血管紧张素Ⅱ受体在大鼠胰星状细胞上的表达及其调节

胰腺存在局部特异的肾素-血管紧张素系统(RAS)，此系统参与胰腺纤维化的发生。由于胰星状细胞(PSC)是参与胰腺纤维化发生的主要效应细胞，故推测RAS的致胰纤维化作用可能是通过直接作用于PSC实现的。为此，本研究探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的2种主要受体亚型AT1和AT2在大鼠PSC的表达情况，并在此基础上探讨其表达的调控机制。     

曲古菌素A对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察曲古菌素A(tfichostatin A,TSA)对人胰腺癌PaTu-8988细胞增殖及细胞周期的影响.方法 不同浓度(0.1、0.5、2.0 μmol/L)TSA处理人胰腺癌PaTu-8988细胞,并设空白对照组.采用WST-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测细胞周期相关基因p21和cyclin DI mRNA的表达.结果 对照组、TSA 0.1μmol/L、0.5μmol/L和2.0μmol/L组的细胞存活率分别为(100.0±4.2)%、(88.5±4.2)%、(79.7±5.0)%和(64.3±7.2)%,各TSA组均显著低于对照组(P<0.01).TSA 0.1μmoL/L、0.5μmol/L组的细胞以G1期居多,2.0μmol/L组(50.29±7.53)%细胞阻滞在G2/M期.TSA各组p21 mRNA表达值分别为5.29±1.16、7.79±0.41、8.61±0.73,较对照组l,00±0.08显著升高(P<0.01);cyclin DI mRNA表达值分别为1.13±0.12、0.42±0.06、0.19±0.06,较对照组1.00±0.07表达降低(P<0.05).结论 TSA通过上调p21及下调cyclin D1基因的表达,导致细胞周期阻滞.     

ZD7155对人胰腺癌抑制作用的体内研究

目的最近的研究表明,血管紧张素Ⅱ1型受体在胰腺癌组织和细胞中存在高表达,本研究观察血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂对人胰腺癌细胞系裸鼠移植瘤模型的肿瘤抑制作用.     

幽门螺杆菌UreB-NAP-HpaA三价DNA疫苗的构建及免疫原性初步研究

目的:构建幽门螺杆菌(Hp)尿素酶亚单位B(UreB)、中性粒细胞激活蛋白(NAP)及黏附素A(HpaA)三价重组DNA疫苗并研究其抗原性,为Hp疫苗的开发奠定基础.方法:PCR扩增UreB、NAP、HpaA全长序列,分别克隆入pMD 18-T载体,测序并鉴定方向后依次连接,构建融合基因UNH,然后将其亚克隆入真核表达载体pIRES,以此转染COS-7细胞,Western印迹检测表达蛋白的抗原性.结果:PCR分别获得约1 707、432和750 bp产物,与GenBank中相关序列具有高度同源性,三者融合后获得一约2 901 bp目的基因.重组质粒pIRES-UNH转染COS-7细胞后表达相对分子质量约107 000的蛋白质,Western印迹显示该重组蛋白可为UreB、NAP、HpaA抗血清特异识别,具有良好的抗原性.结论:成功构建了具有良好免疫原性的UreB-NAP-HpaA三价重组DNA疫苗,为进一步探讨其免疫保护性及Hp疫苗的研制奠定了基础.     

吉法酯对伴有消化不良症状慢性胃炎的临床研究

背景 胃黏膜保护剂对伴有症状的慢性胃炎的作用尚不明确。本研究是一项多中心、开放、随机试验,比较吉法酯和硫糖铝对伴消化不良症状的慢性胃炎的综合疗效。 方法 共有来自国内6家中心的253例证实有慢性胃炎的消化不良患者进入研究,被随机分为两组,分别接受6周的300mg/d吉法酯或3.0/d的硫糖铝治疗。研究终点是6周的内镜学改变。 结果 吉法酯对于内镜下评分和症状改善的有效率分别为72%和67%,显著高于硫糖铝组（40.1%和39.3%,P<0.001,ITT）。在组织学评价上,吉法酯和硫糖铝相比,对减轻黏膜的慢性炎症（57.7% vs 24.8%, P<0.001）和炎症活动（36.4% vs 23.1%, P<0.05）都有效。同时,吉法酯可以显著增加黏膜的前列腺素水平,降低MPO水平。黏膜糜烂的程度与症状无关,但Hp的状态影响到吉法酯的疗效。 结论 吉法酯对慢性糜烂性胃炎的黏膜炎症有显著疗效,内镜和炎症评分应该作为胃炎相关临床研究的主要评价指标。     

