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2.
3.
目的研制大鼠抗肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体(单抗),并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测(IFA)等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH,腹腔内注射免疫大鼠数次后,取有预期免疫应答的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6,体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体,用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度,并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系,分别有6株属于IgGl亚型,2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化,其对EV71的中和滴度为1:32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl,用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量,用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒,而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗,可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法,成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。 相似文献
4.
目的 研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4-1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus-16,HPV16)蛋白疫苗(HPV16蛋白疫苗)免疫效果的影响.方法 对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点定向插入pET28a表达载体.将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达.用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构.用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响.同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响.结果 密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在.可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构.纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖.与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021).结论 r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力. 相似文献
5.
目的 建立一种肠道病毒71型(EV71)病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对该检测法进行特异性、重复性验证.结果 所得检测方法可以用于EV71病毒滴度的快速检测.本测定法具有较好的线性,线性范围为lgTCID50 2.61~8.61,相关系数R2为0.9881;特异性和重复性较好,与TCID50法检测之间具有较好的一致性,变异系数(CV)<5%.结论 所建立的逆转录-荧光实时定量PCR法线性范围广,具有较好的重复性和特异性,可用于EV71样品病毒滴度的快速测定. 相似文献
6.
目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗(HPV16 L2E6E7)酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性(R2>0.99)和回收率(90%~110%);特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。 相似文献
7.
膝上外侧骨皮瓣的临床应用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 介绍以膝上外侧动脉或膝最上外侧动脉为蒂的股骨远端皮瓣、骨瓣、骨皮瓣游离移植修复手、前臂远端皮肤软组织、骨及复合组织缺损的方法。方法 在30侧红色乳胶灌注的下肢标本上,解剖观察了膝上外侧动脉及膝量上外侧动脉的起始、走行、分支、分布及吻合情况,在此基础上设计了以膝上外侧动脉或膝最上外侧动脉为蒂的股骨远端骨皮瓣。结果:应用膝上外侧动脉蒂骨皮瓣3例、皮瓣、例、骨瓣1例,膝最上外侧动脉蒂骨皮瓣1例、皮 相似文献
8.
9.
10.
治疗臂丛损伤移位神经的组织化学研究 总被引:16,自引:2,他引:14
研究治疗臂丛撕脱伤中移位神经的组织化学特征,为提高疗效提供依据。方法:取9例活体膈神经、副神经、颈丛神经、第4、第6肋间神经各1段;膈神经共12段,3段为新鲜尸体标本。样本运用Karnovsky-Roots的AchE染色法染色。通过图像分析系统测定样本中神经横截面积,神经纤维总数。结果:膈神经运动神经纤维达2685根,副神经为2142根,颈丛运动支为914根,第4、第6肋间神经(腋前线水平)分别为577和662根。膈神经在运动神经纤维数量和截面积上,均较副神经、颈丛运动支、肋间神经优越(P<0.01)。结论:在常用的移位神经中,膈神经是最为理想的移位神经。 相似文献