生物化学实验教学改革的探索

生物化学是生命科学中发展迅速的学科 ,同时也是医学的重要基础课 ,它的重要性已被越来越多的人所认识 ,同时生化也是一门对实验技术要求很高的学科 ,为了提高实验教学的效果 ,我们教研室近几年来结合我校的实际情况进行了实验教学改革的大胆探索。从实践和从学员反馈回来的信息可以看出收到了良好的效果。现将我们的作法简要总结如下 ,供同行参考。1.精选教学内容 ,突出实验特色生物化学是当代最活跃、最富有生命力的学科 ,现已渗透到各个不同的领域 ,且其新内容、新技术不断涌现 ,因此 ,在教学内容上不能一成不变 ,而要根据本学科的发展 ,…     

生物化学与分子生物学课程必须适应现代化要求

在教学内容、培养学生创新能力、运用多媒体及实验教学等方面采取了一系列改革措施。其目的是提高生物化学与分子生物学教学质量。学生普遍反应良好。     

重组人BAFF112-285的制备及活性分析

目的 制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)胞外区112—285氨基酸残基段(rhBAFF112—285)，为BAFF的深人研究奠定基础。方法 提取人HL-60细胞总RNA，经RT—PCR扩增编码人BAFF胞外区112—285氨基酸残基(BAFF112—285)的cDNA，行序列测定后，构建于原核表达载体pQE—80L并转化大肠杆菌DH5α，经IPTG诱导表达rhBAFF112—285，Ni^2 —NTA层析纯化，进而经^3H—TdR掺人实验检测其免疫学活性。结果 RT—PC双扩增得到了525bp的DNA片段，序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF112—285的cDNA序列一致，该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达，表达水平达细菌总蛋白的45．7％，经纯化后纯度可达98．4％，活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化。结论 利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF112—285，所获纯化产物具有生物学活性，所获结果为进一步研究创造了条件。     

探索教学法在分子生物学教学中的实践研究

近年来，我校在临床医学、预防医学和检验医学等不同专业五年制本科的分子生物学教学中进行了“探索教学法”尝试。通过对300名学生进行问卷调查，结果表明：有90％的学生认为探索教学法能激发学生的学习兴趣，提高思维能力，并能引导同学们将分子生物学理论和临床实际相联系。进一步分析发现，上述结果在不同专业的五年制学生之间没有显差异。     

375例宫颈病变患者高危型人乳头瘤病毒感染的研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(high-risk Human papillomavirus,hr-HPV)感染与宫颈病变的关系。方法选择2005年1月~2006年6月间在本科住院患者375例,采用第2代杂交捕获试验(HC-Ⅱ)进行hr-HPV DNA的检测,手术切除或阴道镜下定位活检,以病理学结果为确诊标准。结果hr-HPV检测阳性169例,阳性率45.07%,各种病理类型的宫颈病变中hr-HPV感染率分别为:慢性宫颈炎14.67%(55/229);宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)50.00%(18/36),包括CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ;宫颈癌(uterine cervix cancer,UCC)87.27%(96/110),包括宫颈鳞癌和宫颈腺癌。随着宫颈病变严重程度的增加,hr-HPV的感染率也增高,它们之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论hr-HPV感染与宫颈病变严重程度密切相关;HC-Ⅱ检测hr-HPV有助于UCC及癌前病变的早期筛查和诊断。     

溴结构域蛋白4抑制剂JQ1在甲醛诱导小鼠炎性痛中的作用及机制

目的 探讨溴结构域蛋白4（BRD4）抑制剂JQ1在甲醛诱导炎性痛模型小鼠脊髓中的表达变化及作用。 方法 32只ICR小鼠随机分为生理盐水组、甲醛注射5 min、30 min和60 min组,每组8只,Western blotting（n=4/组）和Real-time PCR（n=4/组）检测各组小鼠脊髓BRD4的蛋白和mRNA的表达水平;66只小鼠随机分为甲醛注射组,溶媒（DMSO）加甲醛注射组,以及6.25、12.5、25 和50 mg/kg JQ1注射加甲醛溶液组,每组11只,观察BRD4抑制剂JQ1对每组小鼠自发性疼痛的影响（n=11/组）;免疫组织化学（n=3/组）、Real-time PCR（n=4/组）或Western blotting（n=4/组）的方法检测25 mg/kg JQ1对模型小鼠脊髓即早基因c-fos及谷氨酸受体2(GluR2)表达的影响。 结果 甲醛注射后30 min和60 min,小鼠脊髓BRD4的蛋白（P<0.01）和mRNA水平明显升高（P<0.05）;行为学结果显示,25 mg/kg和50 mg/kg JQ1处理组小鼠第Ⅱ相痛反应持续时间与溶媒（DMSO）组相比均明显缩短（P<0.05）; 免疫组织化学及Real-time PCR结果显示,25 mg/kg JQ1干预明显减少小鼠脊髓c-fos的阳性细胞数（P<0.05) 和mRNA水平（P<0.05）,Western blotting结果显示,25 mg/kg JQ1干预明显降低甲醛诱导的小鼠脊髓GluR2（P<0.001）的蛋白表达。 结论 BRD4在炎性痛中枢敏化中起重要作用,JQ1可能是通过抑制疼痛中枢敏化的形成从而缓解炎性疼痛。     

