人源乙型肝炎病毒表面抗原抗体Fab片段与IFN-α融合蛋白表达载体的筛选

目的探讨如何在无药物抗性改变;无转化细胞生物指示系统改变的情况下准确快速地筛选出人源抗乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白原核表达载体。方法在 ＩＦＮ－α基因两端加上 ＸｂａⅠ酶切位点后用 ＰＣＲ法扩增,再重组入以抗体库技术筛选得到的人源抗ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体的相应位点上,构建 ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。取 ＰＣＲ扩增得到的 ＩＦＮ－α ＤＮＡ,用地高辛标记系统进行化学标记,制备 ＩＦＮ－α ＤＮＡ探针。取构建的融合蛋白表达载体转化受体菌．增菌后,以溶菌酶加煮沸法批量制备载体 ＤＮＡ,点样于硝酸纤维膜上, ８０℃烤２ｈ,预杂交液 ４２℃,２ｈ膜预杂交,标记探针 ４２℃, ４ｈ杂交,洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色。同时设单纯人源抗 ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体为阴性对照, ＩＦＮ－α质粒为阳性对照。阳性克隆再以 ＳａｃＩ和 ＸｂａⅠ酶切,琼脂糖电泳鉴定。结果４０株转化细胞中筛选出７个阳性克隆,酶切鉴定显示两者符合率达１００％,成功地筛选出了ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载体。结论人源ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段／ＩＦＮ－α融合蛋白表达载     

人抗乙肝表面抗原抗体Fab片段/αA-干扰素融合蛋白原核表达载体的构建

目的：为深入开展乙型肝炎的生物导向治疗，我们构建了人抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）融合蛋白原核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－α。方法：采用ＰＣＲ方法，将ＩＦＮ－αＡＤＮＡ两端引入酶切位点及５端引入－Ｌｉｎｋｅｒ，重组入抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ表达载体ｐＨＳ相应酶切位点，酶切鉴定并筛选出阳性克隆ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ，并对插入基因片段测序。结果：重组阳性克隆经酶切鉴定证实重组片段已正确插入载体相应酶位点，片段与ＰＣＲ扩增片段大小相同，硷基序列正确。结论：ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ的成功构建，为人抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素融合蛋白在大肠杆菌的表达打下基础     

人源乙型肝炎病毒表面抗原抗体Fab片段与IFN—α融合蛋？…

目的 探讨如何在无药物抗性改变,无转化细胞生物批示系统改变的情况下准确快速地筛选出人源抗乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段ＩＦＮ－μ融合蛋白塬核表达载体。方法 在ＩＦＮ－α基因两端加上Ｘｂａ１酶切位点后用ＰＣ放地重组人以抗体库技术筛选得到的人源抗ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ片段表达载体的相应相应们点上,构建ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇ－Ｆａｂ＝ＴＦＮ－α融合蛋白表达载体。取ＰＣＲ扩增到的ＩＦＮ－αＤ     

人抗惭肝表面抗原抗体Fab片段／αA—干扰素融合蛋白原核表达 …

目的：为深入开展乙型肝炎的生物导向治疗。我们构建了人抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）融合蛋白核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－α，方法：采用ＰＣＲ方法，将ＩＦＮ－αＡＤＮＡ两端引入酶切位点及５；引入－Ｌｉｎｋｅｒ，重组入抗ＨＢｓＡＧ抗体Ｆａｂ表达载体ＰＨＳ相应酶切位点，酶切鉴定并筛选出阳性克隆ＰＨＳ／ＩＦＮ－α，并对插入基因片段测序。结果：重组阳性克隆经酶切鉴定证实     