三种DNA抽提方法对新鲜血细胞及冻血细胞DNA抽提效能的比较

目的 比较3种血细胞DNA提取方法（进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚抽提方法）对新鲜血细胞及冻血细胞DNA的提取效率及差异。 方法 收集20例胰腺癌患者5 mL外周血标本,经低速离心获得血细胞沉淀后分装,根据保存方式分为新鲜血细胞和冻血细胞。新鲜血细胞不经冻存,在12 h内迅速抽提DNA;冻血细胞在-40℃保存72 h后,室温解冻后抽提DNA。抽提方法分别采用进口试剂盒（Qiagen公司）、国产试剂盒（天根生化科技有限公司）和改良苯酚方法。琼脂糖电泳检测DNA片段的完整性,核酸蛋白检测仪测定DNA纯度和浓度,计算不同抽提方法的DNA得率。 结果 在获得的DNA完整性方面,改良苯酚方法抽提的基因组DNA断裂和降解较少,而进口和国产试剂盒抽提的DNA均有一定程度的降解小片段。在获得DNA的纯度方面,部分冻存血细胞无论应用进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚方法,均表现出一定的污染杂峰。在DNA得率方面,无论新鲜血细胞和冻存血细胞,均是进口试剂盒得率最高,其次为国产试剂盒;冻血细胞的改良苯酚法DNA得率与国产试剂盒相当,新鲜血细胞的改良苯酚法DNA得率最低。在耗时和成本分析中,试剂盒较快但成本较高。 结论 改良苯酚抽提法可获得较进口和国产试剂盒片段更长、更完整的基因组DNA,虽然在得率和耗时方面稍逊色,但其成本较低,可推荐用于大规模、分批次、低成本冻存血细胞的基因组DNA抽提。     

SHH mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达及意义

目的 检测Sonic Hedgehog(SHH)mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨SHH mRNA在胰腺癌发生和发展中的作用.方法 收集本实验室保存的6株人胰腺癌细胞系及30例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织,应用半定量RT-PCR方法检测SHH mRNA的表达.结果 6株人胰腺癌细胞系中均有SHH mRNA高表达;胰腺癌组织SHH mRNA表达率为86.7%,表达强度为0.785±0.070,癌旁正常胰腺组织SHH mRNA表达率为40.0%,表达强度为0.463±0.055,两者具有显著性差异(P＜0.01).SHH mRNA的表达水平与胰腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移均无相关性.结论 胰腺癌存在SHH mRNA的高表达,这可能是胰腺癌发生的早期事件.     

胰腺细针穿刺标本中粘蛋白MUC1、MUC5AC的临床意义

目的检测胰腺细针穿刺标本中粘蛋白MUC1、MUC5AC的临床意义。方法对54例胰腺占位病变的EUS-FNA活检标本采用SP免疫组化法检测粘蛋白MUC1、MUC5AC表达,根据临床综合判断的诊断,与细胞学和组织学检查结果比较,评价其诊断价值。结果54例患者最后确诊为胰腺癌38例,胰腺良性肿瘤6例,慢性胰腺炎10例。细胞学和组织学的诊断敏感性分别为31.6%和47.4%。MUC1、MUC5AC、MUC1 MUC5AC在胰腺癌EUS-FNA标本组织中的阳性表达率为81.6%、84.2%和76.3%,显著高于胰腺良性疾病的25%、43.8%和6.3%的表达(P<0.01)。细胞学和组织学检查结合MUC1和MUC5AC的检测诊断胰腺癌的敏感性可提高到84.2%,特异性达100%。结论检测胰腺FNA标本中粘蛋白MUC1、MUC5AC的表达有助于提高对胰腺癌的诊断。     

人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建

目的应用抑制消减杂交技术(SSH)构建胰腺癌和正常胰腺组织间差异表达的抑制消减cDNA文库。方法分别提取胰腺癌(tester)和癌旁正常胰腺组织(driver)中的总RNA和mRNA．合成双链cDNA，经RsaI酶切后，将胰腺癌双链cDNA分为两组，分别加上不同的接头，再与正常胰腺组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，分离出胰腺癌差异表达基因的cDNA片段。将该差异表达片段克隆至T／A载体，并转化大肠杆菌TOP10F’，经蓝白斑筛选后，再用PcR方法筛选阳性克隆，从而构建胰腺癌抑制消减cDNA文库。结果文库扩增后得到257个白色克隆，随机挑取50个阳性克隆进行PCR扩增分析，其中47个克隆有插入片段．克隆阳性率为94％，片段大小主要集中在300～600bp之间。结论成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库，为进一步筛选、克隆胰腺癌特异性表达基因奠定了基础。     

人胰液蛋白质组的双向电泳

目的建立优化的用于胰液蛋白质组研究的双向电泳方法。方法经内镜逆行胰胆管造影（ERCP）术收集纯胰液标本5例，分别进行多次双向电泳．比较不同标本保存时间、制备方法、泡胀液组成、固相pH胶条、等电聚焦条件及染色方案等因素对双向电泳图谱质量的影响。结果胰液标本在-80℃保存4个月做双向电泳对图谱没有明显影响。根据图谱质量比较，三氯乙酸／丙酮沉淀继以含硫脲的泡胀液复溶是优化的标本制备方法；应用窄范围固相pH胶条可以在增加标本上样量的同时改善分辨率：银染和兼容质谱的银染方案所获得的图谱同样具有良好的重复性和分辨率；不同病理状态的胰液标本的双向电泳图谱表现出一定程度的相似性。结论标本制备是胰液双向电泳的关键，优化的方法可以获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱，为不同病理状态下胰液蛋白质组学差异的研究奠定基础。