七氟醚后处理对氧糖剥夺/复氧复糖诱导HT22细胞DNA损伤及SIRT1表达的影响

目的 探讨七氟醚后处理对HT22细胞氧糖剥夺/复氧复糖后DNA损伤及沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响.方法 随机将对数生长期的HT22细胞分为7组:空白对照组(CON),氧糖剥夺/复氧复糖4 h组(OGD/R 4 h),氧糖剥夺/复氧复糖4 h+1％七氟醚后处理组(OGD/R 4 h+1％SEVO),氧糖剥夺/复氧复糖4 h+2％七氟醚后处理组(OGD/R 4 h+2％SEVO),氧糖剥夺/复氧复糖6 h组(OGD/R 6 h),氧糖剥夺/复氧复糖6 h+1％七氟醚后处理组(OGD/R 6 h+1％SEVO),氧糖剥夺/复氧复糖6 h+2％七氟醚后处理组(OGD/R 6 h+2％SEVO);实验后序部分只取前四组研究.MTT法检测细胞存活率,PI/Hoechst荧光双染检测细胞坏死及凋亡,TUNEL染色检测神经元凋亡,免疫荧光染色测定Cleaved-casepase3表达,免疫荧光染色检测8-OHdG以测定DNA损伤程度,Western blot测定SIRT1、Bcl-2及BAX的蛋白表达.结果 前半部分实验结果 中,与CON组比较,OGD/R 4 h及OGD/R 6 h组细胞存活率均降低(均P<0.01),凋亡细胞及坏死细胞占比升高;与对应OGD/R 4 h组比较,1％和2％七氟醚后处理的细胞存活率升高(均P<0.01),凋亡及坏死细胞数量占比降低;与对应OGD/R 6 h组比较,1％和2％七氟醚后处理的细胞存活率升高(均P<0.01),凋亡及坏死细胞占比降低.实验后半部分,与CON组比较,OGD/R 4 h组中TUNEL染色阳性细胞数增多,Cleaved-casepase3表达增加(P<0.01),8-OHdG含量增多(P<0.01),BAX蛋白表达上调(P<0.01),SIRT1、Bcl-2蛋白表达下调(均P<0.01);与OGD/R 4 h组比较,1％和2％七氟醚后处理的细胞TUNEL染色阳性细胞数减少,Cleaved-casepase3表达降低(均P<0.01),8-OHdG含量降低(均P<0.01),BAX蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),而SIRT1、Bcl-2蛋白表达上调(均P<0.01;P<0.05,P<0.01).结论 七氟醚后处理改善氧糖剥夺/复氧复糖诱导的HT22海马神经元DNA氧化损伤及凋亡,并上调SIRT1蛋白表达.     

高迁移率族蛋白B1通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达促进氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞的凋亡

目的：研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）在氧糖剥夺/复氧后对星形胶质细胞凋亡的影响,同时通过检测凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax表达变化探讨其可能的作用机制。方法：将体外培养新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞分为正常组、模型组、干扰组、对照组,用携带大鼠HMGB1的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）慢病毒载体干扰星形胶质细胞抑制HMGB1表达后进行氧糖剥夺/复氧处理,氧糖剥夺6 h、复氧24 h后检测。通过Western blotting法检测RNA干扰效果,通过MTT细胞存活实验检测细胞损伤,通过TUNEL法检测细胞凋亡,最后通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达。结果：与正常组比较,模型组经过氧糖剥夺/复氧处理后星形胶质细胞内HMGB1表达明显升高（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率下降（P<0.001）,TUNEL法检测凋亡细胞数增多（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl 2/Bax蛋白比值下降（P<0.001）;与模型组比较,RNA干扰有效抑制HMGB1蛋白表达（P<0.001）, MTT实验检测细胞存活率升高（P<0.001）,TUNEL法标记凋亡细胞数减少（P<0.001）, 凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax蛋白比值升高（P<0.001）。结论：氧糖剥夺/复氧后HMGB1的释放可以导致星形胶质细胞损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达有关。     