α1b—干扰素治疗慢性乙型肝炎与慢性丙型肝炎疗效比较

目的研究国产干扰素（α１ｂ－ＩＦＮ）对慢性乙型肝炎（ＣＢＨ）与慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）疗效差异方法对４６例ＣＢＨ与３９例ＣＨＣ患者分别采取用α１ｂ－ＩＦＮ３００万Ｕ隔日一次，疗程３ｍｏ，同时设立对照组ＣＢＨ５７例，ＣＨＣ３３例，于治疗前、治疗后８ｗｋ、治疗结束及治疗后０．５ａ采血清测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇＨＢＶ、ＤＮＡ、ＨＣＶ、ＲＮＡ并动态观察丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）变化结果对ＣＢＨ及ＣＨＣ的ＡＬＴ复常效果皆优于对照组，并且ＩＦＮ对ＣＨＣ疗效优于ＣＢＨ（Ｐ＜０．０５），ＩＦＮ对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阴转疗效皆不明显（Ｐ＜０．０５），但对ＨＢＶ．ＤＮＡ阴转疗效明显（Ｐ＜０．０５），对ＨＣＶ．ＲＮＡ阴转有明显疗效（Ｐ＜０．０１），并且ＩＦＮ对ＨＣＶ．ＲＮＡ阴转疗效明显优于ＨＢＶ．ＤＮＡ（Ｐ＜０．０５）结论提示ＩＦＮ对ＣＨＣ疗效优于ＣＢＨ。     

rIL_（－2）对慢性HBV感染者NK细胞功能调节及影响因素

本文采用４小时、１６小时微量释放细胞毒法监测慢性ＨＢＶ感染者ＮＫ细胞对Ｋ５６２细胞及ＰＬＣ／ＰＲＦ／５细胞杀伤活性及某些影响因素。实验提示慢性活动型肝炎（ＣＡＨ）、慢性无症状携带者（ＡＳＣ）ＮＫ细胞杀伤活性均高于健康人。ｒＩＬ－２可明显增加健康人ＮＫ细胞活性，但对ＨＢＶ感染者ＮＫ细胞增强作用不明显。ＨＢｓＡｇ、ｒＨＢｅＡｇ和ｒＨＢｃＡｇ均可明显抑制ＮＫ细胞活性，并有剂量依赖性，加入外源性ｒＩＬ－２仍不能纠正。提示ＨＢｓＡｇ、ｒＨＢｅＡｇ和ｒＨＢｃＡｇ可通过某种机制阻抑ｒＩＬ－２与ＮＫ细胞结合发挥作用。     

Th1／Th2细胞在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的 了解慢性ＨＢＶ感染者外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ的表达情况,以测定Ｔｈ０／ＴＨ１／Ｔｈ２细胞的百分数,探明Ｔｈ、、Ｔｈ２细胞在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 常规分离ＰＢＭＣ,在ＰＭＡ,ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ、莫能菌素的刺激下,采用工细胞检测（ＦＡＣＳ）对慢性ＨＢＶ感染者ＰＢＭＣ中ＣＤ４＾＋Ｔ细胞内ＩＬ－４和ＩＦＮ－γ表达进行分析。结果 正常对照组,２．３％～     

胎儿LAK／IL—2治疗长期HBV无症状携带者的临床研究

应用儿脾ＬＡＫ细胞，配合ｒＩＬ－２和ｒＩＦＮ－γ治疗８例长期ＨＢＶ无症状携带者，结果表明：有７５％（６／８）的患者ＨＢｅＡｇ转阴，其中有２５％（２／８）的患者ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ均转阴，治疗后ＣＤ＾＋８Ｔ细胞稍有增高，Ｔａｃ抗原比治疗前和对照组均显著增高，血ｓＩＬ－２Ｒ，ＩＬ－８和ＮＴＦ－α治疗后均显著增高。     

