SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的快速、高效制备的方法研究

目的探讨制备和鉴定SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体(mAb)快速免疫方法。方法用基因重组SARS冠状病毒N蛋白和足垫免疫2周的BALB/c小鼠制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果筛选出4株抗SARS冠状病毒N蛋白mAb杂交瘤细胞株,ELISA间接法和免疫荧光证实这组单克隆抗体仅与SARS冠状病毒特异性反应,而与其他病原体无交叉反应,IgG亚类鉴定2株为IgG1,另2株分别IgG2a和IgG2b。2株抗体亲和常数分别为4.14×10-9 M和3.19×10-9 M。结论获得特异性针对SARS冠状病毒的单克隆抗体,为SARS的早期诊断、蛋白组学和发病机制的研究奠定了基础。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体在SARS尸检组织中的表达

目的观察SARS死者的尸检组织中SARS冠状病毒(SARS-CoV)的存在与分布情况。方法应用免疫组化技术检测4例尸检标本肺、脾脏、淋巴结、脑、垂体、心、肝、肾、胰腺、气管、食道、胃肠道和骨髓等组织的SARS-CoV N蛋白。结果肺泡上皮、肺、脾、淋巴结内浸润的单核细胞/巨噬细胞、脑神经元、肝细胞、肾远曲小管上皮细胞、胰腺腺泡细胞、垂体嗜酸细胞、甲状旁腺嗜酸性细胞、肾上腺皮质细胞、气管及支气管浆液腺上皮细胞、食道粘膜鳞状上皮、胃肠道柱状上皮细胞及胃壁细胞、骨髓早幼粒细胞及小静脉内皮细胞等细胞质内SARS-CoV N蛋白单克隆抗体均为阳性。结论SARS-CoV可侵犯全身多种器官和组织。SARS-CoV N蛋白单克隆抗体在胃肠道、肾远曲小管及汗腺细胞内的阳性表达,对研究SARS-CoV传播途径具有重要意义。     

恶性肿瘤治疗的新策略—基因—病毒治疗

本文较系统地介绍了几种增殖病毒治疗肿瘤的最近进展。目前最为有效的增殖病毒是ONYSX-015,它与常规化疗联合,可产生令人鼓舞的临床疗效。但单独应用,其病毒杀伤力仍不足,从而提出了一种新型的肿瘤治疗新策略。即基因-病毒治疗法,该方案充分利用增殖病毒及基因治疗的优势,它可能成为肿瘤治疗最有效的方案之一。     

共刺激分子CD28单克隆抗体制备的新策略

目的 发展一种制备抗人CD28单克隆抗体的新方法。方法 构建编码人CD28基因的逆转录病毒表达系统,感染BALB／c小鼠骨髓瘤细胞NS－1,使其细胞膜表达CD28抗原并用于免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果 获得分泌抗人CD28单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为E66－3S,IgG亚类鉴定为IgG1。该株单抗能够特异性识别CD28阳性的T细胞,并完全阻断标准CD28抗体与细胞表面CD28抗原结合。在亚剂量分裂原的共刺激下,具有促进T淋巴细胞活化和增殖作用。结论 E66－3S具有高度特异性和共刺激活性,为临床免疫治疗奠定了基础,同时,也为进一步制备其它膜抗原的单克隆抗体提供了一种新途径。     

SARS冠状病毒刺突蛋白的研究进展

SARS冠状病毒S蛋白是病毒颗粒最大的结构蛋白和最重要的表面抗原。该蛋白在介导病毒颗粒与宿主细胞受体结合、融合的过程中起着关键作用。它是病毒中和性抗体的靶点,在疫苗研究和抗病毒治疗研究中均占有重要地位。本文就SARS流行以来有关S蛋白的研究作一综述。     

氯霉素乙酰基转移酶融合蛋白表达、纯化和鉴定

目的对氯霉素乙酰基转移酶(Chloramphenicol acetyltransferase,CAT)基因进行表达和纯化.方法通过PCR扩增编码CAT氨基酸序列的基因片断,并将之克隆入pGEX-2T载体.IPTG诱导蛋白融合表达,产物经琼脂糖亲和层析树脂纯化.免疫印迹鉴定纯化蛋白的抗原性.结果筛选得到的重组子诱导后表达相对分子质量约为52 600的CAT融合蛋白.树脂纯化及酶切后均得到高纯度的蛋白样品.纯化蛋白能与抗CAT抗体特异结合.结论本研究获得了CAT基因的融合表达蛋白,并对其完成纯化,为制备抗血清和抗体打下基础.     

