高糖和高胰岛素对影响血管平滑肌细胞舒缩信号分子的作用

目的观察高糖和高胰岛素对几个调控血管平滑肌细胞(VSMC)舒缩功能信号分子的作用,探讨糖尿病并发高血压的分子机制。方法将培养的大鼠主动脉VSMC随机分成对照组、高糖组(葡萄糖浓度25 mmol/L)、高胰岛素组(胰岛素浓度50μU/ml)、高糖+高胰岛素组、生理浓度胰岛素组(胰岛素浓度10μU/ml)、高糖+生理浓度胰岛素组。蛋白免疫印迹法测定细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、小分子鸟苷酸蛋白A(RhoA)、Rho激酶-1(ROCK-1)蛋白表达,比率荧光倒置显微镜检测细胞内钙水平([Ca2+]i)。结果高糖组iNOS、eNOS表达减少,[Ca2+]i升高,RhoA、ROCK-1表达明显升高;高胰岛素组iNOSe、NOS表达明显升高,[Ca2+]i明显降低,RhoA、ROCK-1无明显改变;生理胰岛素组iNOSe、NOS表达明显升高,[Ca2+]i、RhoA、ROCK-1无明显改变;当同时给予胰岛素和葡萄糖刺激时,胰岛素可拮抗高糖对上述4种分子的蛋白表达及[Ca2+]i的增加。结论高糖损害VSMC正常收缩舒张功能,而胰岛素可拮抗高糖对VSMC收缩舒张功能的损害作用。     

代谢综合征大鼠模型的建立及其相关基因表达变化的研究

目的建立与人类代谢综合征(MS)相似的大鼠模型,并分析其相关基因的表达变化。方法雄性8周龄Wistar大鼠30只随机分为普通膳食对照组(NC组)和高脂高盐膳食组(MS组)。喂养期间对大鼠体重、血压、空腹血糖(FPG)、血脂、胰岛素水平等进行连续监测;24周喂养结束进行高胰岛素-正常血糖钳夹试验和腹腔注射糖耐量试验,检测颈动脉血压,测量内脏脂肪重量;取其白色脂肪(肠系膜)、棕色脂肪和骨骼肌组织,以RT-PCR法检测胰岛素敏感组织基因表达变化。结果MS组体重、内脏脂肪、血压、血浆甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)与NC组比较显著增加(P<0·05或P<0·01),且存在严重的胰岛素抵抗[GIR:1·26±0·82mg/(kg·min)vs7·03±1·68mg/(kg·min),P<0·01]和糖耐量减退,表现为典型的MS特征;胰岛素敏感组织基因检测结果显示,与NC组比较,MS组与糖脂代谢和能量代谢相关的23种基因的mRNA表达水平在白色脂肪(肠系膜)、棕色脂肪和骨骼肌组织中多数变化显著。结论长期高脂和高盐饮食喂养可诱导类似于人类MS的基本临床特征大鼠模型,其机制可能与高脂摄入导致大鼠胰岛素敏感组织的糖脂代谢和能量代谢相关基因的变化有关。     

过氧化物酶体增殖物激活受体在代谢综合征大鼠血管重构和功能改变中的作用

目的 研究代谢综合征(MS)大鼠主动脉过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)表达与血管重构和功能改变的关系.方法 健康8周龄雄性Wistar大鼠30只随机分为正常对照组(n=15)和MS组(n=15).MS组大鼠高脂饮食喂养24周建立MS模型.喂养连续期间检测鼠尾血压、血糖、胰岛素、血脂,24周喂养结束行葡萄糖耐量试验和高胰岛素-正常血糖钳夹试验,然后处死动物,取部分腹主动脉组织行HE染色和油红O染色,观察组织形态学改变,用图像分析系统测定内膜及中膜面积;应用多道生理仪测血管反应性,评价血管功能.取主动脉组织采用Western blot方法检测PPARγ、PPARδ和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达.结果 1)MS组体质量、内脏脂肪、血压、血浆三酰甘油(TG)显著增加(P<0.05或P<0.01),且存在严重的胰岛素抵抗[GIR(1.3±0.8) vs (7.0±1.7)mg/(kg·min),P<0.01]和糖耐量减退,表现为典型的MS特征;2)与对照组相比,MS组大鼠主动脉内皮依赖和非依赖舒张功能减退;3)与对照组相比,MS组大鼠主动脉内膜增厚,中膜层平滑肌细胞增殖明显,内膜面积/中膜面积值增高,油红染色显示动脉粥样硬化明显;4)MS组大鼠主动脉PPARγ蛋白表达明显高于对照组,而PPARδ和eNOS表达明显减低.结论 MS大鼠主动脉结构重构明显和舒张功能障碍,血管组织PPARγ蛋白表达增加,而PPARδ表达减低,可能致脂质积聚,加剧炎症反应,并抑制eNOS表达,这可能是MS血管结构和功能改变的机制之一.     