lncRNA CRNDE靶向miR-212-5p调控氧糖剥夺诱导的大鼠皮质神经元损伤

目的：探讨lncRNA CRNDE对氧糖剥夺(OGD)诱导的大鼠皮质神经元损伤的影响及作用机制。方法：培养大鼠皮质神经元，分为对照组(Con组)、OGD组、OGD+si-NC组、OGD+si-CRNDE组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-212-5p组、OGD+si-CRNDE+anti-miR-NC组和OGD+si-CRNDE+anti-miR-212-5p组，RT-qPCR法检测细胞中CRNDE和miR-212-5p表达水平，CCK-8法检测细胞存活率，试剂盒法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blotting检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证CRNDE和miR-212-5p的调控关系。结果：与Con组比较，OGD组CRNDE水平、LDH漏出率、细胞凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.01),miR-212-5p水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低(P<0.01)。与OGD+si-NC组比较，OGD+si-CRNDE组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平升高(P<0.01)...     

桃红四物汤促进自噬抑制氧糖剥夺诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨桃红四物汤(TST)对氧糖剥夺(OGD)诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用。 方法 将H9C2心肌细胞分为5组(n=3)：对照组、OGD模型组、OGD +TST含药血清处理组、OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组、OGD +TST含药血清+氯奎处理组。四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法(western blot)检测自噬相关蛋白(LC3、p62)和凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)的表达。结果 与对照组相比,OGD模型组细胞活力显著下降(P<0.05),细胞凋亡显著增多(P<0.05),LC3II/LC3I比值和促凋亡蛋白Bax显著增多,p62和抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。与OGD模型组相比,OGD +TST含药血清处理组的细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡明显减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达增多,p62和Bax蛋白表达减少。与OGD +TST含药血清处理组相比,OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组的细胞活力进一步升高(P<0.05),细胞凋亡比例进一步减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达进一步增多,p62和Bax蛋白表达进一步减少;而氯奎处理桃红四物汤治疗组的细胞活力下降(P<0.05),凋亡细胞比例升高(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达减少,p62和Bax蛋白表达增多。结论 桃红四物汤促进氧糖剥夺H9C2心肌细胞自噬,抑制心肌细胞凋亡,对心肌缺血起保护作用。     

S14G-humanin 对氧糖剥夺/ 复氧神经细胞损伤的保护作用

目的：评估S14G-humanin（HNG）在SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞体外氧糖剥夺/ 复氧（oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）模型中潜在的神经保护作用的相关分子机制。方法：将SH-SY5Y 细胞分为 对照组、OGD/R 模型组、HNG 干预组、HNG 联合FLLL32 抑制剂组。三气培养箱建立SH-SY5Y 细胞OGD/R 损 伤模型;抑制剂组给予不同剂量HNG、FLLL32（JAK2/STAT3 通路抑制剂）。CCK8 细胞检测试剂盒检测细胞活性, 流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot 分析JAK2、p-STAT3（Y705）、p-STAT3（S727）的表达。结果：OGD/R 导致SH-SY5Y 细胞存活率显著降低（P<0.01）,凋亡率显著增加（P<0.01）。给予0.1、1、5、10 μg·L^-1 HNG 干预的 SH-SY5Y 细胞与未行HNG 干预的OGD/R 细胞相比,存活率更高（P<0.01）,凋亡明显减少（P<0.01）,1 μg·L^-1 HNG 干预组效果最好。与对照组比较,OGD/R 降低JAK2 和p-STAT3（Y705）蛋白水平（P<0.01）。给予HNG 干预的细胞表达JAK2（P<0.01）和p-STAT3（Y705）（P<0.01）蛋白水平增加。给予1、5 μg·L^-1 HNG 干预的细 胞表达JAK2（P<0.01）、p-STAT3（Y705）（P<0.01）和p-STAT3（S727）（P<0.05）蛋白水平有更显著的增加。给予 FLLL32 和HNG 干预的细胞无法增加细胞存活率。结论：HNG 通过激活JAK2/STAT3 信号通路抑制OGD/R 诱 导的细胞凋亡,有希望用于治疗脑梗死的药物。     

