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1.
目的 观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH-1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响.方法 由美国Ambion公司设计合成DNMT1siRNA和阴性对照siRNA,分别用15、30 nmol/L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞,以未转染组细胞作为对照.应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMT1 mRNA和蛋白的表达;用DNMT活性检测试剂盒检测其活性;用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态;实时PCR法检测hMLH-1 mRNA的表达.结果 转染48 h后,DNMT1 siRNA15、30 nmol/L组细胞DNMT1 mRNA表达量分别为0.573±0.026和0.143±0.044,显著低于对照组的1.020±0.217及阴性siRNA 15、30 nmol/L组的0.900±0.475和0.938±0.327(P值均<0.05);DNMT1 siRNA组的DNMT1蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组.DNMT1 siRNA15、30 nmol/L组细胞DNMT活性分别为0.364±0.124和0.250±0.072,明显低于对照组的0.931±0.065及阴性siRNA 15、30 nmol/L组的0.665±0.055和0.472±0.040.DNMT活性与DNMT1 mRNA表达呈正相关(r=0.69,P<0.01).DNMT1 RNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化.结论 DNMT1 siRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1基因的表达,明显抑制DNMT的活性,并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化. 相似文献
2.
目的 探讨胰腺癌组织中RADIL基因的表达及其与临床病理特征之间的相关性.方法 采用实时定量PCR方法检测40例胰腺癌及相应癌旁组织和5例正常胰腺组织中RADIL mRNA相对表达量,分析RADIL mRNA表达与胰腺癌临床病理特征之间的相关性.结果 RADIL mRNA在胰腺癌组织、癌旁组织及正常胰腺组织中均有表达,相对表达量分别为2.263±3.826、5.425±8.858和8.559±4.214,三组之间存在显著差异(P<0.05).癌组织中RADIL mRNA高表达与肿瘤远处转移、分化程度呈负相关(r为-0.312和-0.294,P值均<0.05),与肿瘤部位、肿瘤大小,血清CA19-9浓度、TNM分期及患者的性别和年龄均无显著相关性.结论 RADIL基因对胰腺癌可能具有一定的抑制作用. 相似文献
3.
目的 研究Hedgehog通路中Ptchl基因表达及其甲基化状态在胃癌发生中的变化.方法 分别抽提10例胃癌组织及其癌旁>3 cm组织和胃癌细胞株AGS的总RNA和基因组DNA.实时定量逆转录多聚酶链反应(QRT-PCR)检测Ptch基因的mRNA表达.应用软件分析Ptchl基因5'调控序列的CpG岛状态,亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)分析甲基化水平.结果 对Ptchl mRNAla转录体转录起始位点(计为0点)上游-3950 bp和下游+2050 bp进行CpG岛分析,发现存在两个CpG岛,第1个为-1139 bp~+860 bp,第2个为+875 bp~+1692 bp.以第1个CpG岛的-870 bp~+229 bp区段内的19个CpG位点的BSP测序结果显示,胃癌细胞株AGS全部发生甲基化,胃癌组织中甲基化程度为16%~100%,平均64%±32%,癌旁组织甲基化程度为0%~42%,平均13%±14%,两组问差异有统计学意义(P<0.05).Spearman秩相关分析发现,Ptchl基因甲基化同其表达呈负相关(r=-0.558,P=0.011).结论 Ptchl基因高甲基化参与胃癌的发生,可能为胃癌新的肿瘤标志物. 相似文献
4.