112例儿童流行性腮腺炎临床分析

目的 探讨儿童流行性腮腺炎的临床和流行病学特征,为预防控制该疾病提供依据.方法 对112例儿童流行性腮腺炎病例进行回顾性分析.结果 112例病例好发年龄段为5～10岁;61例无免疫接种史或免疫接种史不详;发病高峰在3～5月份.结论 流行性腮腺炎的临床症状和体征复杂多样;流行性腮腺炎的积极的"三早"治疗是减少传播的有效途径;及时有效的接种、复种流行性腮腺炎疫苗是预防该病的根本方法.     

炎性疼痛致大鼠海马CREB结合蛋白的表达变化

目的　探讨完全弗氏佐剂（Complete Freund’s Adjuvant，CFA）致大鼠炎性疼痛后海马区CREB结合蛋白（CREB Binding Protein，CBP)的表达变化及意义。 方法　大鼠随机分为正常组和实验组，实验组大鼠左侧足底皮下注射CFA和生理盐水混合溶剂100 μl，建立炎性疼痛模型，分为注射CFA后6 h、1 d、3 d、7 d和14 d组。采用Von Frey纤维观察不同时间点大鼠机械缩足阈值（Paw withdrawal
threshold, PWT）的变化；采用免疫组化法检测海马CBP的表达变化。 结果　足底注射CFA后1 h PWT即下降，并在6 h后达到最低值，3 d后逐渐上调，至14 d仍低于基础值。正常组大鼠海马各区均可见CBP大量表达。实验组大鼠两侧海马各区尤其是CA1区和齿状回（Dentate Gyrus，DG）区域CBP的表达随时间点变化呈现出先降低后升高再降低的双相表达趋势，即注射CFA后6 h、1 d，CBP表达下降，至注射CFA后3 d，CBP表达明显上调；7 d时CBP表达再次出现下调，持续至14 d。 结论　 CFA能诱导大鼠产生为期2周以上的炎性痛病程；炎性疼痛时海马区CBP的表达呈现出双相性表达趋势，提示海马区的基因表达变化在炎性疼痛的产生和持续过程中起着重要的作用。     

海马小胶质细胞在小鼠慢性炎性痛所致负性情绪中的形态变化

目的 探讨完全弗氏佐剂（CFA）所致慢性炎性痛小鼠模型情绪及海马小胶质细胞形态的改变。 方法 32只ICR雄性小鼠随机分成生理盐水对照组（NS）和完全弗氏佐剂组（CFA）。右后爪足底注射CFA建立小鼠慢性炎性痛模型。采用Von Frey纤维针测量小鼠右足底注射CFA后机械痛阈的变化;采用旷场实验检测小鼠活动度和焦虑样行为;采用糖水偏好和被迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测小鼠海马小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白抗原（IBA-1）的表达;采用Sholl分析方法分析海马齿状回区小胶质细胞形态变化。 结果 小鼠痛阈评分结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠机械痛阈明显下降（P<0.05）。行为学结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠旷场中央格停留时间减少（P<0.01）,糖水偏好百分比下降（P<0.01）,被迫游泳实验不动时间增加（P<0.001）。免疫组织化学结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠海马齿状回区小胶质细胞数目明显增多（P<0.001）。Sholl分析结果显示,与NS组相比,CFA组小鼠海马齿状回区小胶质细胞交点数目减少（P<0.05）。 结论 在CFA诱导的慢性炎性痛模型中,小鼠的负性情绪可能与海马小胶质细胞形态改变有关。     

ERR1与核受体辅活化子相互作用位点研究

目的分析ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点.方法用常规PCR方法和重叠延伸PCR构建ERR1的各种突变体到表达质粒pGBT9上,通过酵母双杂交实验分析其与已知核受体辅活化子PNRC的相互作用.结果成功构建了ERR1的缺失突变体pGBT9/ERR1 1-412、pGBT9/ERR1 1-144、pGBT9/ERR1 190-412 、pGBT9/ERR1 145-423、 pGBT9/ERR1 190-423、 pGBT9/ERR1 190-423 F232A、 pGBT9/ERR1 190-423 K244A.酵母双杂交实验显示ERR1的氨基酸145-423和190-423 可分别与PNRC相互作用;ERR1 190-423 K244A与PNRC的相互作用明显低于ERR1 190-423;其它突变体与PNRC的相互作用未检测到.结论 ERR1与核受体辅活化子相互作用的位点位于ERR1的配体结合结构域(LBD,aa190-423),ERR1与核受体辅活化子相互作用依赖于其LBD的AF2结构域,AF2结构域外的其它氨基酸F232、K244也对ERR1与核受体辅活化子相互作用起关键作用.