银杏二萜内酯葡胺注射液通过下调calpain信号通路抑制脑缺血神经细胞凋亡

研究银杏二萜内酯葡胺注射液(diterpene ginkgolides meglumine injection,DGMI)对缺氧缺糖/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用及其机制。采用试剂盒、Fluo-3 AM法、Western blot检测SH-SY5Y细胞氧糖剥离损伤4 h后,与药物一起复氧1 h细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量、caspase-3/7酶活力、细胞质中核小体含量、胞浆游离钙离子浓度以及calpain、cleaved caspase-12蛋白量的变化。结果显示DGMI能极显著降低OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞LDH的漏出量,抑制caspase-3/7酶活性,减少细胞核核小体的释放量,下调细胞内游离钙离子浓度、calpain和cleaved caspase-12蛋白量,抑制calpain凋亡信号通路保护神经细胞。DGMI对OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞内Ca²⁺/calpain/caspase-12/capase-3信号通路有关。     

H2S 在缺血再灌注损伤中神经细胞自噬发生机制中的作用研究

目的：利用siRNA 干扰技术干扰H2S 生成的关键酶胱硫醚β- 合成酶（cystathionine β-synthase,CBS）基因并构建细胞氧糖剥夺再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）模型,探讨OGD/R 和CBS 基因干扰后SH-SY5Y 细胞自噬和凋亡情况及相关信号通路变化。方法：构建OGD/R 模型,体外模拟缺血再灌注过程,根据氧糖剥夺和再灌注时间不同共设9 组,利用透射电镜观察各组细胞OGD/R 后细胞内自噬小体形成情况,根据透射电镜结果选取氧糖剥夺
4 h/ 再灌注24 h 作为后续实验的OGD/R 模型;脂质体转染法将针对CBS 基因的siRNA 转入SH-SY5Y 细胞内,同时构建OGD/R 模型,将细胞分为3 个组,分别为CBS 干扰组,OGD /R 组和CBS 干扰+OGD/R 组,各组均设相应对照。Real time PCR 和蛋白印迹法鉴定CBS 基因干扰效率,并检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1 和信号通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达水平,以及凋亡信号通路中NF-κBp65、COX-2 蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。结果：透射电镜观察细胞内自噬小体：除正常对照组和氧糖剥夺4 h/ 再灌注12 h 组未观察到自噬小体外,其余各组均在胞质内观察到了较多自噬小体。CBS 基因干扰效率达80%。CBS 干扰组自噬相关蛋白及相关信号通路蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平与阴性对照组比较均无统计学差异;OGD/R 组与正常对照组比较,OGD/R 组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 明显高于正常对照组, p-Akt/Akt 和p-mTOR/mTOR 均明显降低,NF-κBp65、COX-2 蛋白表达水平均高于正常对照组;CBS干扰+OGD/R 组与对照组比较,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR 均无显著差异。CBS 干扰组细胞凋亡率与阴性对照组比较无统计学差异;与正常对照组比较OGD/R 组细胞凋亡率明显高于正常对照组;CBS 干扰+OGD/R 组与阴性对照组比较,细胞凋亡率无显著差异。结论：OGD/R 能够明显诱导SH-SY5Y细胞发生自噬和凋亡,且可能与Akt/mTOR 及 NF-κBp65/COX-2 信号通路相关;CBS 基因干扰后对细胞自噬和凋亡均无明显影响。     

Protective effect of delta opioid peptide DPDPE on cultured rat cortical neurons against OGD-induced injury.

目的 研究δ阿片受体激动剂 DPDPE 对原代培养的大鼠皮层神经元缺氧无糖损伤(OGD)的保护作用并探讨其机制.方法 将大鼠皮层神经元分为4组,共24孔、每组6孔:正常氧浓度组;缺氧组;缺氧+DPDPE(终浓度为100nmol/L)预处理组;缺氧+DPDPE +Naltrindole(δ阿片受体拮抗剂,终浓度为1 μmol/L)预处理组.通过采用 LDH 观察 DPDPE 对于神经元缺氧无糖损伤的保护作用;用Western检测大鼠皮层神经元中 pERK、pp38、Bcl-2 和 Bax 等蛋白表达的变化.结果 (1) 与正常对照组相比,缺氧无糖损伤4h细胞上清液中LDH 水平明显升高(P<0.01),加不同浓度DPDPE预处理后LDH 水平明显降低(P<0.01); 与缺氧无糖组相比,DPDPE 预处理显著增加 pERK 的蛋白表达(P<0.05)且同时降低 pp38 的蛋白表达(P<0.05),该作用可部分的被 Naltrindole 所阻断;与缺氧无糖组相比,DPDPE 预处理显著增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)且同时降低凋亡蛋白Bax的表达(P<0.05).结论 DPDPE对于大鼠原代皮层神经元缺氧无糖(OGD)损伤具有明显的保护效果,其作用机制与增加pERK,降低pp38的蛋白表达,以及调节Bcl-2/Bax的表达有关.     

黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路对PC12 细胞OGD/R 损伤的保护机制研究

目的：探究黄芪甲苷（astragaloside IV,AS-IV）对大鼠嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma 12,PC12）细胞缺氧缺糖复供（oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R）损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/ 蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称Akt）及B 细胞淋巴瘤-2 蛋白（B-cell lymphoma-2,Bcl-2） PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的机制研究。方法：体外培养 PC12 细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组（OGD/R）,尼莫地平阳性对照组（5 μmol·L-1）和黄芪甲苷组（1.00、0.10、0.01 μmol·L-1）,除空白组外其余各组均建立体外PC12 细胞OGD/R 模型。CCK-8 试剂盒法检测PC12 细胞存活率;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342 和碘化丙啶（propidium iodide,PI） 双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot 检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 （cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）的蛋白表达情况。结果：黄芪甲苷提高PC12 细胞OGD/R 损伤的细胞存活率,降低LDH 漏出量和细胞凋亡。黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2 的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3 的表达。PI3K/Akt 通路的抑制剂LY2940002 能抑制黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞中凋亡相关蛋白的影响。结论：黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路有关。     

体外模拟脑缺血再灌注OGD/R模型的差异凝胶电泳分析

目的：通过体外模拟缺血-再灌注损伤（I/R）诱导细胞凋亡的氧糖剥离再灌注（OGD/R）模型的建立,应用蛋白质组学技术观察凋亡细胞蛋白质组的差异表达,进一步揭示神经元凋亡的发生机制。方法：选用人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞分为对照组和实验组,实验组给予OGD10h/R24h处理建立OGD/R诱导SH-SY5Y细胞凋亡模型,提取对照组和实验组细胞总蛋白,利用荧光染色双向差异凝胶电泳技术(2D-DIGE) 检测细胞蛋白质组的差异表达变化。结果：DeCyder软件分析2D-DIGE凝胶图像显示平均分离了（1 800±156）个蛋白质点;与对照组比较,实验组共有30个蛋白点的表达水平有显著变化（蛋白表达量上调或下调30％以上）,其中22个升高,8个降低,与同时间对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01) 。结论：应用双向差异凝胶电泳的蛋白质组学技术在OGD/R模型中发现有差异蛋白的表达。     

拓展利用病案资源 突出病案服务功能

从病案信息利用的范围及病案信息利用的管理两大方面阐述了病案在信息时代所处的地位及其利用价值,同时就拓展病案利用价值提出了一些建议。     

病案信息管理发展趋势

目的探索病案信息管理未来发展方向。方法将病案信息管理过程中所涉及的问题进行分析。结果病案信息管理在医疗、教学、科研、医院管理、医疗保险、法律等起着举足轻重的作用。结论病案信息管理发生显著的变化,向数字化、高智能化的电子病案方向发展。     

服务创新是提升病案质量的保证

病案服务创新是病案工作持续发展的根本动力。病案服务创新要做到服务观念创新,服务内容创新,服务方式创新,服务机制创新。服务创新,由被动服务向主动服务转变,由单一服务向全面服务转变,由一般服务向深层次服务转变,从而更好地为医院各项建设服务。     

强迫症的亚型探讨与疗效比较

目的：探讨认知行为心理治疗（CBT）在强迫症（OCD）患者各亚型治疗中的有效性和规律性。方法：本研究为临床对照研究。符合入组标准的强迫症患者按患者自愿原则分为两组,治疗观察3、6个月。疗效评定分别运用Yale-Brown强迫量表,自拟的自评好转程度量表和临床疗效评定。结果：认知行为心理治疗合并药物治疗组31例,临床有效率70.9%,其中治愈率1.8%。单纯药物治疗组24例,临床有效率33.3%。Yale-Brown强迫量表在6个月两组有显著性差异（P〈0.05）。其中强迫症亚型（怕脏型、反复检查型和反复担心型）的疗效比较,怕脏型在治疗3个月末两组间自评量表评分有显著性差异（P〈0.05）;反复担心型在治疗6个月末两组间Yale-Brown强迫量表总分有显著性差异（P〈0.05）;反复检查型两组间无统计学差异。结论：认知行为心理治疗合并药物治疗强迫症的疗效明显优于单纯药物治疗。强迫症的亚型在治疗中的有效性次序为：反复担心型〉怕脏型〉反复检查型。     

