RT-PCR-ELISA方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度的初步研究

目的 应用核酸扩增产物测定的固相杂交酶联显色法(RT-PCR-ELISA)检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法 应用RT-PCR-ELISA。将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物。与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色。读取吸光度(A值)。判断结果。应用此法检测了11批甲肝活疫苗滴度。并与常规细胞培养法(CCID50)比较。结果 本方法与细胞培养法的敏感性相仿，具有简便、快速、特异的优点。结论 RTPCR-ELISA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。     

西尼罗河病毒

西尼罗河病毒在1999年以前只在东半球发现过,主要分布在非洲、中东地区、欧亚大陆和澳洲。自1999年首次传入美国后短短几年内在北美迅速传播。且致病性和毒力增强了。本文就WNV的病原学、流行病学、致病性等方面的研究状况进行综述。     

逆转录-荧光实时定量PCR法快速测定肠道病毒71型病毒滴度

目的 建立一种肠道病毒71型(EV71)病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对该检测法进行特异性、重复性验证.结果 所得检测方法可以用于EV71病毒滴度的快速检测.本测定法具有较好的线性,线性范围为lgTCID50 2.61～8.61,相关系数R2为0.9881;特异性和重复性较好,与TCID50法检测之间具有较好的一致性,变异系数(CV)＜5％.结论 所建立的逆转录-荧光实时定量PCR法线性范围广,具有较好的重复性和特异性,可用于EV71样品病毒滴度的快速测定.     

Vero细胞肠道病毒71型灭活疫苗的纯化及鉴定

目的建立Vero细胞肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的纯化工艺。方法病毒收获液经离心澄清、福尔马林灭活和超滤浓缩后,采用Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析和Source 30Q离子交换层析2步层析法纯化EV71,进行各项检定及分析后除菌过滤。结果经纯化的疫苗各项纯化指标均符合中国药典2010年版的要求,杂蛋白去除率>99.9%;病毒纯化液在电镜下观察到典型的EV71病毒颗粒,经SDS-PAGE及Western blot分析,检测到与文献报道大小相符的EV71 VP1、VP2、VP3及特异性免疫反应;制备成疫苗后免疫大鼠能产生特异性中和抗体。结论本实验建立了Vero细胞的EV71灭活疫苗的纯化工艺,纯化后制备的EV71灭活疫苗具有较好的免疫原性。     

含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响

为提高乙型肝炎疫苗的免疫原性和机体对疫苗的免疫反应性,开发新型疫苗佐剂已成为国内外学者研究的热点。大量的研究表明,CpC基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂(CpC ODN)是很有前途的细胞免疫和体液免疫增强剂,与铝佐剂有协同作用,并可克服铝佐剂对细胞免疫的抑制;CpC ODN作为佐剂稳定性较好,对人体安全,尤其是与Al(OH)_3联合作为HBsAg疫苗佐剂时,双剂接种就可以获得很理想的免疫效果,并且价廉,有利于提高发展中国家的乙型肝炎疫苗接种率。本文着重对含有一个或数个非甲基化CpC ODN的研究进展作了综述。     

西尼罗河病毒

西尼罗河病毒在1999年以前只在东半球发现过,主要分布在非洲、中东地区、欧亚大陆和澳洲.自1999年首次传人美国后短短几年内在北美迅速传播.且致病性和毒力增强了.本文就WNV的病原学、流行病学、致病性等方面的研究状况进行综述.     

EID简讯

亚洲禽流感病毒H5N1的进化WHO全球流感状况检测网络的研究人员作此报道。2004年1月~2005年4月位于东亚的柬埔寨、泰国、越南、中国等9个国家高致病性H5N1亚型禽流感的大流行,不仅引起大量的家禽死亡,而且发生了89个实验室确诊的人禽流感病例。这些分离株对金刚烷胺有耐药性,但对神经氨酸酶(NA)很敏感。对其中H5血凝素(HA)基因的系统发育分析表明有2个不同的HA基因谱系,命名为分化枝1和2,且它们分布的地理区域互不重叠。分化枝1分离自越南、泰国和柬埔寨的禽流感患者和病鸟以及老挝和马来西亚的病鸟,而分化枝2仅分离自中国、印度尼西亚…     

RT-RCR产物固相杂交-酶联显色方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度

目的应用RT-PCR-EIJSA方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法应用固相杂交一酶联显色方法，将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物，与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色，读取光密度值(OD值)，判断结果。应用此法检测了11批甲肝活疫苗滴度。并与常规细胞培养法(CCID50)比较。结果证明本方法与细胞培养法(CCID50)的敏感性相仿，具有简便、快速、特异的优点。结论RT-PCR-EIJSA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。     

变异型克鲁病鼠淋巴网状内皮细胞肿瘤中含对蛋白酶有抗性的朊蛋白

美国马里兰州洛克菲尔红十字会的研究人员作此报道。他们首次发现，感染了变异型克鲁病（vDJD）致病因子但尚未发病的小鼠，其自发性淋巴网状内皮细胞肿瘤组织中广泛存在对蛋白酶有抗性的朊毒体（PrPres），而在未感染vCJD的对照组小鼠的相应组织中无PrPres。由此推测，感染了vCJD而尚无症状者的淋巴网状内皮细胞肿瘤组织中也可能积聚了大量的PrPres。     

肠道病毒71疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性研究

了解肠道病毒71(EV71)疫苗候选株H3-TY的遗传稳定性。方法选取EV71疫苗候选株H3-TY种子库中的6个子代病毒,提取RNA,对其VP1基因进行RT-PCR扩增、克隆、序列测定,然后对所获基因序列进行同源性分析并计算同源率。结果H3-TY的6个子代病毒VP1基因之间核苷酸同源性介于99.6％ ～99.8％,氨基...