膳食辣椒素预防高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗

目的探讨膳食辣椒素对高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗的预防作用。方法雄性C57BL/6J小鼠30只,按随机数字表法分成3组,每组10只,分别给予普通饮食(normal diet,ND),高脂饮食(high fat diet,HD)和高脂+辣椒素饮食(high fat+capsaicin,HC)。辣椒素的添加浓度为0.01%(质量百分比)。小鼠自8周龄开始给予上述饮食干预,干预时间为20周。每周测空腹血糖、体质量,干预后测葡萄糖耐量、胰岛素耐量,干预结束后取血浆测血脂水平(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇)、胰岛素水平。取内脏脂肪(肠系膜脂肪、肾周脂肪及睾旁脂肪)检测各组小鼠内脏脂肪质量,Western blot检测脂肪组织中瞬时受体电位通道1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)和葡萄糖转运子4(glucose transporter type 4,GLUT4)的表达水平。结果经20周的高脂饮食干预成功复制出小鼠胰岛素抵抗模型,而膳食辣椒素可显著预防高脂饮食导致的小鼠体质量和空腹血糖的升高、葡萄糖耐量异常、血浆胰岛素水平的升高和胰岛素敏感性的下降等胰岛素抵抗的表现;与高脂饮食组小鼠比较,高脂+辣椒素饮食组小鼠的腹内脂肪质量显著低于高脂饮食组小鼠(P<0.01)。Western blot检测提示膳食辣椒素可显著增加小鼠脂肪组织TRPV1和GLUT4的表达水平(P<0.01)。结论膳食辣椒素可能通过上调脂肪组织TRPV1和GLUT4的表达,从而预防高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗。     

正常及肿瘤细胞中参与IL─3基因表达调节的转录因子研究

应用凝胶迁移率分析法，以静止与激活的正常人原代Ｔ淋巴细胞和Ｊｕｒｋａｔ细胞为材料，以ＩＬ－３基因５′侧翼含κＢ样位点的序列为探针，考证ＮＦ－κＢ是否参与ＩＬ－３基因表达的调节。结果表明：①在以ＰＨＡ／ＰＭＡ刺激及未刺激的Ｊｕｒｋａｔ细胞和正常人Ｔ淋巴细胞中，都存在与这一序列结合的蛋白带，其中在刺激后的正常人Ｔ淋巴细胞中出现了一条新的蛋白结合带，而Ｊｕｒｋａｔ细胞中则没有新带型出现，但刺激后的结合带强度显著高于未刺激组。②正常人Ｔ淋巴细胞和Ｊｕｒｋａｔ细胞中，与此序列结合的蛋白带型是不相同的。③当用１５０倍克分子过量的未标记探针与３２Ｐ标记的探针竞争结合核蛋白因子后，从凝胶迁移中清楚地看到Ｊｕｒｋａｔ细胞和正常人Ｔ淋巴细胞中的蛋白带都特异地消失。以上结果提示：①ＩＬ－３基因５′侧翼的κＢ样序列的确存在与之特异结合的蛋白因子，且该蛋白因子的表达是可诱导的。②正常细胞和肿瘤细胞中，与κＢ样序列结合的转录因子是不完全相同的。从而提示：在正常细胞和肿瘤细胞中，ＩＬ－３基因表达调控的机制可能并不完全一致     