干扰素抗体与干扰素治疗病毒性肝炎疗效的关系

对４１例慢性病毒性肝炎患者在ＩＦＮ的治疗前、中、后采用ＥＬＩＳＡ法检测抗ＩＦＮ－ＨＢＶ－Ｍ,用ＰＣＲ法检测ＨＢＶ ＤＮＡ,ＨＣＶ ＲＮＡ,结果,乙型肝炎抗ＩＮＦ治后转阳性及治前后均阴性组,ＨＢｅＡｇ阴极转及ＨＢＶ ＤＮＡ的阴转均略优于治疗前抗ＩＦＮ阳性组,但无显著差异;丙型肝炎,ＡＬＴ复常、ＨＣＶ ＲＮＡ的阴转,汉前后均阴性组好于治转为阳性且又好于治前阳性组。７８．３％的患者抗ＩＦＮ出现高峰在２－     

α－IFN、Ribavirin联合抗HBV对血清复制指标影响的研究

采用α－干扰素（α－ＩＦＮ）、病毒唑联合治疗慢性ＨＢＶ感染病人６３例，以α－ＩＦＮ治疗慢性乙肝病人５８例，对比观察联合用药对病人血清ＨＢｅＡｇ、Ｐｒｅ－Ｓ２、ＰＨＳＡ－Ｒ及ＤＮＡ－Ｐ复制指标的抑制效应．３个月疗程结束后，抑制效应两组分别为ＨＢｅＡｇ４９．２％和３４．５％；Ｐｒｅ－Ｓ２５２．７％和３８．８％；ＰＨＳＡ－Ｒ４４．２％和３７．７％；ＤＮＡ－Ｐ５７．９％和４１．９％；高复制型５２．６％和４０％，除ＰＨＳＡＲ外，两组比较差异有显著性，联合用药组优于α－ＩＦＮ组。     

α—IFN,Ribavirin联合抗HBV对血清复制指标影响的研究

采用α－干扰素（α－ＩＦＮ），病毒唑联合治疗慢性ＨＢＶ感染病人６３例，以α－ＩＦＮ治疗慢性乙肝病人５８例，对比观察联合用药对病人血清ＨＢｅＡｇ，Ｐｒｅ－Ｓ２，ＰＨＳＡ－Ｒ及ＤＮＡ－Ｐ复制指标的抑制效应。３个月疗程结束后，抑制效应两组分别为ＨＢｅＡｇ４９．２％和３４．５％，Ｐｒｅ－Ｓ２，５２．７％和３８．８％，ＰＨＳＡ－Ｒ４４．２％和３７．７％，ＤＮＡ－Ｐ５７．９％和４１．９％，高复制型５２．６％和     

人白细胞介素2基因转移表达及抗乙型肝炎病毒和诱导LAK细胞活性的研究

为了探讨白细胞介素（ＩＬ）－２转基因表达抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用，应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＳｖ（Ｘ）－包装细胞系ＰＡ３１７基因转移系统，研究了人ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移和表达，以及抗ＨＢＶ和诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的作用。所构建的人ＩＬ－２重组表达载体ｐＺＩＰｈｕＩＬ－２，以ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀技术转染ＰＡ３１７细胞，筛选到Ｇ４１８抗性克隆，分泌假病毒颗粒达１０６ＣＦＵ／ｍｌ。以假病毒颗粒感染２．２．１５细胞系及正常人外周血单个核细胞，分泌ＩＬ－２水平可达６ＩＵ／ｍｌ，明显抑制２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ的分泌表达，与１００ＩＵ／ｍｌ重组的ＩＬ－２一样可诱导出相似的ＬＡＫ细胞活性。而不含ＩＬ－２ｃＤＮＡ的ｐＺＩＰＳＶ（Ｘ）的假病毒颗粒则无此作用。提示逆转录病毒载体。包装细胞系可以成功地实现人ＩＬ－２ｃＤＮＡ的转移和低水平的分泌和表达，并可明显抑制２．２．１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ及诱导ＬＡＫ细胞活性。     

