雌激素对人肠系膜平滑肌细胞钙激活钾通道的作用

目的 研究雌激素对人肠系膜平滑肌细胞钙激活钾通道电流的影响.方法 用急性酶分离法分离人肠系膜平滑肌细胞,采用单通道膜片钳技术记录该细胞上的钙激活钾通道电流.结果 雌激素浓度依赖性的不可逆性的激活人肠系膜平滑肌细胞钙激活钾通道.在细胞贴附式膜片(cell-attached patch)下,膜电位为 50 mV时,10、70、150、200、300 μL/mL的雌激素,可使通道开放概率从0.0214±0.0112分别增加到0.0385±0.0146(n=8,P＜0.05)、0.0425±0.0251(n=8,P＜0.01)、0.0614±0.0152(n=8,P＜0.01)、0.1263±0.0346(n=8,P＜0.01)、0.2636±0.1046(n=8,P＜0.01).在内面向外式膜片(inside-out patch)下,膜电位为 50 mV时,10、70、150、200、300 μL/mL的雌激素,可使通道开放概率从0.0342±0.01024分别增加到0.0454±0.0231(n=8,P＜0.01)、0.0617±0.0137(n=8,P＜0.01)、0.0980±0.0202(n=8,P＜0.01)、0.1203±0.0153(n=8,P＜0.01)、0.3149±0.0851(n=8,P＜0.01).随着雌激素浓度的增加,通道活动逐步被激活,这种作用冲洗后不可逆.结论 雌激素对人肠系膜平滑肌细胞钙激活钾通道电流有一定激活作用,提示雌激素对人肠系膜阻力血管有一定的舒张作用.     

肾炎Ⅱ号方配合西药治疗气虚血瘀型慢性肾小球肾炎疗效观察

目的:观察益气补肾、利湿降浊类中药治疗气虚血瘀型慢性肾炎的疗效。方法:采用肾炎Ⅱ号方(黄芪、当归、川芎、猪苓、茯苓、山药、山萸肉、人参、白花蛇舌草)配合西药治疗本病30例,并设对照组,观察两组临床疗效及24h尿蛋白,纤维蛋白原(FIB)水平。结果:治疗组总有效率86.7%,对照组66.5%,有统计学差异。治疗组在改善症状,降低24h-MP,FIB方面疗效优于对照组,有统计学差异(P1<0.05;P2<0.05)。结论:肾炎Ⅱ号方配合西药可显著缓解症状,降低尿蛋白、FIB含量,改善肾脏微循环,防止肾小球硬化,对慢性肾炎有良好的疗效。     

诊断性教学评价法在提高基地医院教学质量中的应用

目的：研究诊断性教学评价法在提高基地医院教学质量中的作用。方法：采用我院《课堂教学质量评价表（临床理论课）》对诊断性教学评价法和传统教学评价法两种不同的评教方法的实验组和对照组进行问卷调查及成绩比较分析。结果：实验组和对照组的问卷调查及成绩比较,差异有显著性（P〈0．05）。结论：诊断性教学评价法可以有效地查找出基地医院理论课教学中存在的不足,有助于提高基地医院教师的教学水平和基地医院理论课的教学质量。     

人心房肌KChIP2基因表达质粒pEGFP-KChIP2

目的：KChIPs作为瞬时外向钾通道（Ito）最重要的辅助亚基,在调控通道基因表达和电流特性中起重要作用。本实验拟构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为研究KChIP2对Ito的调控功能奠定基础。方法：①提取人心房肌总RNA,逆转录得到cDNA;②通过特异性引物进行PCR扩增得到KChIP2编码区全长序列,亚克隆到pMD18-T载体中．得到重组克隆质粒pMD18-T—KChIP2;③再设计带有酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ的特异性引物,对重组克隆质粒pMD18-T—KChIP2进行PCR扩增,得到含有酶切位点的KChIP2编码区全长序列;④对含有酶切位点的KChIP2全长片段和pEGFP—c1进行HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切反应,然后进行电泳后胶回收,再进行连接和转化反应;⑤提取质粒,测序鉴定。结果：质粒测序结果与PubMed数据库KchIP2（AY026328）序列比对,同源性为99％。结论：成功构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为下一步转染实验研究KChIP2对瞬时外向钾通道的功能调控奠定了基础。     

