微波法快速检测VCA-IgA

国内有人将微波应用于免疫组织化学及骨髓涂片铁末染色,获得满意效果。我们将微波用于检测EB病毒壳抗原免疫球蛋白A(VCA-IgA),使常规法加样加酶标抗体1.5小时的反应过程缩短至20秒,经对比常规法与微波法结果一致,特予介绍。     

烧伤病人尿液微量蛋白的变化

烧伤病人尿液微量蛋白的变化第二军医大学长海医院（上海２００４３３）临床实验诊断科张乐之，龚燕芳，顾福生烧伤科陈玉林，郇京宁，葛绳德严重烧伤后，机体免疫功能下降已为大量的实验研究和临床观察所证实。有人认为免疫物质的丢失和消耗是免疫功能低下的原因之一，本...     

Expression of differential nitric oxide synthase isoforms in human gastric mucosa infected with Helicobacter pylori

Objective: To study the relationship between nitric oxide synthase ( NOS) expression in human gastric mu-cosa and Helicobacter pylori (H. pylori) infection. Methods: Gastric mucosa samples were obtained from antrum of 33 patients received gastroendoscopy. H. pylori infection was confirmed by Giems staining and bacteria culture under mi-croaerophilic conditions. Expression of iNOS, eNOS and nitrotyrosine were detected by immunohistochemistry. Results: (1) The positive rate of H. pylori infection was 66. 7% (22/33) . (2) iNOS positive staining in inflammatory cells was detected in 77. 3% (17/22) of samples with H. pylori and 27. 3% (3/11) without H. pylori infection (P < 0.01). (3) eNOS expression in inflammatory cells was found in 77. 3% (17/22) of samples with H. pylori and 18.2% (2/11) without H. pylori infection ( P < 0. 01) . (4) Nitrotyrosine expression in inflammatory cells was observed in 59. 1% ( 13/22) of samples with H. pylori and 54.5%(6/11) without H. pylori infection (P>0.05). (5) Moderate a     

肝癌患者血清12种肿瘤标志物的变化

目的探讨定量测定肝癌患者血清12种肿瘤标志物的临床意义。方法用蛋白芯片技术定量测定42例正常人、46例肝癌、41例肝炎和23例肝硬化患者血清12种肿瘤标志物的变化并对检测效果进行评价。结果42例正常人CA-199(KU/L)、NSE(g/L)、CEA(g/L)、CA-242(KU/L)、Ferritin(g/L)、β-HCG(g/L)、AFP(g/L)、f-PSA(g/L)、PSA(g/L)、CA-125(KU/L)、HGH(g/L)和CA-153(KU/L)的含量分别为12.42±10.62、2.22±1.43、1.28±1.20、5.72±5.73、91.17±79.43、0.64±0.34、2.96±3.93、0.13±0.11、0.61±1.40、5.46±9.65、1.61±2.40、9.83±9.51;46例肝癌患者血清12种肿瘤标志物含量依次为:35.09±39.50、2.83±4.13、2.98±8.72、8.47±23.42、157.50±129.77、0.72±0.72、87.58±63.27、0.15±0.19、0.58±1.88、56.34±102.02、3.63±4.57、15.65±51.09;41例肝炎患者其含量依次为:76.23±96.57、4.12±4.94、2.06±3.92、4.68±6.99、298.76±326.82、1.00±0.74、63.16±91.76、0.11±0.006、0.27±0.94、18.57±36.60、3.63±4.00、6.13±6.86;23例肝硬化患者其含量依次为:49.85±75.60、5.47±14.97、1.71±1.77、12.44±34.55、278.32±326.82、0.70±0.54、52.89±98.28、0.22±0.21、2.24±4.36、111.50±191.99、2.15±0.99、10.51±15.79。该蛋白芯片测定的敏感性为50.0%,特异性为64.2%,阳性预测值为37.7%,阴性预测值为74.7%。结论采用蛋白芯片技术同时测定患者血清多种肿瘤标志物,对普查肿瘤和临床疗效观察有较好应用价值。     