携带IL-12的增殖腺病毒对鼻咽癌细胞的杀伤作用

目的：肿瘤选择性增殖腺病毒携带小鼠白细胞介素12（mIL-12)基因，增强对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法：用非增殖腺病毒Ad-LacZ测定腺病毒对鼻咽癌细胞CNE3和915的转染率，用E1B－55000u蛋白缺失的腺病毒dl1520和E1B－55000u蛋白缺失的腺病毒CNHK200－mlIL12分别转染培养的CNE3和915，并瘤内注射到裸鼠皮下的CNE3移植瘤。结果：Ad-LacZ病毒数量与细胞数量之比（MOI）为100时，转染率分别为63％和56％；MOI为10时，分别为12％和8％。 在体外不加入淋巴细胞的条件下，CNHK200－mIL和dl1520在MOI为100时都可在7d内完全杀灭鼻咽癌细胞CNE3和915。对裸鼠CNE3移植瘤，CNHK200－mil12治疗组疗效显著高于dl1520治疗组（P＜0．05） ，表明在选择性腺病毒中插入mIL12增强了其杀伤功能。结论：选择性增殖腺病毒携带mIL12后能够增强病毒对鼻咽癌细胞的杀伤作用，为鼻咽癌临床治疗探索一种新的基因病毒治疗方法。     

重组SARS冠状病毒棘突蛋白S1区基因片段的克隆、表达及免疫原性研究

目的构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)棘突(spike)蛋白(S蛋白)S1区基因(40～2001bp)分段表达载体,并研究其免疫原性。方法利用PCR技术扩增S1区基因,将其定向插入pQE30质粒,在pQE30质粒上将S1切成3段(40～751、746～1344、746～2001bp),均插入pQE30质粒,构建质粒在大肠埃希菌M15中表达,表达产物经亲和层析纯化及WesternBlot和ELISA鉴定。结果构建的3种重组质粒(pQE30/S1a、pQE30/S1b、pQE30/S1c)均高效表达,重组蛋白相对分子质量分别为26700、22500和46000,表达量分别占菌体总蛋白质的35%、35%和30%。3种重组蛋白经Ni亲和层析树脂得到成功纯化。经Western-Blot及ELISA证实,重组蛋白片段S1c(746～2001bp)可以被SARS患者血清所识别。结论成功构建了SARS-CoVS蛋白S1区基因分段表达载体,重组蛋白S1c具有较强的免疫原性,它的获得为下一步疫苗的研制奠定了基础。     

肺吸虫病42例临床分析

本文报道主要来自陕西省的肺吸虫病42例,临床表现为多组织器官损害,有游走性皮下包块23例(54.8%),胸部X线异常36/40例(90%),肝脏损害24/35例(68.6%),中枢神经系统损害5例(11.9%),心包损害3例(7.1%),血液、脑脊液及胸水中嗜酸性粒细胞增高。本病临床表现复杂多样,容易与其他疾病相混而造成误诊。提出加强对本病临床特点认识,重视流行病学史,以期早诊断和治疗。     

抗人NGF单克隆抗体的制备及初步鉴定

神经营养因子（　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ，　ＮＴＦｓ）是一类对中枢和外周神经系统均有营养活性的蛋白质，其主要功能是促进神经系统的发育，保护并修复受损神经元，以及促进生长和增进认知记忆过程中神经元之间的连结［］。神经生长因子（ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，　ＮＧＦ）是发现最早、研究最多的一种ＮＴＦ。制备抗ＮＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）可为研究其在体内组织中表达及分布提供一种工具，并可为基因工程制备ＮＧＦ提供检测方法。我们受澳大利亚Ｆｌｉｎｄｅｒ大学周兴福教授委托，研究制备了分…