Grb2在MCF-7 乳腺癌细胞中的核定位研究

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,瞬时转染MCF 7乳腺癌细胞株 ,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况。结果　pDsRed1 C/Grb2质粒有正确的阅读框 ,融合表达蛋白DsRed1 C/Grb2可定位于MCF 7乳腺癌细胞核内。结论　成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,在MCF 7乳腺癌细胞株中 ,Grb2除存在于胞浆外 ,也可定位于细胞核内 ,可能与其参与核内基因的转录调控有关。     

生物化学与分子生物学教学初探

本总结了多年从事生物化学的教学经验，从如何做好准备工作(掌握丰富的专业知识、制定教学目标。因人施教、合理组织教学内容，认真制作多媒体教案)和怎样提高课堂教学效果(激发学生学习生化的兴趣、明确学习目标，抓住规律、采用不同教学方法)这两方面着手，对生物化学教学进行了探讨，希望对生物化学教学有所帮助。     

内毒素诱导小鼠β-防御素-3(mBD3)基因急性时相表达与肝脏损伤的关系

目的：探讨急性时相反应时β-防御素基因表达与内毒素性肝损伤的关系。方法：小鼠腹腔注射内毒素建立急性时相反应。经Northern-blot检测各组织中mBD3mRNA及表达的剂-效、时-效关系。结果：仅在肝脏组织中检测到mBD3mRNA。内毒素诱导mBD3mRNA在肝脏中的表达存在最小诱导剂量。以最小诱导剂量(1．5μg／g)注射后6h才出现mBD3mRNA的表达。8～10h达峰值，12h后表达水平下降。不同剂量内毒素注射后不同时间引起肝脏组织出现不同程度的炎性反应。结论：mBD3基因在肝脏中的急性时相表达与内毒素引起的肝脏组织炎性反应有关。     

从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽

目的 :从噬菌体构象型 7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽。方法 :用重组人BLyS筛选噬菌体构象型 7肽库 ,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆。结果 :经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率增加 ,阳性克隆得到富集。所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性。结论 :获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽。     

一种可溶性单抗ScFv片段的表达及鉴定

目的　利用E .coliHB2 15 1表达结肠癌单抗MC3的单链可变区片段 (Singlechainvariablefragment,ScFv) ,纯化并鉴定其抗原结合活性 ,为结肠癌体内诊断和治疗性研究提供靶向载体分子。方法　利用呈现ScFv抗体的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2 15 1进行可溶性抗体表达 ,经点印迹和Western印迹检测可溶性单抗ScFv的表达水平 ,经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性。用双脱氧法对组成ScFvDNA的VH和VLDNA进行序列测定。结果　可溶性MC3ScFv获得了成功表达 ,表达产物主要位于周质腔中 ,其分子量约为 3 2× 10 3。来自所获得的 3个克隆周质提取物均能抑制单抗与高水平表达MC3结合抗原的AGS细胞结合 ,抑制率分别为 41.19%、3 6.89%、3 3 .77%。对ScFv的VH和VLDNA的测序结果表明所获抗体的可变区基因属IgG1亚族 ,κ型。结论　利用大肠杆菌HB2 15 1成功表达了具有抗原结合活性的MC3ScFv ,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。     

英雄身后有美人——战斗英雄史光柱婚恋曲

因为那场特殊的战争,因为战争后各种媒体的传播,英雄史光柱的事迹在神州大地谁也不会陌生。战争是残酷的,有许多人在血泊中倒下了,丰碑在英雄的墓前竖起来,而同样是英雄的史光柱虽然活着,双目却被战争夺走了光明,他的丰碑也照样竖立着,竖立在人们的心中。都说美女爱英雄。我们无从考证这句话有多大的准确性,但英雄史光柱的妻子却无论如何也是个大美人。皮肤洁白,大眼乌黑,双眉如黛,披肩流淌的秀发,1.70米窈窕的身段,谁能说她张晓君不是一流的     

