人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用

目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗(HPV16 L2E6E7)酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性(R2>0.99)和回收率(90%~110%);特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。     

重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用

目的 研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4-1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus-16,HPV16)蛋白疫苗(HPV16蛋白疫苗)免疫效果的影响.方法 对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点定向插入pET28a表达载体.将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达.用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构.用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响.同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响.结果 密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在.可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构.纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖.与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021).结论 r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力.     

膝上外侧骨皮瓣的临床应用

目的 介绍以膝上外侧动脉或膝最上外侧动脉为蒂的股骨远端皮瓣、骨瓣、骨皮瓣游离移植修复手、前臂远端皮肤软组织、骨及复合组织缺损的方法。方法 在３０侧红色乳胶灌注的下肢标本上，解剖观察了膝上外侧动脉及膝量上外侧动脉的起始、走行、分支、分布及吻合情况，在此基础上设计了以膝上外侧动脉或膝最上外侧动脉为蒂的股骨远端骨皮瓣。结果：应用膝上外侧动脉蒂骨皮瓣３例、皮瓣、例、骨瓣１例，膝最上外侧动脉蒂骨皮瓣１例、皮     

被动吸烟与脑卒中危险性关系Meta分析

无论在发达国家还是在发展中国家,被动吸烟已成为日益严重的公共卫生问题。有研究数据显示,美国大约有50%不吸烟者受二手烟的侵扰〔1〕,而在中国遭受二手烟危害的人群则高达5.4亿〔2〕。研究表明,被动吸烟者吸入的烟雾中含有大量的CO、尼古丁及各类致癌物,其危害可能会比主动吸烟更大〔3〕。近年来,国内外许多学者对被动吸烟与脑卒中危险性关系进行了研究,但研究结果存在差异。本研究通过收     

影响新生儿出生状况的多因素Logistic回归分析

目的：研究多因素对新生儿出生状况的影响。方法：采用回顾性队列研究方法对1405例产妇进行调查。在单因素X^2分析基础上进行非条件Logistic回归分析。结果：对新生儿出生状况产生显影响的因素共8项，总判对力为88．7％，其中孕时年龄越大，巨大儿，新生儿窒息发生机会越多。孕期体重增长过速，巨大儿发生机会增大，相反则低出生体重儿（LBW）、新生儿死亡机会增多，巨大儿母亲孕早期体重指数（BMI）显高于其他组群。低体重儿有早产倾向。巨大儿的剖宫产率显高于正常足月儿，职业为另一重要影响因素。按OR值大小，可将对新生儿出生状况产生影响的各因素按程度从强至弱依次排列为：孕早期BMI、孕期体重增长，孕时年龄，分娩方式，妊娠结局，职业特点，孕周及胎盘重量。结论：（1）孕时年龄偏大，孕早期BMI偏低而孕期体重过缓，或孕早期BMI偏高而孕期体重增长过速及职业特点，孕周，胎盘重量是影响新和儿出生状况的危险因素。（2）不同新生儿状况决定分娩方式与妊娠结局。     

治疗臂丛损伤移位神经的组织化学研究

研究治疗臂丛撕脱伤中移位神经的组织化学特征,为提高疗效提供依据。方法:取9例活体膈神经、副神经、颈丛神经、第4、第6肋间神经各1段;膈神经共12段,3段为新鲜尸体标本。样本运用Karnovsky-Roots的AchE染色法染色。通过图像分析系统测定样本中神经横截面积,神经纤维总数。结果:膈神经运动神经纤维达2685根,副神经为2142根,颈丛运动支为914根,第4、第6肋间神经(腋前线水平)分别为577和662根。膈神经在运动神经纤维数量和截面积上,均较副神经、颈丛运动支、肋间神经优越(P<0.01)。结论:在常用的移位神经中,膈神经是最为理想的移位神经。     

逆转录-荧光实时定量PCR法快速测定肠道病毒71型病毒滴度

目的 建立一种肠道病毒71型(EV71)病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对该检测法进行特异性、重复性验证.结果 所得检测方法可以用于EV71病毒滴度的快速检测.本测定法具有较好的线性,线性范围为lgTCID50 2.61～8.61,相关系数R2为0.9881;特异性和重复性较好,与TCID50法检测之间具有较好的一致性,变异系数(CV)＜5％.结论 所建立的逆转录-荧光实时定量PCR法线性范围广,具有较好的重复性和特异性,可用于EV71样品病毒滴度的快速测定.