瞬时受体电位通道3基因多态性与代谢综合征相关组分的关系

目的 研究瞬时受体电位通道3（TRPC3）基因多态性与代谢综合征（MS）相关组分的关系。方法 收集临床病例246例，其中MS患者95例，高血压（EH）患者99例和糖尿病（DM）患者52例，进行体检和生化检测，用聚合酶链反应-限制性片段多态性方法鉴别TRPC3基因型，分析TRPC3基因多态性在MS组、EH组和DM组中的分布及与代谢综合征相关组分的关系。结果 （1）TRPC3基因多态性GG、AA、A／G型在MS组、EH组和DM组中的分布频数无明显差异；（2）246例患者中GG型的空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、游离脂肪酸（FFA）明显高于AA和A／G。结论 TRPC3的基因多态性在3组代谢疾病中的分布频数无明显差异；其中GG型可能与空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、游离脂肪酸（FFA）有更密切的关系。     

固化瘤苗类PHA与类IL-2作用的发现

关于肿瘤是否存在特异性抗原(TSA)的探索近100年。究其主要原因与人类癌细胞的特异性弱抗原和多克隆性相关抗原混合粗制瘤苗产生的“免疫二重性”使临床应用陷入疑惑而被废用。固化瘤苗的基础研究，得到国内外有关学术界承认后，由研究所 提供首创性研究实现了固化瘤苗(STV)的精制。该肿瘤固化免疫因子     

一种简单、高效的小分子量DNA沉淀法

沉淀是浓缩核酸最常用的方法。通过核酸沉淀可以改变核酸的溶解缓冲液 ,重新调节核酸在溶液中的浓度 ,还可以去除溶液中某些盐离子与杂质 ,达到纯化核酸的目的[1] 。　　大分子量核酸样品的沉淀方法很多 ,操作简单、效果比较好。而小分子量ＤＮＡ(特别 <5 0ｂｐ的寡聚核苷酸 )的沉淀方法往往依赖于高速或超速冷冻离心机 ,且操作步骤繁锁 ,一般实验室难以满足实验条件[2 ] 。本文介绍一种简单、有效的小分子量ＤＮＡ沉淀方法 ＺｎＣｌ2 沉淀法 ,具体操作步骤如下 :①准确测量ＤＮＡ样品的体积 ;②加入 0 .0 5倍ＤＮＡ样品体积的 1ｍｏｌ/Ｌ…     

Blockage of PPARδ increases the expression of inflammatory factors in 3T3-L1 cells stimulated with TNFα

Objective: To investigate the role of peroxisome proliferator-activated receptors δ (PPARδ) in inflammatory reaction and its possible mechanism in adipocyte. Methods :Lentivirus-mediated RNA interference (RNAi) was used to block the expression of PPARS in 3T3-L1 cells. In order to induce inflammation in 3T3-L1, cells were stimulated with tumor necrosis factor-α(TNFα, 20 ng/ml) for 4 h. The expression of PPAR8, nuclear factor κB (NFκB) and C reactive protein (CRP) were determined by Western blot analysis. Results:The expression of PPARδ was reduced by 80% after RNAi. Blockage of PPARδ promoted the expression of CRP and NFκB in cells stimulated with TNFα, but had no effect on normal cells. Conclusion: PPARδ is involved in inflammatory reaction in adipocyte. Blockage of PPARδ can promote the inflammation mediated by inflammatory factors and increase the expression of NFκB and CRP in 3T3-L1 cells stimulated with TNFα.     

应用SoftLinkTM Soft Release Avidin树脂亲和层析纯化融合IL-16蛋白

目的 分离、纯化大肠杆菌中表达的融合ＩＬ－１６蛋白。方法 采用ＳｏｆｔＬｉｎｋ＾ＴＭＳｏｆｔＲｅｌｅａｓｅＡｖｉｄｉｎＲｅｓｉｎ亲合树脂分离,、纯化由大肠杆菌产和的生物素化融合ＩＬ－１６蛋白。结果 融合ＩＬ－１６蛋白成功地在该系统中被分离、纯化,每升细菌培养物可获得１．４ｍｇ重组融合蛋白,纯化蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和毛细管电泳检测均为１条蛋白质量,结论 此系统纯化ＩＬ－１６融合蛋白操作方便,快捷,