人IL-16在大肠杆菌中的融和表达

目的 将人IL－16 cDNA克隆至原核融合表达载体Pinpoint^TM Xa-3上，并进行表达研究。方法 含IL－16 cDNA的质粒IL－16／PGEM－3ZF（＋）和Pinpoint^TM Xa－3原核融合表达载体经酶切消化、目的DNA片段的分离、重组连接、筛选、序列分析等系列操作，获得重组质粒Pinpoint^TM－IL－16，将质粒Pinpoint^TMXa-IL-16转化至大肠杆菌JM109，用IPTG诱导表达JM109工程菌，Western blotting检测表达产物。结果 IL－16 cDNA成功克隆至融合表达载体Pinpoint^TM Xa-3,Western blotting检测经诱导含有Pinpoint^TM Xa－IL－16质粒的JM109细菌，有IL－16融合蛋白的表达。结论 成功地表达了IL－16融合蛋白。     

病例教学法在生物化学教学中的评价

第三军医大学近年在临床医学、预防医学和检验医学等不同专业五年制本科的生物化学教学中进行了病例教学法尝试和探索。通过 2 0 0名学生的问卷调查 ,结果表明 :绝大多数学生认为病例教学能激发学习兴趣 ,提高能力 ,并能引导将生化理论与临床问题相联系 ;约有 65%的学生认为病例教学不能提高学习效率。进一步分析发现 ,上述结果在不同专业的五年制学生之间没有明显差异。     

小鼠β-防御素-3基因表达调控的初步研究

目的研究小鼠β-防御素-3(mBD-3)基因的表达及其调控因子.方法通过腹腔注射内毒素(LPS)建立小鼠急性时相反应,经Northern-blot检测mBD3 mRNA表达的组织特异性并分析在肝脏中表达的剂-效和时-效关系,EMSA和South-western blot分析细胞核蛋白中的转录因子.结果内毒素注射后仅在肝脏组织中检测到mBD3 mRNA并存在最小诱导剂量,本实验确定的最小诱导剂量为1.5μg/g(剂量/体重比).以1.5μg/g为诱导剂量,在注射后6h才出现mBD3mRNA的表达,8h、10h达峰值,12h后表达水平下降.肝脏细胞核蛋白中有与mBD3基因调节区特异DNA片段结合的转录因子,分子量在43.0～66.2kD之间.结论小鼠急性时相反应时mBD3基因在肝脏中表达上调,具有剂量和时间依赖性;NF-κB参与β-防御素3基因在肝脏中表达的转录调节.     

大鼠配对前经历吗啡成瘾及戒断对子代焦虑样行为产生的机制

目的 探讨亲代大鼠配对前经历吗啡成瘾及戒断对子代焦虑样行为产生的机制.方法 选用8周Sprague-Dawley大鼠(雌雄各半)建立吗啡依赖模型,自然戒断21d后配对分组合笼,同时建立生理盐水对照组.子代鼠8周时,雌雄各5只取脑通过Golgi-Cox 染色观察子鼠海马CA1区神经元树突形态情况;另外,子代鼠雌雄再各取5只,深度麻醉后取海马组织作全基因组表达谱分析.结果 吗啡成瘾组子代海马CA1区神经元基树突分枝总长度和基树突分支个数低于对照组子代(P＜0.05);吗啡成瘾组子代与对照组子代相比,雄性子代鼠共同表达2倍上调的有663个基因,共同表达2倍下调的有449个基因,雌性子代鼠共同表达2倍上调的有350个基因,共同表达2倍下调的有188个基因;其中与情绪行为调节相关的基因有:5-HT2c受体上调7倍,Igf-2上调7.1倍,reelin表达下调3.3倍.结论 亲代经历吗啡成瘾戒断导致子代海马CA1区神经元树突发育不良,5-HT2c、Igf-2、reelin等基因表达异常,这可能是子代焦虑样行为产生的原因.