幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白DNA疫苗的构建及其免疫保护作用

目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用.方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌构建Hp-NAP口服DNA疫苗.口服Hp-SS1建立SS1长期感染小鼠模型,30周后随机均分为3组,每组各5只.治疗组予109cfu/0.4 ml疫苗菌灌胃,1次/周×3周;2个对照组分别予等体积生理盐水或空白质粒.末次免疫4周后行快速尿素酶检测,ELISA测定血清抗体效价.结果:重组真核表达质粒pIRES-napA成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207;所克隆napA与GenBank中SS1-na-pA核苷酸和蛋白质的同源性均＞98%.免疫后4周治疗组75%(3/4)小鼠快速尿素酶检测阴性,对照组均阳性,差异显著(P＜0.05);治疗组血清抗Hp-NAP抗体效价明显升高.结论:成功构建了具有较好免疫保护作用的Hp-NAP口服重组DNA疫苗,为进一步研制多价抗Hp核酸疫苗奠定了基础.     

吉法酯对伴有消化不良症状慢性胃炎的临床研究

背景 胃黏膜保护剂对伴有症状的慢性胃炎的作用尚不明确。本研究是一项多中心、开放、随机试验,比较吉法酯和硫糖铝对伴消化不良症状的慢性胃炎的综合疗效。 方法 共有来自国内6家中心的253例证实有慢性胃炎的消化不良患者进入研究,被随机分为两组,分别接受6周的300mg/d吉法酯或3.0/d的硫糖铝治疗。研究终点是6周的内镜学改变。 结果 吉法酯对于内镜下评分和症状改善的有效率分别为72%和67%,显著高于硫糖铝组（40.1%和39.3%,P<0.001,ITT）。在组织学评价上,吉法酯和硫糖铝相比,对减轻黏膜的慢性炎症（57.7% vs 24.8%, P<0.001）和炎症活动（36.4% vs 23.1%, P<0.05）都有效。同时,吉法酯可以显著增加黏膜的前列腺素水平,降低MPO水平。黏膜糜烂的程度与症状无关,但Hp的状态影响到吉法酯的疗效。 结论 吉法酯对慢性糜烂性胃炎的黏膜炎症有显著疗效,内镜和炎症评分应该作为胃炎相关临床研究的主要评价指标。     

应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K-ras基因突变

目的:应用肽核酸钳制PCR技术检测胰腺癌K-ras基因突变,探讨其诊断价值.方法:结合特异性肽核酸(针对野生型序列)与实时定量PCR技术建立一步K-ras基因检测法,与传统限制性片段长度多态性PCR法检测结果进行比较,评价新方法的诊断价值.结果:肽核酸钳制PCR法可同时对胰腺癌标本中K-ras基因的第12、13密码子突变情况进行检测,操作简便;可在105倍的野生型K-ras基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测突变基因最低限为102拷贝;该方法可同时进行较大规模的样品检测,单次检测时间仅需1 h.而传统方法可检测的突变基因最低限为103拷贝,检测灵敏度为0.01%;需花费约2 d完成同样数量的样本检测.结论:肽核酸钳制实时定量PCR法较限制性片段长度多态性PCR法有明显优势,适用于胰腺癌大规模临床样本的K-ras基因突变检测,可作为胰腺癌筛查的有效手段.     

应激状态下大鼠胃黏膜损伤及其与一氧化氮合酶变化的关系

一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)在胃肠道各种活动中有重要意义。目前对于躯体性和心理性并存应激状态的大鼠胃黏膜ＮＯＳ变化少见报道 ,本研究旨在探讨该状态下胃黏膜损伤及其与ＮＯＳ变化的关系 ,为临床诊断和治疗提供理论依据。一、材料和方法1 主要仪器、试剂及动物 :高压恒流脉冲刺激器为第二军医大学数理教研室研制 ;ＵＶ75 4型分光光度计为上海第三分析仪器厂产品 ;ＮＯＳ活性测试盒购自北京东亚免疫技术研究所 ;兔源大鼠ＮＯＳⅠ、ＮＯＳⅡ、ＮＯＳⅢ多抗购自Ｓｉｇｍａ公司 ;雄性ＳＤ大鼠购自上海计生所西普尔 必凯公司。2 方法 :雄性ＳＤ…     

红细胞裂解液和微量元素对幽门螺杆菌生长的影响

为了增加幽门螺杆菌(ＨＰ)生长速度,我们参照国外有关文献[1],在液体培养基中添加人红细胞裂解液(ＬＨＥ)和微量元素,观察它们对ＨＰ生长的影响。一、材料与方法1试验菌株:标准菌株ＣＣＵＧ17874由意大利ＩＲＩＳ研究中心惠赠。临床株由本实验室从病人胃活检标本培养所得。2红细胞裂解液的制备:取无菌人红细胞用无菌生理盐水洗2次,再用无菌双蒸水裂解,离心取上清液,用022μｍ滤膜过滤,测其血红蛋白浓度,调至60ｍｇｍｌ,置-20℃备用。3培养基及微量元素:4种液体培养基:ＴｒｙｐｔｏｎｅＹｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ(ＴＹ);ＭｕｅｌｌｅｒＨｉｎ…     

血清抗幽门螺杆菌抗体类型与相关疾病关系的研究

目的：分析中国人民血清抗幽门螺杆菌（ＨＰ）抗体类型，探讨其与疾病的关系。方法：收集１４３例血清，应用蛋白质印迹方法检测抗体类型。结果：患者血清中主要存在１２．８万，１１６万，９．１万，８．７万，６．８万，６．６万，６．２万和３．５万等多条抗体带，其中以ＨＰ６．６万最多见，高达９１％。良性胃病与胃癌血清中前４条抗体带存在状态差别，但胃炎和消化性溃疡的血清类型无明显差别。结论：蛋白质印迹方法检测抗ＨＰ     

