人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平检测方法的建立

目的：建立实时荧光定量PCR检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平的检测方法,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础。方法：提取人肠系膜动脉组织总RNA,采用RT-PCR方法获取sGCα、sGCβ、GAPDH基因片段,与pMD-18T vector连接,并转化到大肠杆菌DH5α细胞,通过PCR和测序鉴定重组质粒。提取含目的基因的质粒作为标准品,采用SYBR GreenⅠ法检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达和构建标准曲线。结果：人肠系膜动脉平滑肌存在sGCα和sGCβ基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与数据库公布的序列完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2〉0.99。结论：建立了稳定的定量检测方法,并成功用于检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达,构建质粒标准品能用于后续实验。     

“从脾胃论治失眠”经验总结

目的:探讨李中宇教授治疗失眠的方法。方法:总结和分析治疗失眠的经验。结论:黄连温胆汤治疗失眠疗效明显,值得临床推广及运用。     

A型钾离子通道对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响

目的:探究A型钾离子(Potassium,K⁺)通道抑制后对舌鳞状细胞癌株(Tca8113)细胞的影响。方法:全细胞膜片钳技术记录和分析A型K⁺通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP)对Tca8113细胞K⁺电流的影响;MTT检测A型K⁺通道对细胞增殖的作用。结果:在终浓度为2 mmol/L 4-AP作用下,A型K⁺电流的峰值从(267.04±13.84) pA降到(124.81 ±5.24) pA。在一定范围内,不同浓度4-AP能抑制Tca8113细胞在体外的增殖,且抑制程度随药物浓度和作用时间的增加而增强。结论:A型K⁺通道参与Tca8113细胞增殖的过程,且A型K⁺通道阻滞剂能抑制Tca8113细胞的增殖。     

甘肃省放射工作人员辐射剂量-效应关系的研究

整理分析甘肃省放射工作人员2015-2016年职业体检报告及个人剂量监测数据,判断放射工作人员的接触剂量是否具有剂量-效应关系,为制订干预措施提供依据。结果显示,从事介入放射学的工作人员受照剂量较高,其中县级医院从事介入放射学的工作人员白细胞降低率也明显高于医院普放工作人员,差异有统计学意义(P0.05)。提示,放射工作人员县级医院从事介入放射学工作人员和普放工作人员的辐射剂量与效应之间具有剂量-效应关系。     

卵母细胞双电极电压钳技术的建立及其记录到的内源性外向电流*

目的：建立卵母细胞双电极电压钳记录技术。方法：建立双电极电压钳技术平台，并应用此平台，在去除滤泡膜的中国四川牛蛙卵母细胞上，记录内源性的外向离子电流。结果：卵母细胞孵育在正常ND96溶液中，将细胞膜钳制在-80 mV膜电位，给予一系列的去极化刺激可诱发出一个外向电流。在细胞外液中加入10 mM的TEA可阻断该电流80%以上，洗脱后电流幅值恢复至90%左右。将正常ND96溶液替换为无钙ND96溶液后，电流没有变化。结论：成功建立了卵母细胞双电极电压钳记录技术。去极化刺激在牛蛙卵母细胞上诱发出的外向电流为钾电流。     

表达在HEK293细胞上的BKCa通道基本特性与动力学调控研究

目的构建稳定表达人血管平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)的293细胞系,并研究其基本电生理学特征和动力学模型。方法通过脂质体(lipofectamine 2000)转染法转染BKCa表达质粒pcDNA3.1-BKα和(或)pIRES-BKβ1,筛选稳定表达的单克隆细胞系。使用膜片钳多种记录方式研究其基本电生理学特性,同时建立BKCa动力学研究模型。结果构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系,通过膜片钳能够记录到具有与天然细胞BKCa电生理学特性相似的电流,包括大电导特性[内面向外式构型下单通道电导为(216.38±3.55)pS]、电压依赖性、Ca2+依赖性、钾离子选择性和200nmol/L IbTX(BKCa特异性阻断剂)阻断;联合表达β1亚单位能够明显增加通道的开放时程。采用inside-out宏观电流记录方式可以记录到明显的尾电流。可以用于分析通道激活、去激活等动力学模型及药物动力学作用机制。结论成功构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系。膜片钳实验证明具有典型的BKCa电生理学特性,同时建立的细胞系可以很好的用于BKCa通道功能调控研究和动力学参数分析。     

人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa通道在HEK293细胞上的表达方法研究

目的:本研究旨在HEK 293细胞系上成功表达人肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channels,BKCa),建立一种稳定高效表达人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa的HEK 293细胞系方法,进一步揭示在工具细胞表达上的BKCa的基本特性,为以后的诸多实验提供参考价值.方法:应用基因工程技术构建人肠系膜血管平滑肌细胞BKCa通道基因表达载体,用脂质体转染法转染HEK 293细胞,建立了稳定高效表达BKCa通道的HEK 293细胞系的方法.结果:在HEK 293细胞系上表达的BKCa单通道电流的电导值为229.56±4.62 pS,具有电压依赖性,钙离子敏感性等特性;在HEK 293细胞系表达的BKCa全细胞宏观电流具有明显的电压依赖性和外向整流特性.结论:成功建立了一种在HEK293细胞系上表达的BKCa通道的实验方法,并成功记录到BKCa通道的单通道电流和全细胞宏观电流,且与天然细胞上BKCa通道电流特性基本一致.     

人心房组织膜蛋白SK2的提取方法

目的：优化人心房组织膜蛋白提取方法。方法：分步离心法提取心肌膜蛋白,SK2膜蛋白用western-blot检测。结果：BCA检测出蛋白浓度,western-blot检测出蛋白条带。结论：此方法能够提取人心房组织的膜蛋白SK2,该方法简单,稳定,可靠,提取的膜蛋白质量好,浓度高,并能进行下一步的western-blot的实验,以便将来检测SK2膜蛋白在窦性和房颤患者心房组织之间表达的差异。