目的 检测胰腺癌SPARC基因CpG岛的甲基化状态及其与临床病理参数的关系.方法 收集17例胰腺癌及相应癌旁组织、6例CP和6例正常胰腺组织以及6例健康成人外周血液标本,抽提DNA,进行亚硫酸氢盐修饰,然后行甲基化特异性PCR,检测SPARC基因第一外显子区CpG岛的甲基化状态,并分析与肿瘤病理参数的关系.结果 健康人外周血白细胞DNA中SPARC基因第一外显子区CpG位点均无甲基化.正常胰腺、CP、胰腺癌及相应癌旁组织SPARC基因第2、3、4、5、6、7 CpG位点的甲基化率分别为61.6%、47.1%、37.5%、24.7%;第1,8、9、10、11、12 CpG位点的甲基化率分别为52.0%、28.7%、16.7%和0.胰腺癌SPARC基因甲基化率与正常胰腺、CP比较均差别非常显著(P<0.001),与相应癌旁组织比较差别不显著.胰腺癌SPARC基因CpG岛甲基化与患者性别、年龄、危险诱因(如长期吸烟或饮酒、CP)、肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移等均无显著差异.结论 胰腺癌SPARC基因第一外显子区CpG岛为高甲基化状态,可能为胰腺癌发生、发展的早期事件. 相似文献
5.
胰腺癌内镜超声引导下细针穿刺活检物中肿瘤标志物检测价值研究 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 探讨检测内镜超声引导下细针穿刺(EUS-FNA)活检物中CEA、CA19-9常用肿瘤标志物对胰腺癌诊断的价值.方法 2004年6月至2006年1月间的65例胰腺癌患者和25例慢性胰腺炎患者行EUS-FNA,采用电化学发光法对EUS-FNA活检物的离心上清进行CEA、CA19-9检测,并与该患者外周静脉血清中的CEA、CA19-9进行对比和分析.随后对临床可疑胰腺癌而EUS-FNA病理学检测阴性的12例的病例进行随访,观察该方法诊断胰腺癌的敏感性.结果 (1)胰腺癌患者中EUS-FNA标本中CEA和CA19-9均高于血清(P<0.01).慢性胰腺炎患者EUS-FNA标本与血清中的CEA(P=0.122)和CA19-9(P=0.035)都没有明显差别.(2)对于EUS-FNA标本,胰腺癌中的CEA、CA19-9高于慢性胰腺炎(P<0.01).对于血清标本,慢性胰腺炎与胰腺癌中的CEA没有明显差别(P=0.079),胰腺癌中的CA19-9高于慢性胰腺炎患者(P<0.01).(3)12例可疑胰腺癌随访后确诊10例为胰腺癌,2例为慢性胰腺炎.对于胰腺癌的诊断,血清CEA的敏感性为30%,血清CA19-9为70%;EUS-FNA活检物中CEA和CA19-9的预测敏感性均为90%.结论 胰腺癌EUS-FNA活检物中的CEA、CA19-9对提高胰腺癌诊断的敏感性具有较高的临床实用价值,为提高胰腺癌的诊断率提供了一种新的方法. 相似文献
6.
Killing effect of adenoviral mediated cytosine deaminase gene on human pancreatic cancer cell line PaTu8988 总被引:1,自引:0,他引:1
Pancreaticadenocarcinomarankssixthofcancer-relateddeathinChina,andittendstobeadvancedatthetimeofpresentation,70%-90%patientsatthetimeofdiagnosishadinoperabledisease.5-Fluorouracil(5FU)iscommonlyusedaloneorwithradiotherapyinthetreatmentofresectablepancreaticcancerandinthepalliationofunresectablepancreaticcancer.Butthecurativeeffectof5FUislimitedbyitssideeffects.Suicidegenetherapyisanewexperimentalformofcancerchemotherapybeingevaluatedinhumantrials.Cytosinedeaminase(CD)isanenzymefoundinava-r… 相似文献
7.
目的 构建入神经元正五聚蛋白2(NPTX2)真核表达载体.转染人胰腺癌细胞PANC1,建立稳定转染的细胞系.方法 通过双酶切的方法获得人NPTX2全长cDNA,利用Not I和EcoR I酶切位点将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序验证盾,用脂质体转染法转染PANC1细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的PANC1细胞,用实时定量PCR方法筛选NPTX2 mRNA高表达克隆.结果 成功构建了pcDNA3.1(+)-NPTX2真核表达载体.并建立了稳定转染的PANC1细胞,成功表达了目的 基因.结论 真核表达载体的构建和稳定转染PANC1细胞系的建立为进一步研究NPTX2基因在胰腺癌细胞的作用奠定了良好的基础. 相似文献
8.
