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目的:探讨RNAi抑制E6基因的表达对宫颈癌细胞基因表达谱的影响.方法:利用脂质体将已验证有效的表达针对E6基因小发卡RNA(shRNA)的重组质粒转染到宫颈癌细胞CaSKi中,提取宫颈癌细胞总RNA并利用Agilent Human 1A寡核苷酸表达芯片检测RNAi后CaSKi细胞基因表达谱的变化,最后实时PCR检测CDKN2B(p15)和MKI67来验证芯片分析结果.结果:与CaSKi/PSN相比,共有2 765个基因表达有明显差异,其中有2 709个上凋基因(包括代谢相关基因、肿瘤抑制基因、信号转导相关基因、凋亡基因等)和56个下调基因(包括原癌基因、DNA结合和转录基因、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期和发育相关基因等).实时PCR结果表明CDKN2B(p15)和MKI67的变化与基因芯片分析结果一致.结论:联合应用RNAi和基因芯片分析技术可以为研究HPV16 E6与宿主细胞相互作用分子机制提够更丰富的资料和信息,并提供新的研究策略和途径. 相似文献
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目的 观察益肾健脾泻浊中药对慢性肾脏病妊娠大鼠肾脏NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路及细胞焦亡的影响。方法 将雌性Wistar大鼠随机分为6组,分别为对照组(Sham)、对照组 + 妊娠组(SP)、单侧输尿管结扎组(UUO)、UUO + 妊娠组(UP)、UUO + 妊娠 + 益肾健脾泻浊中药组(TCM)、UUO + 妊娠 + 依普利酮组(EPL)。UUO各组采用结扎单侧输尿管的方法复制慢性肾病模型,治疗组分别给予依普利酮100 mg?(kg?天)-1和益肾健脾泻浊方3.11 g?(kg?天)-1治疗。8周后妊娠各组大鼠按动情周期与雄鼠合笼,妊娠第19天处死母鼠。检测各组肾功能,醛固酮含量,采用SABC法及Western blot法检测核因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3 NOD[nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白1[Caspase-1]、白介素1β(Interleukine-1 beta,IL-1β)的表达,TUNEL法检测肾细胞DNA损伤情况。结果 与UUO组比较,UP组血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白及醛固酮含量较Sham组显著升高(P < 0.05),治疗后,两给药组Scr、BUN、24 h尿蛋白、醛固酮显著降低(P < 0.05)。与Sham组比较,SP组大鼠肾组织NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达明显升高(P < 0.05),TUNEL阳性细胞少量增加(P < 0.05)。NLRP3炎症小体主要表达于浸润巨噬细胞及肾小管上皮细胞;Caspase-1和IL-1β主要表达于肾小管上皮细胞胞浆;TUNEL阳性细胞主要见于远端小管上皮细胞。与UUO组比较,UP组大鼠肾组织NF-κB、NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β指标表达也明显升高(P < 0.05),TUNEL阳性细胞明显增多(P < 0.05)。与UP组比较,EPL、TCM组大鼠肾组织上述指标表达明显降低(P < 0.05),TUNEL阳性细胞明显减少(P < 0.05)。两个给药组间各项指标无明显差异。结论 益肾健脾泻浊方及依普利酮可缓解慢性肾病妊娠大鼠肾脏炎症损伤,下调肾脏NLRP3炎症小体信号通路分子表达,从而抑制细胞焦亡,减轻肾脏炎症损伤。 相似文献
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目的:观察He垫式义齿在老年牙列缺损伴He磨耗引起TMD的修复效果。方法:87例TMD病例,男54例,女33例,年龄58—75岁。面下1/3变短,深覆He且伴有TMD症状,经升高咬合后采用He垫式义齿修复,并对治疗前后关节间隙变化进行统计学分析。结果:用He垫式义齿修复能使MJ,He,肌肉协调一致,治疗TMD效果好。结论:部分牙列缺损伴有重度He磨耗的TMD患者,He垫式义齿修复是一种有效的治疗方法。 相似文献
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目的研究HPV16DNA在宫颈癌组织中的物理状态及其与E5转化基因的变异的关系。方法用斑点杂交方法确定HPV16阳性的宫颈癌标本,采用Southern印记杂交技术检测HPV16DNA在宫颈癌组织中的物理状态,并结合E5基因的扩增及序列测定来综合探求HPV16基因组在宿主细胞中的物理状态及其与E5片段变异的关系。结果60例宫颈癌组织中HPV16阳性率为58%(35/60);其中有22%(8/35)的HPV16DNA是以游离状态存在于宿主细胞内。在HPV16以游离型存在的宫颈癌标本中,仅有1例(1/8)发生了变异。结论不同病理分期的宫颈癌组织HPV16的物理状态无明显差异。在游离型HPV16致癌机制中,E5的变异似乎不占主导地位。所得结果为揭示HPV16致宫颈癌的分子机制尤其是为E5在游离型HPV16致癌机制提供了新资料。 相似文献
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不寐是以不易入睡、睡后易醒等为主要表现的一种病症,临床主要用安神方药治疗,却多有症状不见好转,使医者倍感无奈。李士懋教授熟谙经典,临证发挥,以脉为辨证中心,首分虚实,治疗不寐有其独到见解。 相似文献
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目的:研究RNAi技术抑制宫颈癌细胞CaSKi中HPV16 E6癌基因的表达以及对细胞生物学特性的影响。方法:构建真核细胞表达特异性shRNA的pGENESIL-1/E6(PS6)重组质粒,脂质体转染细胞后用半定量RT-PCR技术检测CaSKi细胞中E6mRNA水平的变化,然后用western blotting检测RNA干扰前后p53和p21蛋白的表达来验证RNAi效应。用透射电子显微镜观察CaSKi/PS6细胞形态变化;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,最后利用细胞计数和裸鼠成瘤实验测定CaSKi/PS6细胞增殖能力。结果:成功构建了真核细胞表达特异性siRNA的PS6重组质粒;在RNA干扰24、48和72小时后CaSKi/PS6细胞中E6mRNA分别下降了21.50%、52.60%和65.60%;CaSKi/PS6细胞出现凋亡的特征性改变;RNA干扰24h、48h和72h后CaSKi/PS6细胞的凋亡率分别为27.94%、31.95%和56.63%,细胞生长周期停滞于S期。结论:应用RNA干扰技术能有效地、特异地抑制宫颈癌细胞中HPV16 E6基因的表达,为RNA干扰应用于研究宫颈癌发病分子机制、临床治疗和干预性预防提供了新的方法。 相似文献