丙型肝炎病人PBMC对HCV合成肽增殖反应与干扰素疗效的关系

目的：探讨丙型肝炎病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异性抗原增殖反应与干扰素（ＩＦＮ）疗效关系。方法：用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究１１例经ＩＦＮ治疗与１３例未经ＩＦＮ治疗病人ＰＢＭＣ的增殖反应以及ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转和丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）复常指标。结果：１１例经ＩＦＮ治疗与１３例未经ＩＦＮ治疗病人ＰＢＭＣ对ＨＣＶ合成肽ＣＰ９、ＮＳ４增殖反应相比，前者明显增强，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５），且血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转和ＡＬＴ复常分别达到３６．３６％（４／１１）和５５．５５％（５／９），明显高于未经ＩＦＮ治疗组。结论：ＩＦＮ治疗丙型肝炎可提高ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原的增殖反应     

IFN-α治疗小儿乙型肝炎病毒相关性肾炎(附12例报告)

目的：观察α－干扰素（ＩＦＮ－α）对１２例小儿乙型肝炎病毒相关性肾炎的治疗效果。方法：先给予强的松１ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）治疗２周后突然停药,此时开始应用ＩＦＮ－α１００万单位,隔天１次肌注,疗程共６个月。观察患儿血ＨＢＶ抗原的转变,尿蛋白及血生化的变化。结果：１０例患儿中的４例ＨＢｅＡｇ转阴,１２例患儿中的３例ＨＢｓＡｇ转阴,５例尿蛋白转阴,３例明显好转,总有效率为６６．７％（８／１２）。尤其是对病理类型为膜性肾病（ＭＮ）及系膜增殖性肾小球肾炎（ＭｓＰＧＮ）疗效较好,而对膜增殖性肾小球肾炎（ＭＰＧＮ）者则效果较差。结论：该剂量疗程的ＩＦＮ－α对小儿乙肝病毒相关性肾炎的治疗具有一定效果,适合我国国情,值得推广应用     

生物免疫刺激剂对大鼠外周血淋巴细胞和肝大颗粒淋巴细胞生物活性的影响

正常大鼠在体内应用干扰素（ＩＦＮα—２ｂ），卡介苗（ＢＣＧ）或二者联用后，检测外周血淋巴细胞转化率和酸性非特异性酯酶（ＡＮＡＥ）阳性淋巴细胞数量的变化。同时从正常大鼠肝内分离出大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ），体外分别受ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ或二者联合作用后，以３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验测定生物免疫刺激剂（ＢＩＳ）对ＬＧＬ抗肝癌细胞作用的影响。结果：（１）单用ＩＦＮα－２ｂ对大鼠淋巴细胞母细胞化有一定的抑制作用，抑制率为２１．７％；单用ＢＣＧ使大鼠淋巴细胞转化率提高了２７．９％，二者联用则可消除ＩＦＮα－２ｂ对大鼠淋巴细胞母细胞化的抑制作用。（２）ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ或二者联用均使大鼠外周血ＡＮＡＥ阳性淋巴细胞显著增多，其中ＢＣＧ作用强于ＩＦＮα－２ｂ（Ｐ＜０．０１），以ＩＦＮα－２ｂ和ＢＣＧ二者联用的效果最强。（３）ＩＦＮα－２ｂ、ＢＣＧ均可显著增强大鼠肝ＬＧＬ的抑肝癌细胞增殖作用，ＢＣＧ作用较ＩＦＮα－２ｂ强，二者分别使肝ＬＧＬ抑肝癌细胞增殖作用提高了５０％和２２．４％，ＩＦＮα－２ｂ和ＢＣＧ协同作用的效果最强，使肝ＬＧＬ的抑肝癌细胞作用提高了６３％。实验结果为肝癌免疫治疗的最佳选择提供了充分的科学依据。     