目的:研究乳癌相关肽(PS2)在水浸束缚应激(WRS)大鼠胃粘膜基因表达的变化,探讨其在应激胃粘膜损伤中的修复作用。方法:采用单次及单次和重复WRS制作模型,动态监测胃粘膜血流量(GMBF),大体及光镜下观察粘膜损伤程度(UI)及组织学变化,逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测PS。的基因表达变化,通过免疫组化染色法进一步证实pS2的表达。结果:①单次应激造成胃粘膜广泛损伤,但UI在2、4、8 h逐渐减小,至8 h降为64.9%,GMBF逐渐恢复,至8h上升为正常的89.8%,pS2。基因表达逐渐增强(0.51±0.14与0.77±0.11,P<0.01),免疫组化染色计分为0.95±0.00与1.41±0.04(P<0.001);②单次和重复应激后胃粘膜产生适应性,GMFB上升,损伤逐渐减轻,4次应激后,UI降低为单次应激的21.99%,GMBF上升为正常的94.2%,且胃腺区细胞增殖,pS2基因表达增强(0.37±0.02与0.77±0.01,P<0.01),免疫组织化学染色计分为0.55±0.04与2.46±0.08(P<0.01)。结论:pS2可能参与胃粘膜的早期重建(上皮移行),还有可能参与胃粘 相似文献
9.
CD/5-FC系统对胰腺癌裸鼠移植瘤的抗血管形成作用的初步探讨 总被引:4,自引:1,他引:3
目的 探讨自杀基因系统对胰腺癌裸鼠移植瘤的微血管形成的抑制作用。方法 构建含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶 (cytosinedeaminase ,CD)基因的腺病毒穿梭载体 pAdTrack CMV CD ,与骨架载体pAdEasy 1在细菌内重组为 pAd CD ,经 2 93细胞包装、扩增 ,氯化铯密度梯度离心制备纯化高效的CD腺病毒液 ,建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型 ,观察CD基因的原位治疗及微血管形成抑制情况。结果 含CD基因腺病毒载体经酶切鉴定正确 ,包装纯化后 ,检测病毒滴度为 2× 10 11pfu/ml,体内实验显示CD基因原位转导对裸鼠胰腺癌移植瘤的微血管形成具有较明显的抑制效应。结论 腺病毒介导CD/ 5 FC自杀基因系统 ,不仅可以直接杀灭癌细胞 ,而且还可通过抑制移植瘤微血管的形成来抑制胰腺癌细胞的生长 ,可作为胰腺癌基因治疗的有效方法。 相似文献
10.
DNA甲基转移酶1和组蛋白脱乙酰基酶1在胰腺组织中的表达及其临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
背景:近年针对DNA甲基化和组蛋白乙酰化修饰的表观遗传学研究是探索胰腺癌发生机制的新热点。目的:研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)和组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)在胰腺上皮内瘤变(PanIN)和胰腺癌组织中的表达.探讨其可能的临床意义。方法:以免疫组化SP法检测DNMT1、HDAC1在10例正常胰腺组织、39例证实含有PanIN的胰腺癌旁组织和54例胰腺导管腺癌(PDAC)组织中的表达。结果:DNMT1和HDAC1在胰腺组织中的阳性表达率均随组织异型程度的增加而逐渐增高,即正常胰腺导管(0%)〈PanIN—IA(7.2%±1.2%,10.7%±5.0%)〈PanIN-1B(24.5%±9.6%,40.1%±8.0%)〈PanIN-2(30.0%±11.9%,51.2%±13.4%)〈PanIN-3(46.7%±11.2%,73.1%±11.3%)〈PDAC(56.7%±27.5%,82.5%±19.4%),差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论:DNMT1和HDAC1表达增强是胰腺癌发生的早期事件.两者共同促进了胰腺癌的进展,可能成为胰腺癌早期诊疗的新靶点。 相似文献