mmu-miR-294调控MMP3靶基因对LLC细胞侵袭迁移的影响

目的 预测并验证小鼠mmu-miR-294调控的靶基因,探讨其在肺癌发生发展中的生物学功能.方法 生物信息学预测mmu-miR-294可能调控的靶基因金属蛋白酶(MMP3),双荧光素酶检测验证mmu-miR-294调控MMP3的真实性；脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物进入Lewis(LLC)细胞株,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变.结果 重组质粒经XbaⅠ单酶切能获得约5000 bp和100 bp的酶切片段,阳性克隆测序,双荧光素酶报告基因检测证明合成寡核苷酸链序列插入正确；脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物,过表达实验组MMP3蛋白水平较对照组明显降低.转染mmu-miR-294模拟物后LLC细胞的侵袭迁移能力显著降低(P＜0.01).结论 低表达mmu-miR-294有助于维持LLC的侵袭转移特性,增加其表达水平可以有效抑制LLC的侵袭迁移能力.mmu-miR-294可能通过调控其靶基因MMP3表达而发挥功能.     

医学英语教学中对学生跨文化交际能力的培养

医学英语是医学生应掌握的国际交流的工具,但目前不少医学英语教学实践纯粹围绕语言知识的展开,教学效果不佳。本文探讨了将文化内容引入医学英语教学中,培养学生的跨文化交际能力,从而促进学生的医学英语学习,并且为将来积极有效地参与专业性的国际交流打下基础。     

医学博士生英文SCI论文写作课程的开设

在医学院校博士生中开设英文SCI论文写作课十分必要。第三军医大学在该课的课程设置上以学习者的需求为导向,确立了符合学习者实际情况的课程目标、课程内容、教学模式等。同时,采取了＂以写促学＂的课堂教学模式和＂课堂教学＂与＂课外讲座＂相结合的立体化研究生英文SCI论文写作课程体系,为医学院校优化该课程的设置提供了借鉴。     

Livin异构体基因转染对肺腺癌A549细胞生长及放化疗敏感性的影响

目的研究转染Livin α、β两种异构体基因对肺腺癌A549细胞生长及放、化疗敏感性的影响。方法基因转染获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆，逆转录一聚合酶链反应及免疫荧光化学法了解Livin α、β在转染细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况；用平板克隆形成实验研究细胞生长情况；甲基偶氮唑蓝法研究细胞对放、化疗的敏感性；细胞周期分析法了解细胞凋亡情况。结果与转染前比较，基因转染后，阳性细胞尤其是表达Livin α的A549细胞克隆形成能力提高约20％、倍增时间缩短5～6h（P〈0．05），对多种化疗药物和放射线敏感性降低（P〈0．01），10Gy放射线照射下仅有0．2％细胞发生凋亡。结论Livin尤其是Livin α参与肺癌的发生发展，是肺癌细胞对放、化疗耐受的重要机制之一。     

噬菌体展示EpCAM单链抗体及免疫原性初步研究

目的利用噬菌体展示技术进行鼠抗人EpCAM单链抗体表达并鉴定其免疫活性,构建特异靶向上皮来源肿瘤细胞及癌干细胞的单链抗体。方法采用全基因合成的方法合成VL+Linker+VH的EpCAM的单链抗体(ScFv)基因,克隆到pMD19-T简易载体中,将ScFv基因酶切并纯化后克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E,热休克法转化至感受态的大肠杆菌TG1,随机挑取5个克隆,经辅助噬菌体超感染,形成鼠抗人EpCAM噬菌体单链抗体,用ELISA(以P/N>2判定为阳性)和免疫细胞化学法测定其抗原结合活性。结果成功获得pCANTAB-5E/EpCAM ScFv重组克隆,经ELISA和免疫细胞化学测定,噬菌体展示阳性率为20%,展示的单链抗体能与EpCAM抗原和A549细胞特异性结合。结论噬菌体展示技术制备EpCAM单链抗体方法简便、省时、高效。     

NF-κB参与小鼠β-防御素3基因急性时相表达的转录调节

目的分析急性时相反应时调节小鼠β-防御素3基因表达的转录因子.方法通过腹腔注射外源性脂多糖(LPS)建立小鼠急性时相反应,经Northern blot方法检测mBD3mRNA在组织中的表达;EMSA和Southwestern blot分析细胞核蛋白中的转录因子.结果内毒素注射后仅在肝脏组织中检测到mBD3mRNA;肝脏细胞核蛋白中有与mBD3基因调节区特异DNA片段结合的转录因子,分子量在(43.0～66.2)×103之间.结论小鼠急性时相反应时NF-κB参与β-防御素3基因在肝脏中表达的转录调节.     

