益肾健脾泻浊中药对慢性肾脏病妊娠大鼠肾脏NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路及细胞焦亡的影响＊

目的 观察益肾健脾泻浊中药对慢性肾脏病妊娠大鼠肾脏NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路及细胞焦亡的影响。方法 将雌性Wistar大鼠随机分为6组，分别为对照组（Sham）、对照组 + 妊娠组（SP）、单侧输尿管结扎组（UUO）、UUO + 妊娠组（UP）、UUO + 妊娠 + 益肾健脾泻浊中药组（TCM）、UUO + 妊娠 + 依普利酮组（EPL）。UUO各组采用结扎单侧输尿管的方法复制慢性肾病模型，治疗组分别给予依普利酮100 mg?（kg?天）^-1和益肾健脾泻浊方3.11 g?（kg?天）^-1治疗。8周后妊娠各组大鼠按动情周期与雄鼠合笼，妊娠第19天处死母鼠。检测各组肾功能，醛固酮含量，采用SABC法及Western blot法检测核因子κB（Nuclear factor-kappa B，NF-κB）、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3 NOD［nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3］、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白1［Caspase-1］、白介素1β（Interleukine-1 beta，IL-1β）的表达，TUNEL法检测肾细胞DNA损伤情况。结果 与UUO组比较，UP组血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）和24 h尿蛋白及醛固酮含量较Sham组显著升高（P < 0.05），治疗后，两给药组Scr、BUN、24 h尿蛋白、醛固酮显著降低（P < 0.05）。与Sham组比较，SP组大鼠肾组织NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达明显升高（P < 0.05），TUNEL阳性细胞少量增加（P < 0.05）。NLRP3炎症小体主要表达于浸润巨噬细胞及肾小管上皮细胞；Caspase-1和IL-1β主要表达于肾小管上皮细胞胞浆；TUNEL阳性细胞主要见于远端小管上皮细胞。与UUO组比较，UP组大鼠肾组织NF-κB、NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β指标表达也明显升高（P < 0.05），TUNEL阳性细胞明显增多（P < 0.05）。与UP组比较，EPL、TCM组大鼠肾组织上述指标表达明显降低（P < 0.05），TUNEL阳性细胞明显减少（P < 0.05）。两个给药组间各项指标无明显差异。结论 益肾健脾泻浊方及依普利酮可缓解慢性肾病妊娠大鼠肾脏炎症损伤，下调肾脏NLRP3炎症小体信号通路分子表达，从而抑制细胞焦亡，减轻肾脏炎症损伤。     

颞颌关节功能紊乱的He垫式义齿治疗

目的：观察He垫式义齿在老年牙列缺损伴He磨耗引起TMD的修复效果。方法：87例TMD病例，男54例，女33例，年龄58—75岁。面下1／3变短，深覆He且伴有TMD症状，经升高咬合后采用He垫式义齿修复，并对治疗前后关节间隙变化进行统计学分析。结果：用He垫式义齿修复能使MJ，He，肌肉协调一致，治疗TMD效果好。结论：部分牙列缺损伴有重度He磨耗的TMD患者，He垫式义齿修复是一种有效的治疗方法。     

甘温除大热治验

李×,女,36岁,工人,一九七九年三月二日就诊。自述因其爱人患病卒死,忧思劳倦,一年来连续发热。体温在37—39℃之间,偶可高达40℃。午前热轻,午后热重。动     

宫颈癌中HPV16 E5基因的变异与病毒物理状态的研究

目的研究HPV16DNA在宫颈癌组织中的物理状态及其与E5转化基因的变异的关系。方法用斑点杂交方法确定HPV16阳性的宫颈癌标本,采用Southern印记杂交技术检测HPV16DNA在宫颈癌组织中的物理状态,并结合E5基因的扩增及序列测定来综合探求HPV16基因组在宿主细胞中的物理状态及其与E5片段变异的关系。结果60例宫颈癌组织中HPV16阳性率为58%(35/60);其中有22%(8/35)的HPV16DNA是以游离状态存在于宿主细胞内。在HPV16以游离型存在的宫颈癌标本中,仅有1例(1/8)发生了变异。结论不同病理分期的宫颈癌组织HPV16的物理状态无明显差异。在游离型HPV16致癌机制中,E5的变异似乎不占主导地位。所得结果为揭示HPV16致宫颈癌的分子机制尤其是为E5在游离型HPV16致癌机制提供了新资料。     