一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法

目的：探讨一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法,使细胞内环境保持稳定,改善常规全细胞膜片钳破膜所造成的封接不稳定。方法：以人肠系膜动脉平滑肌细胞为研究对象,采用穿孔全细胞膜片钳技术,记录人肠系膜动脉平滑肌细胞上大电导钙激活钾通道（big-conductance Ca2＋-activated potassium channels,BKCa）宏观电流以及自发性瞬时外向电流（spontaneous transient outward currents,STOCs）。结果：采用这种穿孔全细胞膜片钳技术,能有效记录到人肠系膜动脉平滑肌细胞上BKCa和STOCs。结论：穿孔膜片钳技术是一种简便而有效的记录全细胞电流的实验方法,该方法的建立为今后更深入的研究提供实验基础。     

人心房组织膜蛋白SK2的提取方法

目的：优化人心房组织膜蛋白提取方法。方法：分步离心法提取心肌膜蛋白,SK2膜蛋白用western-blot检测。结果：BCA检测出蛋白浓度,western-blot检测出蛋白条带。结论：此方法能够提取人心房组织的膜蛋白SK2,该方法简单,稳定,可靠,提取的膜蛋白质量好,浓度高,并能进行下一步的western-blot的实验,以便将来检测SK2膜蛋白在窦性和房颤患者心房组织之间表达的差异。     

人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa通道在HEK293细胞上的表达方法研究

目的:本研究旨在HEK 293细胞系上成功表达人肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channels,BKCa),建立一种稳定高效表达人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa的HEK 293细胞系方法,进一步揭示在工具细胞表达上的BKCa的基本特性,为以后的诸多实验提供参考价值.方法:应用基因工程技术构建人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa通道基因表达载体,用脂质体转染法转染HEK 293细胞,建立了稳定高效表达BKCa通道的HEK 293细胞系的方法.结果:在HEK 293细胞系上表达的BKCa单通道电流的电导值为229.56±4.62 pS,具有电压依赖性,钙离子敏感性等特性;在HEK 293细胞系表达的BKCa全细胞宏观电流具有明显的电压依赖性和外向整流特性.结论:成功建立了一种在HEK293细胞系上表达的BKCa通道的实验方法,并成功记录到BKCa通道的单通道电流和全细胞宏观电流,且与天然细胞上BKCa通道电流特性基本一致.     

EFFECTS OF GLUTAMATE ON SODIUM CHANNEL IN ACUTELY DISSOCIATED HIPPOCAMPAL CA1 PYRAMIDAL NEURONS OF RATS

Objective To observe the effects of glutamate on sodium channel in acutely dissociated hippocampal CA1 pyramidal neurons of rats.Methods Voltage-dependent sodium currents (INa) in acutely dissociated hippocampal CA1 pyramidal neurons of neonate rats were recorded by whole-cell patchclamp of the brain slice technique when a series of doses of glutamate (100-1000μmol/L) were applied.Results Different concentrations of glutamate could inhibit INa,and higher concentration of glutamate affected greater inhibitio...     

卵母细胞双电极电压钳技术的建立及其记录到的内源性外向电流*

目的：建立卵母细胞双电极电压钳记录技术。方法：建立双电极电压钳技术平台，并应用此平台，在去除滤泡膜的中国四川牛蛙卵母细胞上，记录内源性的外向离子电流。结果：卵母细胞孵育在正常ND96溶液中，将细胞膜钳制在-80 mV膜电位，给予一系列的去极化刺激可诱发出一个外向电流。在细胞外液中加入10 mM的TEA可阻断该电流80%以上，洗脱后电流幅值恢复至90%左右。将正常ND96溶液替换为无钙ND96溶液后，电流没有变化。结论：成功建立了卵母细胞双电极电压钳记录技术。去极化刺激在牛蛙卵母细胞上诱发出的外向电流为钾电流。     

试论精细化管理模式在高等院校实验室管理中的应用

随着科学技术的发展和高等教育办学规模的扩大,如何加强实验室的管理,运用科学手段进行管理,使之在新形势下与高等教育工作任务相适应,对充分发挥实验室在高等教学、科研中的作用,提高实验室的使用效益具有重要的意义。本文在剖析实验室管理的含义、原则、内容基础上,提出实验室精细化管理的内涵及其实施精细化管理的原则。