无淋巴结转移组表达率为22.2%,差异有非常显著的统计学意义(P<0.01)。VEGF-C在结肠癌组织中的阳性表达率为50.2%,其中淋巴结转移组表达率为68.4%,无淋巴结转移组表达率为25.9%,二者差异非常显著(P<0.01)。而且,CXCR4阳性表达与VEGF-C阳性表达呈显著正相关(P<0.05)。结肠癌CXCR4和VEGF-C的表达水平与肿瘤细胞淋巴结转移密切相关,而与病人的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度及肿瘤浸润深度等无相关性(P>0.05)。结论CXCR4和VEGF-C的表达可作为评估结肠癌病人淋巴道转移的一个观测指标。     

血管内皮生长因子C及其受体表达与乳腺癌淋巴结转移的相关性研究

目的:本研究旨在检测乳腺癌组织中VEGF-C/VEGFR-3、LVD的表达情况,探讨其表达水平与临床病理特征、复发转移的相互关系,进一步研究肿瘤转移的机制,为抗淋巴管形成、进而为抗乳腺癌淋巴转移的治疗提供理论依据。方法:应用免疫组织化学(SP)法检测83例乳腺癌手术标本的原发灶的VEGF-C及其受体VEGFR-3的表达及LVD。结果:83例乳腺癌组织VEGF-C阳性表达者36例(43.3%),淋巴结转移组的VEGF-C阳性表达率为59.4%(24/44),显著高于无淋巴结转移组30.8%(24/44),(P<0.05)。VEGF-C表达与年龄、临床分期和激素受体ER、PR、CerbB-2表达无关;LVD与年龄、临床分期和ER、PR、CerbB-2表达水平无关;在VEGF-C表达阳性组、阴性组中LVD统计学上差异显著(P<0.05)。结论:乳腺癌组织VEGF-C表达可能促进肿瘤内淋巴管的生成;乳腺癌的淋巴结转移和VEGF-C的高表达密切相关。     

CXCR4在VEGF-C介导的胃癌淋巴道转移中的作用

目的 探索趋化因子受体CXCR4和VEGF-C与胃癌淋巴道转移的关系,为研究干预胃癌淋巴转移的新方法提供理论依据.方法 采用RT-PCR方法检测86例胃癌组织中趋化因子受体CXCR4 mRNA的表达及VEGF-C mRNA的表达,探索其与胃癌淋巴结转移的关系;Boyden趋化小室法检测CXCR4不同表达状态胃癌细胞的趋化活性和趋化抑制性.结果 86例胃癌组织均有不同程度的CXCR4 mRNA和VEGF-C mRNA的表达.53例CXCR4 mRNA呈高表达,表达率为61.63%,VEGF-C mRNA高表达率为56.98%(49/86);VEGF-C mRNA高表达组中的CXCR4 mRNA的表达率也较高;CXCR4 mRNA的表达与胃癌淋巴结转移呈正相关(P＜0.05);CXCR4的配体SDF-1对胃癌细胞的平均趋化率为81%,经抗CXCR4单克隆抗体处理后癌细胞的平均趋化率下降至30%,CXCR4被特异性抗体封闭前后的癌细胞趋化活性有显著性差异(P＜0.05).结论 胃癌CXCR4的表达和VEGF-C的表达与胃癌淋巴结转移呈正相关;CXCR4的功能状态影响胃癌细胞的迁移活性.通过干预趋化因子受体CXCR4和VEGF-C的活性可能成为阻断胃癌淋巴转移的新靶点.     

VEGF-C、VEGF-D及其受体FLt-4与大肠癌淋巴转移及预后的相关性研究

目的:研究VEGF-C、VEGF-D及其受体Flt-4在大肠癌组织中的表达规律,探讨其与大肠癌浸润特点、淋巴转移等生物学特性及预后的关系。方法:采用免疫组织化学染色法检测45例大肠癌组织中VEGF-C、VEGF-D及Flt-4表达情况,评估VEGF-C、VEGF-D及Flt-4的表达与大肠癌生物学特性及预后的关系。结果:研究发现大肠癌组织VEGF-C和VEGF-D及其受体Flt-4阳性表达率显著高于正常组织(P<0.05)。并且VEGF-C/VEGF-D表达与Flt-4蛋白表达呈显著正相关(P<0.01)。VEGF-C、VEGF-D及Flt-4的表达在有无淋巴管浸润组、有无淋巴结转移组及不同Dukes分期中亦有显著性差异(P<0.05),45例大肠癌患者术后5年生存率为53.3%。其中VEGF-C、VEGF-D和Flt-4阳性患者5年生存率均分别低于阴性患者组(P<0.05)。结论:在大肠癌组织中VEGF-C和VEGF-D与其受体Flt-4的表达与大肠癌淋巴管的发生及促进肿瘤细胞经淋巴管转移可能起一定作用,VEGF-C和VEGF-D表达的检测可作为预测大肠癌淋巴结转移的辅助指标;VEGF-C和VEGF-D蛋白高表达与大肠癌患者预后相关,可能成为今后大肠癌预后评估的分子指标之一。