谈文学审美过程对医务人员自身素质的影响

文学是为满足人的审美需求而产生、存在和发展的。文学以其对美的寻求、揭示、建构和表现,丰富着人们的精神世界,彰显着自身存在的价值。正如席勒所说：＂审美是人性的完成＂。文学和医学是两种互补的认识方式,文学可以说是医学的原动力。文学审美过程是促使医务人员自我完善的过程,可以提高医务人员的综合素质;促进医务人员的医患伦理建构。     

罗格列酮在多囊卵巢综合征促排卵周期中的疗效探讨

目的:探讨罗格列酮(Rosiglitazone)对有胰岛素抵抗的多囊卵巢患者促排卵治疗的影响.方法:133例临床上有PCOS(多囊卵巢综合征)表现的不孕患者通过OGTT(口服葡萄糖耐量实验)、胰岛素及C肽释放实验,检出胰岛素抵抗(IR)患者81例.将81例病人随机分为A、B、C三组,分别给予促排卵药、罗格列酮、罗格列酮与促排卵药合用,共治疗2个月经周期,比较三组用药前后及用药后三组间的Homa IR(胰岛素抵抗指数)、FFA(游离脂肪酸)、TNFα(肿瘤坏死因子)和排卵率的变化.结果:用罗格列酮治疗前后患者的Homa IR指数、血清FFA和TNFα明显下降(P＜0.05).罗格列酮与促排卵药合用排卵率明显优于单用促排卵药(P＜0.05)和单用罗格列酮(P＜0.005).结论:罗格列酮能有效地改善胰岛素抵抗,提高促排卵成功率.     

探索病案质检工作的新模式

目的通过探讨病案质检工作的新思路、新方法,以达到提高病案质量,从而提高医疗质量的目的。方法运用现代医院管理的理论知识,结合病案质检的实际将理论知识融于实践之中。结果改进了病案质检的工作模式,由单一质检转变为多元化工作模式。结论环节病历质量、终末病历质量都得到了很大提高,同时强化了临床的质量意识和自我保护意识。     

常见脉象寸口部光电血管容积图的参数分析

为了研究不同脉象与血管容积图的关系,应用“BC－4型”定量式光电血管容积仪对432例受检者（包括正常脉象和10种常见病脉）进行寸口脉光电血管容积图检测,同步进行血流动力学参数分析。结果表明,与正常脉象比较,种种病脉在寸口脉血管容积图上均显示出各种脉象的参数特征,而血流动力学指标的变化反映了不同脉象形成的心血管病理生理特点。提示寸口部光电血管容积图参数为各类病理脉象的临床诊断提供了客观化依据。     

参加死亡病例讨论对死亡病案质控的意义

目的提高死亡病案质量、医疗质量和医护人员的法律意识。方法质量控制等有关人员参加死亡病例讨论,找出问题缺陷、总结经验、吸取教训。结果发现病案首页项目填写错误或漏填较普遍,病历不能及时完成,讨论流于形式,医师自我保护意识差。结论质控人员参加死亡讨论,有利于医护合作、医药配合、科室协作、提高病历质量及医疗质量。     

趋势季节模型在住院人数预测中的应用

目的 通过我院2002年～2006年来各季度的实际住院量变化趋势,预测2007年我院各季的住院人数.方法 运用移动平均趋势剔除法配合最小二乘法建立线性模型,并利用PEMS3.1统计软件包对模型进行回归分析.结果 趋势季节回归模型为Yc=2530.6 250.35X,方差分析结果P＜0.05,显示该方程呈直线相关关系,预测值＝季平均预测值×各季的季节比率.结论 通过预测住院人数为医院制定工作计划和领导决策提供可靠的依据,实现卫生资源的优化配置.