RNA干扰抑制HPV16E6基因的表达对HPV16阳性宫颈癌细胞中基因表达谱的影响

目的:探讨RNAi抑制E6基因的表达对宫颈癌细胞基因表达谱的影响.方法:利用脂质体将已验证有效的表达针对E6基因小发卡RNA(shRNA)的重组质粒转染到宫颈癌细胞CaSKi中,提取宫颈癌细胞总RNA并利用Agilent Human 1A寡核苷酸表达芯片检测RNAi后CaSKi细胞基因表达谱的变化,最后实时PCR检测CDKN2B(p15)和MKI67来验证芯片分析结果.结果:与CaSKi/PSN相比,共有2 765个基因表达有明显差异,其中有2 709个上凋基因(包括代谢相关基因、肿瘤抑制基因、信号转导相关基因、凋亡基因等)和56个下调基因(包括原癌基因、DNA结合和转录基因、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期和发育相关基因等).实时PCR结果表明CDKN2B(p15)和MKI67的变化与基因芯片分析结果一致.结论:联合应用RNAi和基因芯片分析技术可以为研究HPV16 E6与宿主细胞相互作用分子机制提够更丰富的资料和信息,并提供新的研究策略和途径.     

特异性siRNA抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6基因的表达

目的：研究RNAi技术抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6癌基因的表达以及对细胞生物学特性的影响。方法：构建真核细胞表达特异性shRNA的pGENESIL-1/E6（PS6）重组质粒,脂质体转染细胞后用半定量RT-PCR技术检测CaSKi细胞中E6mRNA水平的变化,然后用western blotting检测RNA干扰前后p53和p21蛋白的表达来验证RNAi效应。用透射电子显微镜观察CaSKi/PS6细胞形态变化;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,最后利用细胞计数和裸鼠成瘤实验测定CaSKi/PS6细胞增殖能力。结果：成功构建了真核细胞表达特异性siRNA的PS6重组质粒;在RNA干扰24、48和72小时后CaSKi/PS6细胞中E6mRNA分别下降了21.50%、52.60%和65.60%;CaSKi/PS6细胞出现凋亡的特征性改变;RNA干扰24h、48h和72h后CaSKi/PS6细胞的凋亡率分别为27.94%、31.95%和56.63%,细胞生长周期停滞于S期。结论：应用RNA干扰技术能有效地、特异地抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6基因的表达,为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗和干预性预防提供了新的方法。     

激光实时全息法测量前磨牙受力研究

目的　探讨前磨牙在咀嚼功能作用下的受力状态。方法　按照天然前磨牙尖的大小 ,放大 10倍 ,测试的模型用甲基丙烯甲脂 ( 0号造牙粉 )翻制而成。把测试的模型放在激光实时测量系统上进行测量。结果　在前磨牙牙尖部位及牙颈部位有明显的应力集中。牙尖部位受力较大 ,牙颈部位次之。折裂大多从两牙尖的正中裂开 ,折裂方式与临床观察相吻合。并对此进行了相应的分析。结论　当前磨牙和磨耗成两个牙尖的磨牙时 ,功能咀嚼容易折裂。     

育龄男性孕前精液检测分析研究

目的了解不同年龄段育龄男性精液质量及在男性不育诊断中的重要性。方法检测分析我院泌尿外科门诊402例育龄男性孕前精液,将其分为20～30岁和31～40岁两组。观察两组精液颜色、粘稠度、测定pH值及体积检测后,用精子质量分析仪检测精子的密度、活率及活力,检测结果进行统计学分析。结果经统计学分析,人工检测项两组结果除pH值外,其余检测项结果正常百分率均在60%以上,其中外观颜色正常高达98.51%～98.67%。仪器检测项两组精子密度正常百分率高达79.3%～80.57%,其中精子密度在50×106～100×106/ml所占百分率最高,但活率和活力均较低,活率正常百分率为31.25%～35.80%,活力a级为37.5%～39.53%,a级+b级为31.25%～31.39%。育龄男性精液人工及仪器检测项正常百分率分别为18.25%和37.3%,人工及仪器检测项均正常者仅占6.72%,除外pH值小于7.2外,人工与仪器检测项均正常者明显增高,可达24.00%。结论 pH值降低可能是导致长时间不育的重要原因之一。育龄男性孕前精液检测分析可为临床提供不孕不育实验室诊断依据。     

组织芯片的制备技术

1998年Ｋｏｎｏｎｅｎ等〔1〕在Ｎａｔｕｒｅ《自然》杂志上发表了“组织芯片在肿瘤分子高通量分析中的应用” ,给病理学及生物分析技术开辟了新的领域。组织芯片 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙ ,ＴＭＡ)是将多个微小组织片汇集在一张固相载体上所形成的组织微阵列生物芯片 ,简称组织芯片〔1 ,2〕。ＴＭＡ克服了传统病理学技术步骤繁琐、试验速度慢和效率低的缺点 ,具有小体积、多样本、大信息、可同时分析数百种组织样品的优点。ＴＭＡ可根据实验要求和目的 ,设计出不同的排列组合 ,在疾病的分子诊断、流行病学调查、个体化治疗、预后…