人canstatin基因原核载体构建及其重组蛋白的表达纯化

目的：构建人血管能抑素canstatin基因原核表达载体,表达并纯化出其重组蛋白.方法：从人胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增canstatin cDNA,克隆进质粒pUCm-T,转化E coli DH5α,测序正确后,酶切目的基因片段,插入质粒pET-22b（＋）,转化E.coli BL21,IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化重组蛋白.结果：电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因canstatin长度一致.RT-PCR纯化产物与载体pUCm-T连接后,经蓝白斑筛选,挑出6个白色菌落做酶切鉴定.其中一个菌落被证实为阳性克隆,测定其基因序列,结果显示与Genbank公布的canstatin基因序列完全一致.将canstatin cDNA,插入质粒pET-22b（＋）,转化E.coli BL21,培养过夜后,挑选7个白色菌落做酶切鉴定,证实均为阳性克隆.IPTG诱导其中一个克隆表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量24000左右出现新的蛋白表达条带,诱导1、2、3、4 h后,表达蛋白分别占菌体总蛋白的18.2%、18.8%、23.0%和23.4%.将诱导3 h的菌体超声破碎后,Ni柱亲和层析,125和250 mmol/L咪唑洗脱液SDS-PAGE电泳显示出清晰的单一条带.结论：成功构建人canstatin基因原核表达载体,表达并纯化出canstatin重组蛋白,为深入研究其临床应用打下基础.     

胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤组织DNMT1和HDAC1的表达及意义

目的:观察胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤(IPMNs)组织DNA甲基化转移酶1(DNMT1)和组蛋白去乙酰化酶(HDACI)的表达,探讨其可能的临床意义.方法:免疫组织化学SP法检测DNMT1、HDAC1蛋白在48例IPMNs和54例胰腺导管腺癌(PDAC)组织中的表达并进行统计学分析.结果:DNMT和HDAC1阳性表达率在由正常胰腺导管→1PMA,IPMB→IPMC→PDAc的逐级进展过程中均逐渐升高,二者在IPMNs不同亚型中均有阳性表达.结论:DNMT1和HDAC1高表达是胰腺癌的早期事件,二者的表达水平能够反映IPMNs的恶性进展,但不能作为IPMNs的组织分型标志.     

胰腺癌细胞株SPARC基因启动子区甲基化状况的研究

目的检测6种胰腺癌细胞株中SPARC基因启动子区5’CpG岛甲基化状况。方法以ASPC、BX-PC3、CFPAC、PANC1、SW 1990、PaTu8988等胰腺癌细胞株及正常人胚肾细胞AD293标本为研究对象,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测细胞株SPARC基因启动子区5’CpG岛甲基化状况。结果6例胰腺癌细胞株中3例(ASPC、CFPAC-1、BxPC3)细胞株发生完全甲基化;3例(PANC-1、Patu8988、SW 1990)发生部分甲基化,正常人胚肾上皮细胞AD293未发生甲基化。结论SPARC基因启动子区5’CpG岛甲基化改变是胰腺癌SPARC基因的一种重要失活方式,SPARC基因启动子区的高甲基化是胰腺癌细胞区别于正常细胞的分子事件之一,可能在胰腺癌的发生、发展中起重要作用。检测SPARC基因高甲基化可能会成为一种新的诊断胰腺癌的肿瘤标志物。     

快速幽门螺杆菌液体培养方法的研究

幽门螺杆菌 (HP)已被认为是消化性溃疡和胃癌的一个主要病因。近年来国内外建立了许多诊断 HP感染的方法 ,如直接涂片法、尿素酶检测法、呼吸试验、分子生物学方法等。其中细菌培养是诊断 HP的“金标准”[1 ] 。不论哪种快速诊断法 ,通常都需同步进行细菌培养与之对比 ,以评价其敏感性、特异性。以往 HP培养大多数是采用固体培养法 ,一般需要 3～ 7d,超过 5 d细菌形态易变成球形 ,会失去尿素酶活性 ,不易再培养 [2 ] ,难以对其作进一步的深入研究。为此 ,我们参照国外有关文献 [3 ,4] ,在培养液中添加人红细胞裂解液(lysed hum an eryth…