MUC2基因甲基化在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的检测及意义

目的 检测MUC2基因在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的甲基化情况,探讨MUC2基因甲基化对胰腺癌早期诊断的价值.方法 收集长海医院消化内科实验室保存的人胰腺癌细胞系SW1990、ASPC、PANC1、BxPC3、PaTu8988、CFPAC1及40例胰腺癌、15例慢性胰腺炎患者和25例正常对照者外周血标本,应用甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction endonuelease,MS-RE)为基础的PCR法检测MUC2基因甲基化.结果 人胰腺癌细胞系PANC1、BxPC3、PaTu8988未发生MUC2基因甲基化;ASPC、CFPAC1、SW1990胰腺癌细胞系发生MUC2基因甲基化.外周血标本中,40例胰腺癌标本甲基化率为40.0%(16例),15例慢性胰腺炎无甲基化,25例正常对照甲基化率4.0%(1例).胰腺癌与慢性胰腺炎、正常对照之间的甲基化率有显著差异(P＜0.01).外周血标本MUC2基因启动子CpG岛甲基化检测诊断胰腺癌的敏感性为40%、特异性为97.5%、诊断准确性68.8%、阳性预测值94.1%、阴性预测值61.9%.结论 用甲基化限制性酶切PCR法对外周血进行MUC2基因启动子区高甲基化检测可望成为新的胰腺癌诊断的重要实验室辅助手段.     

罗格列酮在急性坏死性胰腺炎中对抵抗素的影响

随着社会的发展,人们生活水平的提高,肥胖和高脂血症的人群越来越多,由高三酰甘油血症引起急性胰腺炎(AP)的发病率随之增高;而三酰甘油的调节由脂肪细胞分泌的脂肪激素调节.因此,脂肪激素在AP发病中的作用越来越引起人们的重视.抵抗素(resistin)是新近发现的由脂肪细胞特异分泌的一种多肽类激素,与胰岛索抵抗有关,可引起肥胖和高三酰甘油血症[1],并且参与炎性反应,调控细胞因子的释放[2];而过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂罗格列酮是一类依赖配体活化的转录因子,属于核激素受体超家族成员,是抵抗素的抑制剂,具有抗炎和免疫调节作用[3-4],但罗格列酮能否减轻急性坏死性胰腺炎(ANP)及其诱导的肺脏炎性反应及其机制尚不清楚.本研究旨在观察罗格列酮在ANP及合并肺损伤大鼠中的防治作用及其作用机制.     

胰腺癌和慢性胰腺炎中弹性蛋白酶3B(ELA3B)基因甲基化状态检测

背景：DNA甲基化指DNA中的核苷酸与甲基基团共价结合，这是一种表观遗传修饰，在许多生物学过程中发挥重要作用。目的：探讨弹性蛋白酶3B（ELA3B）基因在胰腺癌中异常表达的潜在机制。方法：以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测30例胰腺癌、20例慢性胰腺炎和10例正常胰腺组织中ELA3B mRNA的表达，以甲基化特异性PCR（MSP）检测该基因启动子区甲基化水平。结果：胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织ELA3B mRNA的表达率依次为46．7％、85．0％和100％。胰腺癌组织ELA3B基因启动子区甲基化指数（MI）显著高于慢性胰腺炎和正常胰腺组织（7．02±6．31对2．33±0．97和3．31±0．75．P〈0．05），其中ELA3B mRNA表达阴性胰腺癌组织的MI显著高于ELA3B mRNA表达阳性组织（11．83±7．82对3．82±1．18，P〈0．05）。结论：本实验首次检测了ELA3B基因在胰腺癌和慢性胰腺炎组织中的甲基化状态，首次揭示ELA3B基因启动子区高甲基化是导致该基因在胰腺癌组织中低表达的原因之一。     

携带幽门螺杆菌ureB和IL-2质粒DNA的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建

目的　构建编码幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori)尿素酶B亚单位 (ureB)基因和小鼠IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,体外转染Cos 7细胞 ,鉴定其表达蛋白的免疫性。方法　应用聚合酶链式反应 (PCR)技术从H .pylori标准菌株CCUG1 7874基因组DNA扩增ureB基因 ,从重组质粒 pCIneo IL 2扩增小鼠IL 2基因 ,通过T A克隆分别插入 pUCmT载体 ,检测ureB及IL 2的核苷酸序列 ,通过酶切、连接反应分别克隆入真核表达载体 pIRES ,PCR和酶切反应进行鉴定 ;重组载体 pIRES ureB和 pIRES ureB IL 2转入减毒鼠伤寒沙门菌LB50 0 0 ,抽提质粒 ,再次转入SL72 0 7,反复传代 ,鉴定核酸疫苗载体菌的稳定性。通过脂质体法将重组载体 pIRES ureB和pIRES ureB IL 2转染Cos 7细胞 ,SDS PAGE及Westernblot法检测表达蛋白的免疫性。结果　扩增出长约 1 70 0bp的ureB基因和 51 0bpIL 2 ,测序结果表明 ,扩增出的ureB基因与基因库H .pyloriureB序列一致 ,IL 2序列和小鼠的IL 2序列一致 ,PCR和酶切鉴定结果证实ureB和IL 2基因克隆入真核表达载体 pIRES ,并成功构建了稳定的幽门螺杆菌ureB和IL 2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗 ,并且以Westernblot检测到特异性的相对分子质量 (Mr)为 6 6× 1 0 3的UreB蛋白