慢性丙型肝炎患者（2＇，5＇）寡腺苷酸合成酶的活性测定

目的：了解慢性丙型肝炎患者（２＇，５＇）寡腺苷酸合成酶（２－５ＡＳ）活性在干扰素治疗过程中的动态变化及意义。方法：ＰＥＩ－ＣＥＬＬＵＬＯＳＥ薄板层析法。结果：（１）慢性丙型肝炎患者２－５ＡＳ基础水平比正常人显著升高（Ｐ＜０．０１）；（２）ＩＦＮα治疗结束后ＨＣＶＲＮＡ持续阳性的病人２－５ＡＳ基础水平比ＨＣＶＲＮＡ转阴的病人要高（Ｐ＜０．０５）；（３）ＩＦＮα治疗效果较好，ＨＣＶＲＮＡ转阴的病人２－５ＡＳ水平在用药后２４ｈ比ＨＣＶＲＮＡ未转阴的病人上升得更高（Ｐ＜０．０１）；（４）用药后１个月２～５ＡＳ水平与ＩＦＮα治疗效果无显著相关性（Ｐ＞０．０５）。结论：２－５ＡＳ可以作为评价干扰素治疗效果的１个机体反应指标。     

THE ROLE OF RECOMBINANT HUMAN FUSION PROTEIN IL－6／IL－2（CH925） IN HEPADNA VIRUS INFECTION TREATMENT

ＴＨＥＲＯＬＥＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＨＵＭＡＮＦＵＳＩＯＮＰＲＯＴＥＩＮＩＬ－６／ＩＬ－２（ＣＨ９２５）ＩＮＨＥＰＡＤＮＡＶＩＲＵＳＩＮＦＥＣＴＩＯＮＴＲＥＡＴＭＥＮＴＭｉＺｈｉｂａｏ（米志宝），ＺｈａｏＣｈｕｎｈｕａ（赵春华），ＺｈａｎｇＸｉｔ...     

IFNα2b诱导MxA蛋白的表达及其抗病毒活性研究

研究ＭｘＡ抗病毒蛋白的表达及其活性。方法用ＩＦＮα２ｂ处理ＷＩ－３８细胞或人外周血单核细胞１２ｈ或２４ｈ,并用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法或或ＦＡＣＳ法分别进行了ＭｘＡ蛋白表达的检测及微量细胞病变抑制法对重组的ＭｘＡ和ＩＦＮα２ｂ进行抗病毒效应实验。结果（１）低浓度ＩＦＮα２ｂ（〉１１Ｕ／ｍｌ）可诱导ＷＩ－３８细胞达ＭｘＡ;（２）１０ｎｇ／ｍｌＭｘＡ可以抵抗２０ＴＣＩＤ５０的ＨＳＶ－１、Ｐｏｌｉｏ。     

细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原MG7Ag表达的调节

探讨细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达的调节作用。用基因重组干扰素α（ＩＦＮ－α），干扰素γ（ＩＦＮ－γ），白细胞介素２（ＩＬ－２）和肿瘤坏死因子γ（ＴＮＦ－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达。ＩＦＮ－α和ＩＦＮ－γ对胃癌细胞ＭＧ７Ａｇ有促表达作用。ＩＬ－２对三株细胞ＭＧ７Ａｇ无调节作用；ＴＦＮ－α对细胞ＭＧ７Ａｇ表达调节是随     

基因工程干扰素（IFNα2a）的抗疱疹病毒效应

采用微量细胞病变抑制法在Ｖｅｒｏ细胞上研究了ＩＦＮα２ａ抗ＨＳＶ－１型和ＨＳＶ－Ⅱ型疱疹病毒的作用。结果表明：万兴ＩＦＮα２ａ和罗扰素ＩＦＮαａ在Ｖｅｒｏ细胞上５００ＩＵ／ｍｌ可以抗１０００ＴＣＩＤ５０，５０ＩＵ／ｍｌ可以抗１００ＴＣＩＤ５０，５ＩＵ／ｍｌ可以抗０１ＴＣＩＤ５０的ＨＳＶ－１型和ＨＳＶ－Ⅱ型疱疹病毒感染细胞，提示万兴ＩＦＮα２ａ和罗扰素均显示明显的抗病毒效应，且两者无明显差别。