医学院校研究生学术英语写作教材编写研究

医学全球化背景下,运用学术英语（English for academic purposes,EAP）撰写论文成为我国医学研究生面临的挑战。而自编教材的缺乏是制约EAP教学效果的一大瓶颈。研究基于复合型人才团队,以EAP理论为指导,对医学院校研究生开展深度需求分析,结合体裁分析理论设计教材框架,根据自建语料库确定材料筛选原则,最后编写完成适用于医学院校研究生的EAP写作教材。教材编写研究过程及教材本身有望为其他学科EAP教材编写提供借鉴,从而促进我国研究生教育的全面发展。     

基于基因芯片的乳腺癌干细胞miRNAs检测分析

目的 利用流式细胞仪(FACS)细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF-7中分选乳腺癌干细胞,并利用基因芯片进行其miRNAs表达谱分析.方法 利用已知的乳腺癌干细胞的表面分子标志(CD44 ESA CD24-/low),以相应的荧光标记抗体对细胞加以标记,FACS细胞分选获得乳腺癌干细胞,NOD-SCID移植瘤实验进行干细胞功能鉴定;分别提取细胞总RNA以及小分子RNA,经荧光标记后与miRNAs基因芯片杂交,获得乳腺癌干细胞miRNAs表达谱.结果 从MCF-7中分选到约1%的CD44 ESA CD24-/low细胞,NOD-SCID移植瘤实验表明其具有干细胞特性,基因芯片杂交获得20个乳腺癌干细胞相关miRNAs,其中4个为低表达,16个为高表达.结论 乳腺癌干细胞具有自身特征性miRNAs,为进一步从干细胞层面研究乳腺癌发病机制及靶向治疗打下基础.     

乳腺癌miRNAs表达谱检测及初步分析

目的 制作哺乳动物micro RNAs(miRNAs)检测微阵列,筛选乳腺癌miRNAs表达谱并进行初步分析.方法 利用已知的人及小鼠的miRNAs序列,设计了496条探针,制作miRNAs微阵列并验证其可靠性;培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,经T4RNA连接酶荧光标记后与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得乳腺癌miRNAs表达谱.结果 成功制作哺乳动物miRNAs微阵列,筛选获得57个乳腺癌相关miRNAs,其中,29个为低表达,28个为高表达.结论 建立了哺乳动物miRNAs检测微阵列的技术平台,并筛选到乳腺癌miRNAs表达谱,为进一步研究其在乳腺癌发病机制中的作用打下基础.     

Transfection of gene Livin α/β into A549 cells and separate effect on the cell growth

Objective ：To express two Livin isoforms （Livin α ＆ β genes） with transfection techniques in A549 cell line respectively in order to observe their effect on growth of cell line. Methods ：Two eukaryotic expression vectors of l.ivin, pcDNA3.1-Livin α ＆ β, were transfected into A549 cell line by electroporation. Then G418 resistant clones were screened. RT-PCR, Northern blot and immunofluorescence cytochemistry were used to detect Livin α ＆ β expression level in the transfected cells. Finally, observation of cell morphology, growth curve assay and colony formation analysis were performed to explore the effect of Livin on growth of the cells. Results：Livin α ＆ β were expressed in transfected A549 cells, and induced a faster cell growth, shorter doubling time and stronger cell colony forming ability, yet had no morphology change. Conclusion：Both isoforms can accelerate the growth of A549 cells, indicating a close relationship between Livin expression and the genesis and development of lung cancer. The expression of Livin α ＆ β in A549 cells provides basis for further study of their different biological functions of anti-apoptosis and of their role in lung cancer cell resistance to radiotherapy and chemotherapy.